VEGF在儿童血管瘤与血管畸形中的表达及意义

1、VEGF在儿童血管瘤与血管畸形中的表达及意义【摘要】 目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)在儿童血管瘤与血管畸形中的表达，为临床辨别血管瘤及血管畸形、指导血管瘤的治疗及检验治疗效果提供客观有效的指标。方法：采用免疫组化SP法检测VEGF在血管瘤不同分期、血管畸形、正常血管中的表达情况。结果：VEGF在血管瘤中有高表达;在增殖期的表达率高于消退早期和消退晚期(P<0.05)。在血管畸形及正常血管中均未见阳性表达。结论：VEGF在血管瘤中有高表达，且与其分期明显有关。 【关键词】 血管瘤;血管畸形;VEGF;免疫组织化学AbstractObjective：Tostudythedif

2、ferentexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inhemangiomaandvascularmalformationandprovideanefficaciousindexfordistinguishinghemangiomafromvascularmalformation，andforguidingthetreatmentorcheckingupthetreatmenteffectofhemangioma.Method：ImmunohistochemistrySPmethodwasusedtotesttheexpressiono

3、fVEGFateachstageofhemangioma，invascularmalformationandnormalbloodvessels.Results：AnintensiveexpressionofVEGFwasfoundinhemangiomawithahigherexpressiverateattheproliferativestagethanattheearlierorlaterparacmasticstage(P<0.05).NoexpressionofVEGFwasfoundinnormalbloodvesselsandvascularmalformation

4、.Conclusion：ThehigherexpressionofVEGFfoundinhemangiomahasobviouscorrelationwithdifferentstagesofthedisease.Keywordshemangioma;vascularmalformation;VEGF;immunohistochemistry血管瘤是一种血管增生性疾病，可导致多种严重的并发症，甚至可以危及生命。1982年，Mulliken和Glowacki提出了新的分类标准，认为传统分类的“血管瘤”实为“先天性血管病变”，而其又可分为血管瘤和血管畸形两大类1。血管内皮生长因子(vascular

5、endothelialgrowthfactor，VEGF)作为血管内皮细胞特异性生长因子，特异性地作用于血管内皮细胞，参与血管瘤的发生和增殖，对于平滑肌细胞和其它类型细胞则无作用2。为了研究VEGF在血管瘤中的作用，我们利用免疫组织化学方法测定VEGF在血管瘤及血管畸形中的表达情况，进而探讨其在血管瘤增殖、退化过程中的作用及意义。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 研究对象 选取中国医科大学第一临床医院和解放军二二医院2000至2005年共58例手术切除标本，其中男31例，女27例，患儿年龄为1个月至13岁，平均5.5岁。按照Mulliken标准1，将标本分为血管瘤及血管畸形，并将血管瘤标本

6、分为增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤标本共49例，其中增殖期31例，消退早期11例，消退晚期7例;血管畸形为9例，均取自皮肤。另取5例含有正常血管的皮肤标本作为对照。全部标本为10%甲醛固定，石蜡包埋。1.1.2 主要试剂 鼠抗人单克隆抗VEGF抗体、SP超敏免疫组织化学试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒、EDTA均购于福州迈新生物技术公司。1.2 实验方法 免疫组织化学方法检测采用链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(即SP法)。4m厚度连续切片，常规脱蜡入水，一抗为鼠抗人单克隆抗VEGF抗体(克隆号JH121)，所有操作按照SP试剂盒说明进行。抗原修复采用EDTA抗原修复液热浴修复。D

7、AB染色，苏木素复染。同时用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。1.3 结果判定 每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞的百分比。以血管内皮细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性表达。按着色细胞百分数记分，小于20%为0分;20%50%为1分;大于50%为2分。按着色强度记分，无着色为0分;浅棕色为1分;深棕色为2分。将着色细胞百分数记分与着色强度记分相乘，总记分0分为阴性(-);12分为弱阳性(+);4分为强阳性(+)。1.4 统计学分析 采用SPSSforwindows11.5统计分析软件进行分析，对VEGF在血管瘤不同分期中及不同年龄组中的表达采用卡方检验和

8、确切概率法。P<0.05有统计学意义。2 结果VEGF定位于血管内皮细胞胞浆，呈棕黄色颗粒。在31例增殖期血管瘤标本中有30例VEGF表达呈阳性，阳性表达率为96.77%;在11例消退早期血管瘤标本中有7例VEGF表达呈阳性，阳性表达率为63.64%;在7例消退晚期血管瘤标本中有4例VEGF表达呈阳性，阳性率为57.14%。在9例血管畸形标本及5例正常血管标本中均未见阳性表达。对VEGF的表达进行卡方检验，结果发现在血管瘤的不同分期中其表达率存在显著性差异(表1，P<0.05)。表1 VEGF在血管瘤不同时期中的表达3 讨论Fam等3认为血管形成包括细胞外基质的蛋白

9、分解，内皮细胞移行和增生，细胞外基质的产生，血管状结构的形成和管道再通。血管瘤是血管生成异常性疾病，血管生成不受控制是其增殖的主要原因4。VEGF可以对血管生成的各步骤产生影响，从而调节血管的生成。VEGF是存在于内皮细胞的特异性生长因子，对内皮细胞有极强的促有丝分裂作用，而对其它细胞无此作用5，6。在肿瘤、缺血缺氧等情况下，VEGF及其受体呈现高表达，而VEGF不足时会导致血管腔闭合、血管退化7。在对HE染色的血管瘤及血管畸形标本进行分类时观察到：在增生期的血管瘤标本中可见血管丛的内皮细胞增生活跃，细胞肥大，界限不清，常聚集成团，管腔不规则，甚至闭塞。间质内纤维组织很少并有较多的肥大细胞。而

10、从消退早期到消退晚期，则血管内皮细胞逐渐变扁平，内皮细胞数目逐渐减少，管腔明显可见。同时血管间距逐渐增大，血管间结缔组织逐渐增多，并且出现较多脂肪细胞。在血管畸形的标本中发现血管密集，管腔扩张明显，且其内皮细胞与正常的血管内皮细胞无差别，无异常增生现象。免疫组化结果显示：VEGF在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表达阳性率是依次递减的，而在血管畸形标本及正常血管标本中均未见阳性表达。目前认为血管内皮细胞的增殖受多种因素的调节，而VEGF正是其中之一。VEGF的作用机制包括：是内皮细胞特异性有丝分裂原，在体外可促进内皮细胞生长，体内可诱导血管发生。可以提高血管通透性。可以改变胞外基质，使其更有

11、利于血管的生长。许多生长因子如转移生长因子(TGF)刺激血管新生的作用是通过诱导VEGF的表达而实现的8，9。我们的实验结果也证明了VEGF在促血管瘤发生中的重要作用。【参考文献】 1MullikenJB，GlowackiJ.Hemangiomasandvascularmalformationsininfantsandchildren：AclassificationbasedonendothelialcharacteristicsJ.PlastReconstSurg，1982，69：412.2袁新初，周乾毅.转化生长因子1在毛细血管瘤组织中的表达J.武汉大学学报(医学版)，2002，23(3)

12、：213-214.3FamNP，VermaS.ClinicalguidetoangiogenesisJ.Circulation，2003，108(21)：2613-2618.4FolkmanJ.ClinicalapplicationsofresearchonangiogenesisJ.NEnglJMed，1995，333(26)：1757-1763.5TokunagaT，OshikaY，AbeY，etal.Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)mRNAisoformexpressionpatterniscorrelatedwithlivermetastasi

13、sandpoorprognosisincoloncancerJ.BrJCancer，1998，77(6)：998.6AlvarezArroyoMV，CarameloC，AngelesCastillaM，etal.RoleofvascularendothelialgrowthfactorintheresponsetovesselinjuryJ.KidneyIntSuppl，1998，54(68)：7.7易成刚，郭树忠.血管新生的机制及在整形外科领域中的研究进展J.实用美容整形外科杂志，2004，15：315-317.8NeufieldG，TesslerS，Gitay2GohenH，etal.Vascularendothelia