反相色谱法中流动相和溶剂选择的一些经验

1、精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载反相色谱法中流动相和溶剂选择的一些经验反相色谱法中流动相和溶 剂选择的一些经验色谱分析中积累了一些经验，分享给大家。 1 1反相色谱法分析，乙腈和甲醇哪个更 好？甲醇和乙腈是反相色谱法中最常用的有机溶剂，二者的极性和溶剂 强度相差不大，但它们还是有一些差异， 在此详细阐述一下。（1 1）UVUV 检测器上的响应值：在紫外区尤其是远紫 外区（靠近 200200 nmnm）,乙腈的吸收远低于 甲醇，这一区别产生的影响在等度条件 下也许还不明显，但若使用梯度，乙腈 所引起的基线漂移则远小于甲醇，这样 使用乙腈做流动相，得到的色谱图不仅 美

2、观，样品的检出限也低得多，所以该 指标乙腈占优；洗脱强度：乙腈的洗脱能力稍强于甲醇。如果查阅溶 剂参数表，能够发现乙腈的极性指数精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载（）- 精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，感谢阅读下载-1 稍高于甲醇 （） ， 受此表启发， 我曾固执地 认为在反相色谱法中甲醇与水混合所调 出的溶液的洗脱范围要宽于乙腈，然而 实践证明与水混合时，乙腈的洗脱能力 更强，随着有机相比例的升高，这种区 别逐渐减小，如果是纯溶剂二者趋于一 致，也就是说，混合水以后乙腈的洗脱 能力还是强于甲醇的；但洗脱能力不能 用作评价溶剂好坏的标准，不过对于某

3、 一项分析，如果用甲醇替代乙腈，相应的有机相比例应调高一些。（3 3）选择性：二者的选择性各具特点。色谱 分析中的选择性往往无法给出普遍适用 的参数，这就需要实践经验支持。我喜 欢进行多组分分析，在某些情况下，使 用乙腈- -水洗脱分离情况优于甲醇- -水，比 如 PAEsPAEs PAHsPAHs、酚类化合物等等，选择 乙腈得到了较优的分离效果，而甲醇则 不行；其他一些应用中，甲醇的选择性 也会优于乙腈，比如羰基类化合物精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载-DNPH-DNPH 分析和氟喹诺酮类药物（沙星类 药物），其他同行使用了乙腈，化合物并-精选公文范文，管理类，

4、工作总结类，工作计划类文档，感谢阅读下载-2精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，感谢阅读下载 4 未完全分离，我进行分析时改用了甲醇， 所有化合物全部分开了。这是于有机溶 剂分子的化学性质不同所致。本人的观 点，如果是多组分分析方法开发时，最 好用两种溶剂进行对比，以便得出最优 条件。（4 4）色谱柱背压：柱内承受的压力，根据有机溶剂的种类或混 合比例的不同而异. .2525C 时，甲醇/水 水乙腈冰 甲醇乙腈；4040C 时，甲醇/ /水水 乙腈/ /水甲醇乙腈； 总体而言，使用乙腈时，色谱柱的背压 低于甲醇，原因是

5、乙腈的黏度低于甲醇 （2525 C 时，乙腈，甲醇）。该指标，乙腈 占优。综上所述，反相色谱法中乙腈的效果优于甲醇。2 2离子抑制色谱法该选何种试剂？离子抑制就是向流动相中加入酸或碱，使弱酸 或弱碱以单纯的未解离形式存在，既能 增大其在反相柱上的保留又能得到更完 美的峰形。该方法主要用于弱酸分析（碱 性化合物通常不采用离子抑制法）。常用 的酸性添加物为磷酸、醋酸、甲酸等。精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，感谢阅读下载 5 对比三者的吸光值，磷酸是最小的，乙 酸和甲酸相差不大，这一事实会导致一 个问题一一在低波长下，添

6、加乙酸和甲 酸会引起更高的噪声，这就影响了分析 的灵敏度，另外于磷酸酸性强，达到同 一 pHpH 值用量更少，所以使用磷酸时噪声 会更低。而在使用缓冲溶液和甲醇或乙 腈进行梯度分析时，乙酸或甲酸的存在 可能会对乙腈、甲醇的基线漂移起到一 定的抵消作用，当然这只是猜测，还有待验证。3.3.上样前样品溶剂的选择。最好的溶剂是流动相。上面这句话可能很多人都知道，但至于为什 么要这样可能不清楚。原因：(1(1) )流动相作溶剂不会岀现溶剂峰。在药物 QCQC、化学品 QCQC 中，主成分和杂质定量 是通过归一化法进行的，溶剂峰的出现 会使主成分测定值偏离实际值，所以溶 剂峰是必须要消除的，唯一的办法就

7、是 以与流动相组成严格一致的溶剂溶解样 品。 如果这样做还是会出峰，那可能就 是不被保留的化合物了；(2)(2)反精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，欢迎阅读下载精选公文范文，管理类，工作总结类，工作计划类文档，感谢阅读下载 6 相分析中，如果采用洗脱强度明显高于 流动相的溶剂或溶液进行溶解，往往会 导致柱效下降、峰前沿、峰前分叉峰， 这种影响对洗脱较快的化合物影响更 甚，并且进样量越大影响越严重。原因 在于强洗脱样品溶剂的加入局部增大了 流动相的洗脱强度，使单种组分的前部 分与后部分的保留性不一致，进而导致 区域展宽。我举两个例子： 我分析氯霉素时，流动相为甲醇：水=40=40： 6060，氯霉素是用甲醇溶解的，结果塔板 数不足32000/m32000/m，后来改用流动相溶解， 塔板数升到了 90000/m90000/m ;还有一次，我分离磺胺类药物，用的梯度（起点乙腈: 果第一个峰分叉了，其余正常。要知道, 如果是色谱柱损坏，那么所有的峰形均应分叉。后来改用流动相溶解，一切问 题迎刃而解。我的结论：溶剂的洗 脱强度等于流动相，峰形和色谱图会很 完美；若稍低于流动相，