ISO-15189实验室认可性能验证方案

1、医学实验室 ISO 15189 认可性能验证实验方案 为了满足目前医学实验室认可的需求保证实验室检测结果的准 确性，特制定本方案。适用于强生 VlTRoS产品的试验项目的性能验 证，包括 V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600 上所能开展的所有定 性检测项目。本方案从准确度、精密度、参考范围、线性范围以及方 法学比对 5个方面对各个试验项目进行评价。一、 精密度 （Precision ）：精密度是指在规定条件下所获得的检测结果的接近程度， 表示测定结果中随机误差大小程度的指标。 精密度通常用不精密度表示。 可以分别评价连续精密度 （批内精密度）、 重复性不精密度（中间

2、精密度，包括批间、日间精密度等）和再现性 精密度。本方案采用批内和天间两种方法对各个试验项目的精密度进 行评价。全部实验过程使用同批号试剂和质控品， 并且保证检测当日 质控在控。1、 批内精密度（连续精密度）：方法： 在检测患者标本过程中，连续运行高低水平质控品各20 次，记录检测结果。计算批内精密度的 CV值和SD值。结果评价（1）厂家评价标准：计算精密度指数=验证SD/厂商SD 精密度指数要求小于等于1,或者实测CV小于等于厂家要求的CV 两者符合其一即可。具体见精密度评价表格。（2）按照国际推荐标准：批内精密度应在 CLIA88允许误 差的1/4以内，见美国CLIA' 88能力比

3、对检验的分析质量要求。 2、天间精密度（中间精密度）：方法：同样使用两个水平的质控品，若需复溶冻干质控品做实验，要 注意选择产品的稳定性和瓶间差。 要严格控制每次复溶冻干品时的操 作手法。连续测试 20天，每天检测 1次。在次过程中不能更换试剂批 号及质控品批号， 是否需要重新定标则取决于实验室。 测试完成后记 录检测结果。结果评价（1）厂家评价标准：计算天间的SD及CV值，并计算精密度 指数=验证SD/厂商SD精密度指数要求小于等于1,或者实测CVJ、于 等于厂家要求的CV两者符合其一即可。具体见精密度评价表格。（2）按照国际推荐标准：批内精密度应在 CLIA88 允许误 差的 1/3 以内

4、,见美国 CLIA'88 能力比对检验的分析质量要求。二、准确度准确度（accuracy）指检测结果与被测量物真值之间的接近程度。是 分析测量范围、分析灵敏度以及生物参考区间评价的基础。 准确度的评价方法很多,比如检测定值参考物质,同参考方法进 行比对,同有溯源性的检测系统进行方法学比对,卫生部临检中 心质评的汇报结果均可以作为评价准确性的方法之一。本方案采 用测定定值标准物质的方法来评价各个检测项目的准确度。定值 标准物质采用厂家定值标准品。方法：（1）试验期间保证机器状态正常,保证试验当日室内质控在控。2） 按厂家要求准备各个项目的新批号定标品 （要与定标时使用的定标品批号不同）各

5、一套，按照标准复溶（3）记录该新批号定标品的定值。（4）在设备上检测各个定标品 （多水平）的相关项目， 每个水平 重复 2 次，记录检测结果，将检测结果录入准确度评价 表格。结果评价：（ 1）厂家标准： 按照各定标品各水平的定值和不确定度 （厂家提供）， 来确定准确度的偏倚范围。计算实测均值的各项目各水平定标 品的偏倚，与偏倚范围相比较，来判断偏倚是否可以接受。详 见准确度评价表，实测的均值如果落在该限度内，则为其 准确度认为可被接受。（2） 按照国际推荐标准：准确度偏倚应该在CLIA88允许误差的1/2以内，见美国 CLIA'88 能力比对检验的分析质量要求。三、参考范围验证参考NC

6、CLSC2一 A2文件，本方案仅对厂家提供的或者实验室正在使用的各个项目的参考范围进行验证。方法：（1）选择 20 个能够代表实验室的健康总体的标本。（ 2）保证试验系统运行正常，依照标准操作程序检测标本。（3）运行该 20 份标本，记录结果，将结果填入参考区间验证表 格。结果评价 如果 20个参考个体中不超过 2 例的检测值在验证的参考限之外，厂 商或提供参考区间的实验室报告的 95%参考区间可以接受。如果 3 例 以上超出界限，再选择 20个参考个体进行验证，若少于或等于 2 个 观测值超过原始参考值，则可接受，若还有 3 个超出参考限，需要重 新检查各种条件，决定是否建立自己的参考区间。

7、四、线性范围分析测量范围即定量检测项目的线性范围， 是整个检测系统 （包 括仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序、检验人员等）对应于系 列分析浓度的仪器最终输出的信号间是否呈恒定比例的性能， 是一个 很重要的仪器性能分析指标。 本实验通过测定不同配比比例的高低值新鲜患者标本， 以验证实测值 和理论值的线性关系，来评估每个检测项目的线性范围。方法： （1）实验室人员必须十分熟悉仪器的操作、质量控制和定标方法， 以及正确的收集样本。试验期间保证仪器状态良好下，质控在 控。（2）全部实验数据尽可能在较短的时间内收集，如可能，单个分析 试验最好在一天内做完。（3）用于验证线性范围的标本类型应与临床测试

8、所用的标本类型相 同或相类似，所有标本应不含厂家所标定的干扰因素 （如溶血、 黄疸、脂血等）。如果上述条件不可避免，则应在最后的报告 中注明在评价实验中所用的标本处理方法或基质类型。注意： 收集的高浓度标本应尽可能的接近线性范围高限。(4) 按照线性评价表格要求配比标本。将 H和L样品按：5L、 4L+IH、3L+2H、2L十3H、IL十4H、5H关系各自配制棍合， 形成系列评价样品。(5) 难以收集到低限样品，可收集高值样品，用相应稀释液作系列 不同程度稀释，形成系列评价样品。( 6) 在 线性评价表格记录检测结果。结果评价：将数据填入线性评价表格，以X表示各样品的预期值， 以Y表示各样品的

9、实测值，得出散点图。若所有实验点呈明显直线趋势， 用直线回归对数据进行统计， 得直线回归 Y=bX+a若r2>0.95 ,斜率b在1.00 ± 0.03范围内，可直 接判断测定方法在实验所涉及的浓度范围内成线性。五、用患者标本进行方法比对及偏倚评估 实验室准备用一个新的检测系统或测定方法 ( 或新的试剂盒、新仪器 进行病人标本测定前，应与原有的检测系统或者公认的参考方法 -起 检测一批病人标本， 从测定结果间的差异了解新检测系统或方法引人 后的偏倚。如果偏倚不大， 或者偏倚量在允许误差范围内，说明两检 测系统或方法对病人标本测定结果基本相符， 新检测系统或方法替代 原有检测系统

10、或方法不会对临床引人明显偏倚， 这样的实验称为方法 学比较实验。在方法学比较中，常将新方法称为实验方法，与之比较 的方法称为比较方法。试验方法：（1）各种仪器处于良好的工作状态，严格按 So操作。（2）检验人员有足够的时间熟悉检测系统的各个环节，熟悉评价方 案。（ 3） 在整个实验中，保持实验方法和比较方法都处于完整的质量控 制之下，始终对实验结果有校准措施。（ 4） 实验时间至少做 5天，时间长一些更好，可以客观反映实际情况。（ 5） 至少做 40份病人标本，多一点更好。（6）尽可能使50%的实验标本分析物的含量不在参考区间内， 各个标 本分析物含量越宽越好。（7）不要使用对任一方法有干扰的

11、标本。（8）每份标本应有足够的量，以便使实验方法和比较方法都能做双 份测定。例如，第 l 次序号为 1 、2.3.4 、5.6 、7 、8 ， 第 2次序号为 8 、7 、6 、5 ， 4 、3 、2.1 。两方法都 按此实验。（ 9） 应 在2个小时内两种方法对同批标本分别开始实验， 最好使用当 天采集的标本。（ 10）实验结束后，记录数据。保留原始数据。结果评价：（ 1 ） 不 采用已明确有人为误差的结果。（2） 将所有无明显误差的实验结果记录下来。但是，若两种方法结果的各自差值大于任一方法的批内不精密度，应查对标本，并重新实验。若找不出原因，应保留数据备考。（3）整个实验一定要有内部质量

12、控制，失控时结果必须重做。（ 4）对实验数据的初步筛查： 设比较方法测定结果为 X 值，实验方法测定结果为 Y 值。在 方法学比对表格上录入检测数据， 若有40个标本，则有 80 个 X 和 Y 的结果。 检查每一方法内现份测定值有无离群表现，先计算每一标本每一方法成对结果的差值和差值的均值。 以4 倍的各方法差值的均值 为判断限， 各方法内标本的成对差值都应在限值内， 说明双份测定结 果符合要求。 若原数据仅 40 例病人标本的结果， 剔除的数据应另做实验补 上。若有1 例以上需剔除， 应检查原因是标本原因，其他数据仍可使 用。无法找出原因，则保留使用所有数据。若最大差异超过临床允许 误差，

13、应从仪器、试剂、方法上寻找原因，停止继续实验。（5）在方法学比对表格上，以X均值、Y均值和（Y-X）、X作图， 通过这两种图了解线性关系， 即有无明显离群点， 是否呈恒定变异等 情况。如果实验结果具良好线性关系，继续处理数据。（ 6） X 、 Y 关系实验点有无离群表现先看图在无明显离群点。若无，可作以后的统计；若有，应对X、丫配 对值作离群值计算。 将每一个标本两个方法的前后两个测定值一一对 应，求出第1个X与第1个丫的差值和第2个X与第2个丫的差值， 并计算出所有标本总的平均差值， 以4 倍的平均差值为判断限值。 所 有差值都不应超出限值。若有，为离群点，仅一点离群点，剔除。有 一点以上离

14、群点，需查原因，判断是否保留数据。若原因不清，不能 随意剔除，全部保留作统计分析，或者用一批新标本重做评价。凡有 剔除的，应另用标本补做。（7） 标本内分析物含量分布是否适当的检验。相关系数 r 常用来表 示两个变量间互相关系密切的程度。在直线回归统计时，除所 有实验点和回归线间的离散度会影响 r 值的大小外，实验点对 应的分析物含量分布宽度也会明显影响 r 值的大小。若实验点 过于密集，尽管离散度不大，但 r 值偏小。因此，可用 r 检验 X 取值范围是否适当。一般要求r大于或等于0.975 （或r2大于或 等于0. 95）,认为X范围是适合的。若r小于0.975时，应再 多做实验，扩大数据

15、范围。（8）线性回归统计可用直线回归分析来估计斜率和截距。 数据以回归式Y=b炸a,表示这 些数据的直线趋.这是以X方法为准，丫方法与之配合的关系式。式 中b为斜率,a为截距。两方法理想状态的回归式应为 Y=X 即b =1， a=0。根据临床使用要求，可在各个临床医学决定水平浓度XC处，了解丫方法引人后相对于X方法的系统误差（SE） , SE = | （b -1）Xc + a | 。（9）以美国CLIA' 88能力比对检验的分析质量要求允许误差的1/2 为判断依据，由方法学比较评估的系统误差（SE）不大于允许误差，认 为系统误差在可接受水平内。备注：1、各个实验室应该根据自己的实际情况， 建立性能验证的方法和 标准。该方法适用于科室内所有生化设备的验证。2、上述试验方案可用于强生 Vitros 系列产品，仅供实验室参考参考文献：1、 临床检验质量管理技术，冯仁丰 ，上海科学技术文献出版 社2、 临床检验方法学评价 ，杨有业 张秀明，人民卫生出版社3、NCCL，S Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline