低强压下hene激光对功能性前伸大鼠下颌髁突改建的影响及vegf表达变化的研究

1、低强压下He-Ne激光对功能性前伸大鼠下颌髁突改建的影响及VEGF表达变化的研究 中图分类号 学校代码硕士学位论文影响及表达变化的研究作者 彭馨学科 口腔临床医学研究 口腔正畸学院 口腔医学院指导 姓专方氛教名业向所师 雷勇华教授论文辩论日期 辩论委员会主中 南大 学年月原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的奉献均已在论文中作了明确的说明。作者签名: 日期:立立年

2、月互日望叠学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保存学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或局部内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到?中国学位论文全文数据库?,并通过网络向社会公众提供信息效劳。期:丛年月兰日中南大学硕士学位论文 中文摘要低强度激光对功能性前伸大鼠下颌髁突改建的影响及表达变化的研究中文摘要实验目的:评价低强度?激光对髁突软骨改建的影响,本实验以大鼠为实验对象,制作安氏类错牙合畸形的功能性前伸下颌矫治模型,显微测量

3、髁突软骨厚度,并运用免疫组化的方法检测的表达情况。实验方法:选用周龄雄性大鼠只,随机分成实验组、对照组和空白组、天。实验组及对照组大鼠上切牙用磷酸锌水门汀粘斜面导板,并用正畸透明压膜材料制作颈圈以防止大鼠前爪及后腿破坏斜面导板。实验组大鼠戴上斜面导板后即刻用的.的氦氖激光. 照射颞下颌关节区,每天一次,每次分钟/侧,每只双侧照射。对照组大鼠仅佩戴斜面导板及颈圈,不接受激光照射。空白组大鼠无任何实验处理。所有实验动物均软食饲养,自由饮水,置于恒温实验环境。实验后、天分别取双侧髁突,放于。恒温冰箱中,用%多聚甲醛固定,%脱钙天,再逐级酒精脱水,石蜡包埋。石蜡切片进行染色,测量髁突软骨厚度;免疫组化

4、方法检测的表达。实验结果:中南大学硕士学位论文 中文摘要、根据磨牙关系可见实验组及对照组大鼠下颌前伸后咬合无偏斜,平均前伸量无统计学差异。、功能性前伸下颌后引起大鼠髁突软骨厚度的变化。镜下见实验组及对照组比空白组关节后间隙增宽,前间隙缩窄,软骨中份和后份细胞体积增大,软骨层厚度增加,肥大层和成熟层细胞核肥大深染,细胞间质增加。、实验组与空白组髁突天即呈现出明显差异,而对照组直到实验后天才能出现统计学意义。实验组与对照组相比髁突软骨中份、后份天组及天组增厚显著。、阳性显色表现为软骨细胞的胞浆、包膜均可见棕黄色深染颗粒。染色分布于髁突软骨的肥大层及成熟层;增殖层弱表达,纤维层未见阳性表达。实验组髁

5、突软骨中份、后份的表达增强,第天即与空白组出现差异,而对照组一直到第天组才与空白组出现有统计学意义的差异,且实验组与对照组相比拟,在第天组及第天组,的平均光密度值明显增强,.,有显著统计学意义。实验结论:、对下颌前伸的大鼠颞下颌关节应用低剂量的.激光,可以加速髁突软骨的改建。、.激光使下颌前伸的大鼠髁突软骨表达增加,加速骨替代软骨的进程,促进邻接区域骨中血管向软骨侵入,从而加中南大学硕士学位论文中文摘要速软骨的改建,促进下颌骨生长,为缩短功能性前伸下颌时间提供了新的可能。关键词:.激光,下颌前伸,颞下颌关节,髁突软骨,中南大学硕士学位论文英文摘要,. , ,:, . . , ,., ,. ?

6、, ., .,., ,.,. ,. , , , ? .:, ,.,. ., . /., ,.,. 。, . , ,. ,%, .,.?中南大学硕士学位论文英文摘要:、 .、., .,.、 , .,.、 , . . , . .:、耶 .、 ,. .:,目 录中文摘要?.英文摘要缩略词表?.实验一低强度激光对功能性前伸大鼠下颌髁突改建的影响前言?. 日舌?.实验设计结果?.讨仑?.结论?.实验二低强度激光对功能性前伸大鼠下颌髁突表达变化的研究前言?.实验设计?.结果讨论结论全文总结?.参考文献?.综苤?.激光在口腔医学的应用?.致射?缩略词表中文全称缩略词 英文全称氦氖激光?二氨基联苯氨链霉亲和素

7、生物过氧化物酶.复合法 磷酸盐缓冲液 血管内皮细胞生长因子颞下颌关节低强度激光治疗。 : 钇铝石榴石晶体掺铬铒钇钪镓石榴石晶体:实验一中南大学硕士学位论文建的影响前言安氏类错牙合畸形是我国常见的一种错牙合畸形,以下颌发育缺乏最为常见。根据中华口腔医学会年对全国七个地区的,名儿童及青少年的错牙合畸形患病率调查,乳牙期安氏类错牙合畸形的患病率为.%,替牙期类错牙合畸形的患病率为.%,恒牙初期类错牙合的患病率为.%。同期第五次全国人普查说明,年我国?岁的儿童及青少年有.亿人,占总人口的.%【,由此可以粗略估计安氏类错牙合畸形在我国患病人数数量可观。严重的错牙合畸形往往不仅局限于牙齿排列和牙合关系的异

8、常,还常伴有骨骼的改变。.【】认为安氏类错牙合畸形中%以上都是由于下颌发育缺乏所致,我国学者伍军、徐宝华对例恒牙初期安氏错牙合患者进行研究,得出了类似的结果,真性上颌前突只占%,局部病例甚至上颌后缩,%的错牙合伴有下颌后缩,即安氏错牙合以下颌发育缺乏占多数【】。因此治疗安氏类下颌骨发育缺乏的骨性错牙合畸形任重道远。功能性矫治器治疗安氏类错牙合可以利用生长发育期儿童自身的生长潜力,逐渐移动下颌向前,矫正下颌后缩,使面部协调美观。但是功能性矫治器治疗时间相对较长,如何能在保证效果的前提下最大限度的缩短佩戴时间是许多学者不断研究探讨的方向,其中颞下颌关节是研究的重点。颞下颌关节由颞骨关节面、关节盘和

9、髁状突组成,是面部唯一的联动关节,对颌面部的功能发挥着重要的作用。髁突作为颞下颌关节的重要组成局部,是下颌骨生长发育的中心。有别于其他关节来源于中胚层的间充质细胞,髁突软骨细胞是由神经嵴细胞的颌突外胚间充质细胞分化为前成软骨细胞,然后再由软骨前体细胞最终分化成为成熟的肥大软骨细胞覆盖在关节外表。本实验将探讨低强度激光是否可以加速髁突软骨的改建,从而缩短正畸治疗时间。实验一中南大学硕士学位论文实验设计.材料和方法选取周龄雄性大鼠只长沙斯莱克景达实验动物有限公司提供,体重。随机分成实验组、对照组及空白组各只。三组再随机分成天、天、天、天组,每组各只。实验组及对照组大鼠,腹腔注射水合氯醛./麻醉后,

10、佩戴自制自凝塑料的上颌斜面导板,使大鼠下颌前伸,磷酸锌粘固。实验组大鼠佩戴自制的上颌导板后,立即接受激光照射,每天一次,每次双侧各分钟,实验周期分别为天、天、天、天。激光功率,照射部位颞下颌关节区域直径,激光密度./。对照组大鼠处理同实验组,但不接受激光辐照。空白组大鼠无任何处理。所有动物均自由饮水,软食喂养,置于恒温实验环境。各组实验周期结束时,水合氯醛麻醉下经主动脉灌注液洗去体循环的血细胞,约/只,断头法取大鼠双侧颞下颌关节,再用%多聚甲醛溶液固定小时,%溶液脱钙天,期问存放于恒温冰箱中,更换液两次,梯度酒精、异丁醇和正丁醇脱水,石蜡包埋为保证切面为矢状向颧弓外侧必须与石蜡底部平行,由外向

11、内连续切片,片厚,染色,光镜观察。图.实验大鼠 图. 实验激光电潦实验一中南大学硕士学位论文图. 大鼠髁状突组织学由表及里分为【】:纤维层,增殖层,成熟层,肥大层,钙化软骨层结果实验组,对照组大鼠佩戴功能性矫治器后下颌处于持续前伸状态,下颌位置无左右偏移,不影响迸食软性饲料。鉴于测量大鼠下颌前伸量受多种因素影响,我们仅就组织学进行分析。根据磨牙关系可见实验组及对照组大鼠下颌前伸后咬合无偏斜,平均前伸量无统计学差异。功能性前伸下颌后引起大鼠髁突软骨厚度的变化。镜下见实验组及对照组比空白组关节后间隙增宽,前间隙缩窄,软骨中份和后份,细胞体积增大,软骨层厚度增加,肥大层和成熟层细胞核肥大深染,细胞间

12、质增加。实验组与空白组髁突天即呈现出明显差异,而对照组直到实验后天才能出现统计学意义。实验组与对照组相比髁突软骨中份、后份天组及天组增厚显著。实验一中南大学硕士学位论文主要仪器:北大物理系工厂.型氦氖激光器德国生物组织包埋机洲,德国石蜡切片机,德国展片机德国烤片机共聚焦显微镜 德国尼康科研级显微镜 日本电热恒温鼓风枯燥箱 上海新苗医疗器械厂江苏金坛金城国胜实验仪器厂.调速多用振荡器.三用电热恒温水箱 天津市泰斯特仪器.实验步骤染色步骤:脱蜡:二甲苯脱蜡分钟×次:逐级酒精脱水:%酒精分钟×次;%酒精分钟×次;%酒精分钟×次;%酒精分钟×次;冲洗分

13、钟;苏木素染色分钟,自来水冲洗分钟:伊红染色分钟;%酒精秒;%酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。.实验测量软骨厚度测量【】: 倍镜下,测量髁突软骨的中份、后份的软骨厚度。测量的起点以髁突软骨前部出现成熟层软骨细胞处开始,向后延续至软骨消失处为测量的终点,将此区域人为地三等分为软骨的前份、中份、后份。然后将前、中、后三个局部平均四等分,得到三个等分点,测量各局部三个等分点所在位置的软骨厚度,并取平均值。统计学分析:将结果实验组、对照组及空白组进行检验,.为有统计学意义。中南大学硕士学位论文 实验一一图. 髁突软骨染色倍天实验组; 天对照组; 天空白组; 天实验组; 天对照组;天空白组;天实验组

14、;天对照纽; 天空白纽;天实验组; 天对照组; 天空白组:实验一中南大学硕士学位论文四三一三,罚娶?§寒 实验时问中南大学硕士学位论文实验一囵丈筝四囊目窆 §掌实验时阅图.及表.中半代表实验组与对照组相比具有统计学意义;代表实验组与空白组相比有统计学意义;撑代表对照组与空白组相比具有统计学意义:实验组髁突形态变化实验组髁突软骨:位于髁突外表的光滑的胶原纤维,纤维层增厚;增殖层细胞排列更加紧密,细胞小而密集,核浆比例增大,层数增加;成熟层细胞体积变大,核浆比例增大,细胞间质增加,层内细胞排列无规律。肥大层,细胞体积较成熟层细胞体积增大,排列无规律,破骨细胞数量增加。钙化软骨层

15、位于骨小梁之上,软骨加速成骨。讨论在正畸治疗过程中,广阔患者迫切的要求缩短治疗时间,多种不同的方法都有在动物实验和临床中尝试。在正畸牙粘膜下注射前列腺素【,注射甲状旁腺素聃,注射皮质醇激素阳,注射骨钙素 ,另外还有很多学者尝试用中药类药物来加速骨改建,如丹参等?】,都可观察到正畸牙移动速度加快。然而,无论是中药抑或是西药,都无法防止药物应用的局限性以及随之而来的副作用 。因而越来越多的学者转向对机体更为温和无创的加速方法【,】。低强度激光在大量体内及体外实验都已经证实可以显著减少正畸牙齿移动的时间【引,且对机体无任何副作用。在应用波长的激光提高了正畸病人牙齿移动速度。 观察到低强度激光加速上颌

16、快速扩弓后骨小结形成,有利将激光应用于基质矿化、血管化及骨改建,缩短扩弓治疗时间。.实验一中南大学硕士学位论文到正畸牙齿移动后的保持阶段的研究中,低强度激光作为无创伤性的方式,辅助短期佩戴保持器可以显著缩短正畸术后的保持时间及增加牙齿移动后的稳定性,同时研究也说明,牙齿移动后仅接受激光照射不佩戴保持器会增加术后的复发可能性,推断低强度激光对骨的活泼作用。临床广泛应用功能性矫正器将下颌从原来后缩的位置引导至前伸的位置,从而刺激下颌骨的生长,矫治下颌后缩的问题。理论上讲,被动处于前伸位的髁突直接的关系到下颌骨生长量的增加。髁突前伸的同时间接调整了附着于颞下颌关节周围的韧带肌肉张力,因而也会问接对下

17、颌生长起到促进的作用。事实证明,通过生长改进治疗可以刺激下颌加速生长,但能否使下颌生长长期增加却存有争议引。本实验选择周龄雄性大鼠的原因在于以下三个方面:第一:研究说明大鼠髁突根据其软骨细胞的大小、排列紧密程度及基质钙化程度的不同,呈现出明显的层域化特点,这种组织形态与人类的髁突近似。运动类型上,大鼠的颞下颌关节可做前伸运动,升降运动和侧方运动同样与人类颞下颌关节运动类似【州;第二,全部选择雄性大鼠可以防止雌性大鼠因激素周期性波动而对实验可能产生的影响;第三,下颌后缩的安氏类错牙合病人下颌骨改建在青春生长迸发期时对功能性矫正器的刺激最为有效。周龄的大鼠正好处于生长发育迸发期可以代表治疗的理想年

18、龄阶段。故鉴于以上三个原因大鼠可以作为良好的实验动物选择。本实验应用上颌斜面导板是一种简单的固定功能矫治器,使下前牙沿着导板斜面向前上方滑行约?,向前移动下颌及髁状突在关节凹内的位置,从而刺激下颌生长,是常用的治疗安氏类错合的功能性矫治器【,。为了避免活动矫治器易脱落的问题,全天戴用的固定性矫治器可以很好的解决这个困扰,持续性导下颌向前,制作简单,过程方便且保证了矫治的效果。但存在的缺点是饲养动物不能正常进食实验中常用的硬质固体饲料,只能进软食。在实验分组方面,本实验采用了三个组:空白组,实验对照组,实验组。这三组依次代表了正常大鼠组,单纯受力组,及受力激光组,分别探讨了正常大鼠髁突的增龄性变

19、化,单纯受力后髁突的改变,以及力和激光两个因素对髁突改建的影响。实验未采用自身对照的目的是防止颞下颌关节的联动效应,而使双侧的髁突改建相互影响。实验组和对照组动物模型的髁突软骨都受到下颌前伸所施加持续性外力的影响,可以看到下颌前伸所引发的髁突软骨改建主要反映在各层细胞的大量增殖分化,尤其是关节软骨中的增殖层。由于增殖层细胞具有多向分化能力,对所承当的外力具有敏感性,所以当承受的应力在生理范围内时,细胞大量增殖,改中南大学硕士学位论文实验一建修复髁突软骨生长,使髁突软骨保持活泼状态;而一旦超出其承受能力,关节软骨那么可能吸收变薄【】发生退行性变。持续性前伸力作用于下颌,髁突软骨内的间充质细胞沿受

20、力方向排列且数量大量增加【】,并伴随成熟软骨细胞大量合成分泌型胶原。型胶原被广泛认为是软骨内成骨的信号,出现在软骨成熟层中提示软骨内正在进行成骨过程乜引。从髁状突软骨外表的纤维层到深层的骨组织是一个渐进的过程,由于施加了低强度激光及外力使软骨到骨这个过程的加快。典型的髁突改建是在天及天实验组髁突中份后份厚度增加明显,此时,髁突小而密集的软骨细胞增殖层在力与弱激光的刺激下大量分化为成熟的软骨细胞。成熟层软骨细胞又逐渐分化为肥大层软骨细胞并不断向胞外分泌基质,使细胞外基质增加。肥大层与软骨下骨的交界处成骨活泼,转变为其下的骨组织。钙化软骨层中无显著细胞数目增加,但细胞体积增大。随着细胞凋亡的发生,

21、软骨细胞发生钙化,软骨下骨内血管长入钙化软骨层软骨基质,矿物沉积加速,血管内未分化间充质细胞分化为成骨细胞,在软骨基质上合成骨基质,软骨最终被骨替代,完成适应性改建【】。对于天组,天组,实验组与对照组髁突厚度并无明显差异,我们推测可能是因为髁突软骨接受的辐照剂量缺乏,时间较短有关,因为激光的生物刺激效应与照射剂量密切相关。.】用不同波长,不同剂量辐射的激光对成纤维细胞进行测试,研究细胞的形态,成活率及碱性成纤维细胞生长因子的增殖情况,发现波长为. ,激光能量密度为 /照射时,细胞成活率及碱性成纤维细胞生长因子表达最高,细胞的反响最好。.激光除了能输出.阻和.的红外光,最常用的是.的红光,其激发

22、态光子从高能级到低能级的过程中释放能量,与细胞线粒体色素作用,合成大量,提供了生物能量,促进细胞增殖,骨小结 形成,提高碱性磷酸酶活性,及骨钙基因的表达。不同的细胞,最正确的辐射剂量存在差异。血管平滑肌细胞的最正确辐射剂量为./,细胞和仓鼠的成纤维细胞的最佳辐射剂量为./。此外,有研究还发现激光照射的时间和能量密度对生物刺激效应也有较大的影响。 】用的激光照射上颌扩弓大鼠的腭中缝。结果说明,接受相同总剂量,天组无促进作用,而分次小剂量的天组效果明显;扩弓后立即进行激光照射要比扩弓天以后再接受相同剂量激光照射有效,因而得出低剂量辐照促进骨改建的生物效应不仅与激光照射的总剂量有关,也与激光照射开始

23、时间及照射能量密度直接相关。下颌前伸天后再使用的激光照射新西兰兔髁突,无软骨及纤维组织的增厚。照射开始宜早期进行在治疗神经损伤方面也得出了相似的实验一中南大学硕士学位论文结论。实验人员发现在神经损伤后为了使神经功能最大程度恢复,进行早期规律的弱激光治疗是极有帮助的,尤其在神经损伤后立即治疗效果最正确;较为适宜的激光治疗周期为到个月。如果在神经损伤后的第二周才开始进行弱激光治疗,结果与未经激光照射组相比无明显改善川。由实验数据可知,实验组与空白组在实验天组时即可出现髁突厚度的明显差异,且差异在第天组和第天组不断增大。对照组与空白组在实验第天组方可出现统计学差异,但不如实验组明显,说明单纯大小适宜

24、的外力作用于髁突,可以促进髁突软骨的生长,但是其促进生长的程度及反响速度不如的实验结果相同时接受低强度激光辐照髁突软骨。这个发现与吻合,激光照射可以刺激髁突生长,导致下颌前伸,从而到达下颌矫形的作用。体外实验也证实了激光不仅促进成骨细胞,同时也可以促进软骨细胞分化及活性,进而到达骨改建及软骨分化的作用。在加速髁突软骨改建的同时,】等人的临床调查发现,低强度的弱激光屡次照射可以缓解治疗过程中的不适感,提高患者对正畸治疗的接受度。结论、对下颌前伸的大鼠颞下颌关节应用低剂量的激光,可以加速髁突软骨的改建。中南大学硕士学位论文实验二表达变化的研究前言正常的关节软骨由关节腔内的滑液供应营养,这与关节软骨

25、自身可以生成血管抑制剂,抑制软骨中血管组织生成有密切的关系。当机体出现缺氧、炎症、生长因子、细胞因子等刺激骨取代软骨组织的因素时,肥大层软骨成为软骨下骨中血管向软骨侵袭的目标与靶点。血管的生成为营养运输创造了必要条件,为骨的修复和重塑奠定了根底【】。,是一种高血管内皮细胞生长因子 度特异的血管内皮细胞有丝分裂原,由糖蛋白单体以二硫键构成二聚体,相对分子量.。异构体是从一个单一的血管内皮生长因子的基因选择性剪接的结果,其分子质量和生物学性质不同。通过与特异性受体、结合发挥促进血管新生和细胞增殖,增加血管通透性,以及淋巴内皮细胞增长,生长因子的表达的作用。因子是最有效的促血管生长因子,可以刺激血管

26、内皮细胞有丝分裂、增加内皮细胞渗透性,在很多在正常人和动物组织中都有表达,但一般表达水平都较低,当成骨活泼时,分泌大量增加。本实验以为参考指标,测量其平均光密度值,进一步证实低强度?激光对功能性前伸引起髁突的改建的作用。全文总结中南大学硕士学位论文实验设计.材料和方法实验材料:同实验一实验方法:同实验一.实验仪器:同实验一免疫组化主要试剂:兔抗多克隆抗体:武汉博士德生物试剂公司提供免疫组化试剂盒山羊封闭血清,生物素标记兔抗羊和复合物美国生物公司显色试剂盒美国生物公司.实验步骤免疫组化主要操作步骤:、常规石蜡切片脱蜡至水,:二甲苯脱蜡分钟×次,梯度酒精水化。浸泡分钟。、抗原修复,分钟置

27、于恒温水浴箱中。洗分钟×次、滴加%,分钟次,消除过氧化物酶活性。洗分钟×次、滴加山羊封闭血清,孵育分钟.、滤纸吸去封闭血清,不洗,滴加兔多克隆抗体:,冰箱过夜。冲洗分钟次、滴加生物素标记的二抗,孵育小时。洗分钟次、滴加,孵育小时。洗分钟×次、显色分钟,镜下观察到有棕黄色阳性反响后,滴加冲洗分钟次。、苏木素复染细胞核分钟,自来水冲洗分钟。、%,%乙醇梯度脱水各分钟,二甲苯透明分钟次。、中性树胶封片。、阴性对照:用代替一抗。.实验测量判断标准:阳性标准:细胞形态清晰,结构完整,包膜和胞浆为棕黄色。阳性细胞着色明显高于背景色,阴性对照组代替一抗细胞未见阳性着色颗粒。中南

28、大学硕士学位论文 全文总结在高倍镜下倍,对每张切片的髁突软骨中份、后份进行观测,采用? .软件,计算平均光密度/,进行半定量分析。统计分析:.统计学软件包,用检验,对实验组、对照组及空白组进行分析比拟,.为有统计学意义。结果阳性表现为软骨细胞的胞浆、包膜均可见棕黄色深染颗粒。阳性主要分布在髁突软骨的成熟层和肥大层,增殖层弱表达,纤维层无表达。髁突软骨中份、后份的平均光密度值表达:激光照射大鼠髁突后,实验组髁突软骨中份、后份的表达增强,第天即与空白组出现差异,而对照组一直到第天组才与空白组出现有统计学意义的差异,且实验组与对照组相比拟,在第天组及第天组,的平均光密度值明显增强,.,有显著统计学意

29、义。天空白组;天对照组;天空白组;天实验组;天对照组;天实验组;天空白组天空白组;天实验组;天对照组;天对照组;天实验组;实验二中南大学硕士学位论文,:囝口,.星蚴.图.中,幸代表实验组与对照组相比具有统计学意义;代表实验组与空白组相比有统计学意义;代表对照组与空白组相比具有统计学意义;讨论髁状突具有较强的生长改建能力,终生保持着增殖与分化的潜能,为适应机体生长环境的变化或位置的改变,可以通过调节软骨形成和后来的软骨内骨化过程,从而使下颌骨与上颌骨生长相协调,形成正常的面部形态。本实验比拟了个时间点,的平均光密度表达情况,对照组和空白组表达量在组内逐渐减少,这可能与周时大鼠处于生长发育顶峰期到

30、周大鼠成年这一增龄性过程有关,随着生长发育的减慢停止,髁突软骨内骨化速度减慢,分泌降低。之前孙磊在实验中亦发现了髁突有相似的趋势【。是高效的血管生成多肽及内皮细胞特异性的有丝分裂原和趋化因子,其基因的表达受到缺氧、肿瘤基因、抑瘤基因、细胞因子等多种因素的影响,如缺氧诱导因子.上调缺氧条件下的基因表达,瘤基因、中南大学硕士学位论文 实验二等激活启动子提高表达,而抑瘤基因负调控转录延伸因子降低表达。细胞因子及生长因子如、.、 .、.、.,、.、 .和 等都可以影响的表达,并且在适宜浓度范围内多种骨形成细胞因子具有协同作用,使表达水平上调,且上调的水平高于单纯应用一种细胞因子的水平。由于弱激光可以刺

31、激巨噬细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、内皮细胞、角质形成细胞的增殖,增强细胞呼吸作用,的合成,释放生长因子及细胞因子,增加胶原合成,故可以促进大量的分泌。大量分泌的通过介导、等通路释放调节血管通透性,使纤维蛋白原和血浆蛋白向外渗出;通过介导的,生成的,诱导、纤溶酶原激活剂表达促进内皮细胞迁移,诱导微血管内皮细胞形成管样结构或以发芽形式形成新生毛细血管;通过介导的、.旁路介导内皮细胞增殖,发动钙离子;通过激活磷脂酰肌醇.与抗凋亡。简言之,通过以上条途径促进软骨血管化,使软骨吸收,从而发挥软骨内成骨的作用。有人认为在软骨血管化的过程中新生的小血管内源源不断地输送骨祖细胞,并调控其分化为成骨细胞。正常机

32、体的软骨组织中无血管存在,表达水平较低,只有在软骨内成骨过程中,软骨下基骨内的微血管可向软骨方向纵向生长,导致软骨基质逐渐被吸收,并最终被骨基质所替代。关节软骨在生长发育期,生长板肥大的软骨细胞可以大量合成、分泌,诱导肥大细胞层血管发生,再给其注入受体嵌合蛋白后,血管侵入停止,骨小梁形成异常,软骨向骨转化停止。不仅与成骨细胞相互关联,与破骨细胞功能之间也有着密切的关系。可以维持破骨细胞的存活,是破骨细胞增殖分化的调节因子。由于破骨细胞的存在,才使得软骨细胞凋亡,细胞外机制改建,骨吸收成为可能。然而无限制的的表达使破骨细胞大量增加,骨组织吸收加剧,骨关节炎易感性上升瞠。对照组与空白组比拟,在实验

33、天及实验天的平均光密度都无明显差异,直到实验天组及实验天组时,对照组才呈现出统计学差异,说明单纯力的作用下前伸下颌可以改建髁突软骨。而实验组髁突中份、后份阳性表达增强,在实验第天时即可出现具有统计学意义的增加,提示与对照组相比,实验组可以更快地促进分泌,软骨内骨化进程。肥大细胞软骨层是从软骨改建过程到软骨内成骨过程的一个临界区域,正是在这个区域内,成熟的软骨细胞崩解,软骨基质钙化,大量新生小血管侵入,释放前成骨细胞及成骨细实验二中南大学硕士学位论文胞,软骨内成骨过程开始。等前伸大鼠下颌时发现颞下颌关节表达水平较对照组显著增高的程度与此处骨化的程度成正比。结论.激光使前伸的大鼠下颌髁突软骨表达增

34、加,加速骨替代软骨的进程,促进邻接区域骨中血管向软骨侵入,从而加速软骨的改建,为缩短功能性前伸下颌时间提供了新的可能。全文总结中南大学硕士学位论文图并信号传导通路示意图全文总结中南大学硕士学位论文全文总结本实验选用周龄,.雄性大鼠,随机分成实验组、天,对照组、天及空白组、天。实验组及对照组用磷酸锌水门汀将斜面导板粘固于大鼠的上切牙,并用正畸透明压膜材料制作颈圈以防止大鼠前爪及后腿破坏斜面导板。大鼠戴上斜面导板后颞下颌关节区即刻接受的.的氦氖激光照射,每天一次,每次分钟/侧,每只双侧照射。对照组大鼠仅佩戴斜面导板及颈圈,不接受激光照射。空白组无任何处理。各组实验周期结束后分别取材,固定、脱钙、脱

35、水、石蜡包埋。石蜡切片进行染色,测量髁突软骨厚度;免疫组化方法检测平均光密度值的表达。实验结果如下:组织学染色发现:实验组髁突软骨与对照组形态比拟:位于髁突外表的光滑的胶原纤维,纤维层增厚;增殖层细胞排列更加紧密,细胞小而密集,核浆比例增大,层数增加;成熟层细胞体积变大,核浆比例增大,细胞间质增加,层内细胞排列无规律。肥大层,细胞体积较成熟层细胞体积增大,排列无规律,破骨细胞数量增加。钙化软骨层位于骨小梁之上,软骨加速成骨。实验组与空白组在实验天组时即可出现髁突厚度差异,且差异在第天组和第天组增大。对照组与空白组在实验第天组方可出现差异。实验天及天组实验组比对照组髁突软骨增加更为显著。免疫组化

36、结果显示:阳性表现为软骨细胞的胞浆、包膜均可见棕黄色深染颗粒。阳性主要分布在髁突软骨的成熟层和肥大层,增殖层弱表达,纤维层无表达。髁突软骨中份、后份的平均光密度值表达:激光照射大鼠髁突后,实验组髁突软骨中份、后份的表达增强,第天即与空白组出现统计学差异,而对照组一直到第天组才与空白组出现有统计学意义的差异,且实验组与对照组相比拟,在第天组及第天组,的平均光密度值明显增强,.,有显著统计学意义。实验结论:、对下颌前伸的大鼠颞下颌关节应用低剂量的.激光,可以加速髁突软骨的改建。中南大学硕士学位论文全文总结、激光使下颌前伸的大鼠髁突软骨表达增加,加速骨替代软骨的进程,促进邻接区域骨中血管向软骨侵入,

37、从而加速软骨的改建,促进下颌骨生长,为缩短功能性前伸下颌时间提供了新的可能。参考文献中南大学硕士学位论文参考文献.,.,.,. /. ,.:?.】傅民魁,王邦康,中国名儿童与青少年错牙合畸形患病率的调查.中华口腔医学杂志,.:.【】中华人民共和国国家统计局年第五次全国人口普查公报,. 【.,., . .:.,【】伍军、徐宝华,安氏类分类错牙合的分型及其上下面角的颅面特征口腔医学纵横,.:.】,., .,:.【】.,.,.:. ,【】 ,.,. ,.:.】,.,.,:.】,.,. ,.:.医学,.:.,.,】. ,.:.【 ,.,. ,.:.,.,】 , .,.:.】 , , .,.,.:.【,

38、., .,.:.】,., , .,。:?.【】徐宝华,现代临床口腔正畸学.北京:人民卫生出版社,【】李延武,马肃,成年鼠髁突增龄性变化的组织学和组织化学研究.口腔医学研究,.:.】徐迈,功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨的改建及表达变化的研究,.西安:第四军医大学,.【】林珠,段银钟,丁寅,口腔正畸治疗学.北京:世界图书出版公司.】陈扬熙,赵美英,牙颌面畸形功能矫形.人民卫生出版社,韩正学,黄培林,颞下颌关节盘前移位关节区组织病理变化的实验研究.上海口腔医学,.:?. 】 , ,. ,. :.,赵志河,下颌前伸后髁突软骨成熟层内型胶原的【】沈刚,., 表达.华西口腔医学杂志,.:.】 , , ,

39、.,;:】.,., . .:】,., ? . . :, :?.【】,.,. ,.:.参考文献中南大学硕士学位论文医学与康复杂志,.:.】周征,罗颂椒,徐国标,前伸下颌后大鼠髁突软骨生长改建的定量组织学研究.口腔正畸学,.:.,【】,.,.,.:.】 ,.,.,.: 【】 ,., , .,. ,. :.】孙磊,渐进性咬合紊乱对大鼠髁状突软骨组织形态及、和.表达的影响,西安:第四军医大学,., , ,【】、,.,.:., ,【】 ,., .,.:.】 ,.,.:.中南大学硕士学位论文综述综述激光在口腔医学的应用激光医学开展简史.激光医学开展简史激光医学的开展大致可以分为个时期:以根底研究为主的时期

40、;临床广泛应用期;学科形成期;激光医学开展的成熟期。早在年,利用受激发射光放大的原理,成功诱导在红宝石晶体受激发射【。第二年,红宝石视网膜凝固机即应用于眼科成为世界上第一台医用激光机【】,等对剥离的视网膜进行焊接;研究了红宝石激光在宏观及镜下的伤害,探讨了光凝治疗的潜在价值及对人员的伤害。意识到激光生物学效应的潜在用途是无限的,通过特定波长可以更精确地研究微生物的基因突变方式。】在大鼠实验中研究不同功率的激光对大脑及肿瘤的损伤。美国辛辛那提州的两名研究人员对名患有恶性肿瘤、血管肿瘤及良性损伤的病人进行实验,提出可以应用激光选择性破坏特定染料染色的肿瘤细胞的意见,探索性地为系统性的光动力学疗法奠

41、定了良好的根底。年美国皮肤病科学院指出高能量激光器能够迅速,平安地对许多非炎症性的皮肤良性病变进行治疗,并且无不良的疤痕 。年,中国科学院长春光学精密机械研究所的研究人员艰苦奋斗,开拓创新,独立自主研发了我国第一台红宝石激光器。,我国第一例红宝石激光器进行视网膜凝固的动物实验在北京同仁医院成功完成【。从此,拉开了我国的激光医学研究的序幕。随着医用激光器的改造和开展,激光逐渐进入到临床应用阶段。上世纪年代,医用激光器的种类有了极大的丰富,不再局限于红宝石激光器,激光器、激光器、氮分子激光器、激光器、氩离子器、氪离子激光器等等常用的医用激光器到达十种以上,普及临床各科。例如激光开始用于治疗高血压等

42、内科疾病,激光被用于神经外科,用于整形外科,】用于气道病变手术。除此之外,半导体激光,红宝石激光及固体激光等激光也不断在胃肠、泌尿外科、胸外科、皮肤科、五官科、妇科等领域摸索,开拓适应症,减少并发症。综述中南大学硕士学位论文到了世纪年代,激光仍以日新月异的速度飞速开展,不仅为生命科学和生物工程开辟了崭新的研究途径,也为临床诊断及治疗提供了新的手段,在此根底上逐渐形成边缘学科一激光医学,并成立了“激光医学咨询委员会,定期出版激光医学期刊及专著【】。据统计,年美国医院有%的手术是应用激光刀完成的,约有万例,全美/的门诊机构拥有激光医疗设备。在此期广泛应用的激光扫描共聚聚焦显微镜和细径柔性光纤内窥镜

43、具有里程碑式的意义。随后的年代,是激光医学不断拓展完善的时期。我国的激光医学也进入各个大学的课堂,并在大学和省医院设立激光医学中心。.激光医学在口腔应用的开展简史激光在口腔诊治方面也是较早研究的医学领域之一。继创造红宝石激光器后,.年代许多口腔医生根据自身的临床经验将:及激光摸索着应用于临床。早期口腔激光治疗仅限于在医院进行口腔软组织的切除,且当时激光器为连续光波辐射,增加了对周围组织结构的传导性热损伤的危险性,限制了激光在口腔的应用。直到年,美国牙科激光公司, ,生产出商业化牙科:脉冲式激光器,使得激光在口腔治疗中广泛开展钊。随着激光技术的日渐成熟及飞速开展,激光已应用于临床龋病治疗,局部软

44、硬组织切除改形,根管碎屑及根管玷污层的处理等等。与传统口腔旋转器具相比,激光有着明显的优势:精确切削软硬组织,对牙体牙髓温度及机械危险性较小,无噪音,降低疼痛,相比将旋转 放入口内,激光探头具有更高的可接受程度。激光的特性方向性好:从空间分布来看,激光的高方向性主要指激光束的发散角小,接近衍射极限,约为量级。普通光源发出的光辐射沿冗立角分布,比激光束大倍。激光的高方向性使其能有效的传输较长的距离,还能保证聚焦后得到极高的功率密度,及横向空间相干性。光束的立角为:./公式中表示平面发散角,九表示波长,是光束的横截直径。激光的方向性可以允许其传输很长的距离,并且保持很高的聚焦后的功率密度。高亮度:

45、光源在单位面积上向某一方向的单位立体角内发射的功率就称为光源在该方向上的亮度。光源的亮度定义为光源单位发光外表中南大学硕士学位论文综述沿给定方向上单位立体角内发出的光功率的大小。即/。由于激光的能量被集中在极短的时间内发射出来,因此激光功率极高。是尢球面度,普通光源光向四面八方发散,太阳的发光亮度约为/.。激光受到谐振腔的限制,发散角很小,相应亮度在/.的范围内。单色性:激光的产生是受激辐射发生在谱线的固定两能级之间,同时还受到谐振腔选频作用的限制,能够产生激光振荡的频率较小,因此频带很窄,单色性好。气体激光器的单色性比固体激光器好,单色性最差的是半导体激光器。相干性:激光的高相干性是在光的波动理论根底上描述光波各个局部的位相关系。由于激光中每个光子的运动状态频率、相位、偏振态、传播方向都相同,因此它的相干性比普通光源要强得多。激光的相干长度达×.相干性包括时间相干性与空间相干性。时间相