免疫层析技术在微囊藻毒素检测中的应用

1、免疫层析技术在微囊藻毒素检免疫层析技术在微囊藻毒素检测中的应用测中的应用指导教师：答辩人：班级： 学号：一、选题背景一、选题背景 近年来近年来, 水体富营养化已经成为全球关注水体富营养化已经成为全球关注的环境热点问题。富营养化直接导致藻类的环境热点问题。富营养化直接导致藻类大量生长大量生长, 藻类会产生毒素。微囊藻毒素是藻类会产生毒素。微囊藻毒素是其中的最常见的一种具有肝毒性，肾毒性，其中的最常见的一种具有肝毒性，肾毒性，生殖毒性，免疫系统毒性的环状七肽化合生殖毒性，免疫系统毒性的环状七肽化合物。物。 而微囊藻毒素是一种化学性质和化学结而微囊藻毒素是一种化学性质和化学结构都很稳定的化合物，常规

2、饮用水处理技术构都很稳定的化合物，常规饮用水处理技术不能直接有效地脱除水体中的微囊藻毒素，所以不能直接有效地脱除水体中的微囊藻毒素，所以目前快速检测和控制微囊藻毒素显得极为重要。目前快速检测和控制微囊藻毒素显得极为重要。 二、微囊藻毒素的研究现状二、微囊藻毒素的研究现状 就目前来说针对微囊藻毒素的检测方法有就目前来说针对微囊藻毒素的检测方法有生物生物测试法测试法，化学分析法化学分析法，生物化学分析法生物化学分析法等等。生物等等。生物测试法操作快速、简便，灵敏度较低，专一性不高。测试法操作快速、简便，灵敏度较低，专一性不高。化学分析法准确度和灵敏度高，但该方法仪器昂贵，化学分析法准确度和灵敏度高

3、，但该方法仪器昂贵，操作繁琐。生物化学分析法灵敏度高，但选择性差。操作繁琐。生物化学分析法灵敏度高，但选择性差。为了适应我国环保工作的现状要求，水体中微囊藻为了适应我国环保工作的现状要求，水体中微囊藻毒素的检测方法的发展趋势是低成本、便于携带、毒素的检测方法的发展趋势是低成本、便于携带、准确快速、操作简便和灵敏度高。准确快速、操作简便和灵敏度高。三、免疫层析技术三、免疫层析技术 免疫层析技术是一种将免疫技术和色谱层析免疫层析技术是一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法。其原理是以条技术相结合的快速免疫分析方法。其原理是以条状纤维层析材料为固相，借助毛细作用使样品溶状纤维层析材料为

4、固相，借助毛细作用使样品溶液在层析条上移动，同时，液在层析条上移动，同时， 使样品中的待测物与使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体（如抗体或抗原）层析材料上针对待测物的受体（如抗体或抗原）发生高特异、高亲和性的免疫反应，发生高特异、高亲和性的免疫反应， 层析过程中层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过酶促显色反应或直接使用可目（检测带），通过酶促显色反应或直接使用可目测着色标记物短时间便可得到直观的试验结果。测着色标记物短时间便可得到直观的试验结果。 免疫层析技术又叫做免疫层析试纸条技术，免疫层析试纸条的结构主要包

5、括PVC底板，样品垫，结合垫，NC膜，吸收垫。四、实验步骤1、金纳米笼的制备、金纳米笼的制备 2、金纳米笼标记抗体的制备、金纳米笼标记抗体的制备 3、免疫层析试纸条的制备、免疫层析试纸条的制备4、不同浓度的微囊藻毒素的检测、不同浓度的微囊藻毒素的检测 金纳米笼的制备实质上是往一定量的金溶金纳米笼的制备实质上是往一定量的金溶液中加入一定量的还原剂使金离子变成金原液中加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。我们本次做的实验是往子。我们本次做的实验是往HAuCl4溶液中加溶液中加入还原剂抗坏血酸。入还原剂抗坏血酸。 金标抗体的制备实质上是蛋白质等生物大分子在等于或略高于蛋白质等电点时容易与金纳米笼结合形成牢固的复合物。我们本次实验是先把金纳米笼溶液的pH调至9，再往里加微囊藻毒素抗体。不同浓度的微囊藻毒素的检测不同浓度的微囊藻毒素的检测 该图表明不同浓度的抗原，所得到的峰面积不同，可以以此为根据进行微囊藻毒素的定量检测。 缓冲底液对检测的影响 由以上图可以看出，用PBS+Tween作为缓冲底液来稀释抗原对检测的效果最好。五、总结 免疫层析技术可以高效快速的对微囊藻免疫层析技术可以高效快速的对微囊藻 毒素进行定性和定量检测。免疫层析技术毒素进行定性和定量检测。免疫层析技术的这些特点克服了传统检测方法时间长，的这些特点克服了传统检测方法时间长，操作过程复杂，需要大型