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文档简介

1、选修3?现代生物科技专题?知识点总结专题1 基因工程基因工程的概念概念:按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。根本原理:让目的基因在受体细胞内稳定且高效的表达理论根底:DNA是生物遗传物质的发现,DNA双螺旋结构,遗传信息传递方式核心:构建重组 DNA分子一玉因工程的根本工具1“分子手术刀一一限制性核酸内切酶 限制酶1来源:主要是从原核生物中别离纯化出来的。2功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。(3) 结果:经限

2、制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。注意:用同种限制酶分别切割目的基因和载体从而形成相同的粘性末端,然后用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来,有时用不同限制酶也可以形成相同的粘性末端,用两种限制酶切割使目的基因和载体两端各形成两种粘性末端,防止载体和目的基因自身环化2“分子缝合针 一一DNA连接酶(1) 两种DNA连接酶E coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶的比拟: 相同点:都缝合 磷酸二酯键。 区别:EcoliDNA连接酶来源于大肠杆菌,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低

3、。(2) 与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个 DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶DNA聚合酶不同点连接的DNA双链单链模板不要模板要模板连接的对象2个DNA片段1单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上相同点作用实质形成磷酸二酯键化学本质蛋白质3.“分子运输车载体1载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存。 具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。 具有标记基因,供重组DNA勺鉴定和选择。2最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链

4、环状DNA分子。3其它载体:入噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的根本操作程序第一步:目的基因的获取1. 目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。和化学合成法直接别离获得,真核基因是 人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法1PCR勺含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。2目的:获取大量的目的基因3原理:DNA双链复制4过程:第一步:加热至 9095 C DNA解链为单链,断裂氢键;第二步:冷却到 5560 C,引物与两条单链 DNA结合,形成局部双链 DNA第三步:加热至 7075 C,热稳定DNA聚合酶Taq酶从引物起始进行互补链的合成。5特点:指数(2 n)

5、形式扩增6使用的前提:目的基因的一段核苷酸序列第二步:基因表达载体的构建 (核心)1. 目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2. 组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因1启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是 RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRN A最终获得所需的蛋白质。2终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端。3标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。注意:载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两局部D

6、NA片段。表达载体在载体根底上增加了目的基因、启动子、终止子三局部结构用到的工具酶:既用到限制酶切割载体,又用到DNA连接酶将将目的基因和载体拼接,两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键启动子、终止子对于目的基因表达必不可少目的基因不能单独进入受体细胞,必需以表达载体的方式携带进去。第三步:将目的基因导入受体细胞_1. 转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2. 常用的转化方法:T-DNACa2+ 处将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法农杆菌特点:易感染双子叶植物和裸子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力。原理:Ti质粒上的可以转移到受体细胞,

7、并整合到受体细胞染色体的DNA上其次还有 基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原核细胞是大肠杆菌,其转化方法是:先用理细胞,使其成为 感受态细胞,再将重组表达载体 DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。3. 重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步:目的基因的检测和表达1. 首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的

8、基因,方法是采用DNA分子杂交(DNA-DNA技术。2. 其次还要检测目的基因是否转录出mRNA方法是采用分子杂交(DNA-RNA)技术。3. 最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是采用抗原一抗体杂交 技术。4. 有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如生物抗虫或抗病的鉴定等。三基因工程的应用1.植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。2. 动物基因工程:提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物重点:乳腺生物反响器看课本。3. 基因治疗:把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用。4. 基因诊断:又称为 DNA诊断,是采用基因检测的方法来判断

9、患者是否出现了基因异常或携带病原体。四蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为根底,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和 生活的需求。基因工程在原那么上只能生产自然界已存在的蛋白质蛋白质工程中心法那么蛋白质工程的根本途径:从预期的蛋白质功能出发预期功能 傑生物功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列基因蛋白质工程与基因工程区别蛋白质工程基因工程n实质诵过改造幕因,以定向改造天黠舉白 质,甚至创造自然界不存在的蛋白质得目的基丙从供体转移利受陳细 胞,并在受体细胞中憲达结果合戚自然畀不

10、存在的蛋白质只能生产自然畀已捉在的蛋白质蛋白质工程是在基因工程根底上,延伸出的第二代基因工程专题2 细胞工程一植物细胞工程1.理论根底原理: 细胞全能性全能性概念:具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物个体的潜能,也就是说,每个生物细胞都具有全能性的特点。 现实表现:在生物的生长发育过程中,细胞并不会表现出全能性,而是分化成各种组织和器官原因:在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会有选择性地表达出各种蛋白质,分化形成不同的细胞,从而构成生物体的不同组织和器官。 全能性表达的难易程度:受精卵生殖细胞干细胞体细胞;植物细胞动物细胞1原理:植物细胞的全能性2过程:离体的植物器

11、官、组织或细胞愈伤组织 一-试管苗 一-植物体脱分化和再分化3植物组织培养条件:离体的植物细胞、组织、器官无菌和人工控制培养在人工制备的培养基上给予适宜的培养条件4用途:微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产具体的应用看课本38页。5地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。3、植物体细胞杂交技术概念:不同种植物的体细胞融合成一个杂种细胞,杂种细胞发育成新的植物体的方法理论根底:细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 过程:见课本过程注意:去掉细胞壁的方法:酶解法纤维素酶和果胶酶原生质体融合的方法:诱导融合:物理法离心、振动、电激化学法PEG,聚

12、乙二醇意义:因为不同种生物之间存在生殖隔离,此项技术在克服不同生物远缘杂交的障碍上,取得了巨大的突破。二动物细胞工程1.动物细胞培养1概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。2动物细胞培养的流程:取动物组织块动物胚胎或幼龄动物的器官或组织剪碎t用 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 处理分散成单个细胞t制成细胞悬液t转入培养瓶中进行原代培养t贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。3细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到外表相互抑制时,

13、细胞就会停止分裂增殖, 这种现象称为细胞的接触抑制。4动物细胞培养需要满足以下条件 无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,型防培养过程中的污染。此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需参加血清、血浆等天然成分。 温度 CC; pH: 7.2 7.4。 气体环境:95%空气+ 5%CO Q是细胞代谢所必需的,CO的主要作用是维持培养液的 pH。5动物细胞培养技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。1哺乳动物核移植可以分为胚胎

14、细胞核移植比拟容易和体细胞核移植比拟难。2选用去核卵母细胞的原因:卵母细胞比拟大,容易操作;含有促 使体细胞细胞核表现全能性的物质和营养。学习文档仅供参考3体细胞核移植的大致过程是:右图T汕论匕核移植孚咼胚加牙一来毋竽一辛的于宮底障*出生胚胎移植 无陽缁羊孑利"I4体细胞核移植技术的应用:加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育; 生产珍贵的医用蛋白; 用于组织器官的移植等。5体细胞核移植技术存在的问题:选样供体時牛受洋椅牛1 11冲鄭r1保护濒危物种,增大存活数量; 作为异种移植的供体;克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。1动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结

15、合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。2动物细胞融合与植物原生质体融合的原理根本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。3动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性 ,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。1抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中别离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。2单克隆抗体的制备过程:两次筛选:第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 。3 杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。

16、4 单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。5在腹腔内增殖的优点:不需要特定的培养基,不需要严格的外界条件。6筛选的时候用: 特定的选择性培养基 进行筛选。经选择性培养的杂交瘤细胞,还需进行克隆化培养和抗体检测,经屡次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的 细胞。5单克隆抗体的作用: 作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹借助单克隆抗体的导向作用,也有少量用于治疗其它疾病。专题3胚胎工程3.1体内受精和早期胚胎发育胚胎工程的建立精子的发场所:睾丸的

17、曲细精管时间:从初情期开始,到生殖机能衰退I 1匚过程21个初级精母细胞t 2个次级精母细胞t 4个精子细胞通过减数分裂,即精原细胞t多个初级精母细胞通过数次有丝分裂Ml 和 Mil卵子的发3精子细胞t精子通过变形:其中细胞核变为精子头的主要局部,高尔基体发育为头部的顶体,中心体演变为精子的尾 粒体鞘。同时细胞内的其他物质浓缩为球状,叫做原生质滴,随精子的成熟过程向后移动,直到最后脱落。r场所:卵巢时间:从胎儿时期开始胎儿时期完成了卵泡的形成和在卵巢内的储藏,这是精子和卵子在发生上的重要区别丨卵原细胞t初级卵母细胞21个初级卵母细胞t31个次级卵母细胞t1个次级卵母细胞+第一极体排卵前后完成1

18、个卵子+第二极体精子和卵子结合过程中完成受精r概念:场所:精子和卵子结合成合子受精卵雌性的输卵管内1受精前的准备阶段 1:精子获能的过程。,线粒体聚集在尾的基部形成线当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时,说明卵子已经完成了受精,这是判断卵子是否受精的重要标志过程2丨受惊前的准备阶段 2 :卵子的准备到 减数第二次分裂中期,具备与精子受精的能力a.精子穿越放射冠和透明带:顶体反响顶体释放顶体酶可直接溶解卵丘细胞之间的物质,形成精子穿越放射冠的通路,透明带反响在-精子触及卵细胞膜的瞬间,会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反响,这是防止多精入卵受精的第一道屏障3受精阶段 b.进入卵黄膜:

19、卵细胞膜反响这是防止多精入卵受精的第二道屏障卵裂期:细胞在透明带中进行 有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体体积并不增加,或略有减小。早期胚胎发育桑椹胚:胚胎细胞达32个左右,每一个细胞都是 全能细胞囊胚:有囊胚腔,出现孵化过程。内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织。滋养层将发育成胎膜和胎盘。-原肠胚:内细胞团细胞形成外胚层和内胚层,滋养层发育成胎膜和胎盘,内胚层包围着原肠腔3.2体外受精和早期胚胎培养f试管动物技术:通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精,并通过培养发育为早期胚胎桑葚胚或囊胚后,再经移植产生后代的技术。 方法一:用促性腺激素处理,使其超数排卵,从中输卵管冲取精子针对

20、厂卵母细胞的采集实验动物,家畜猪、羊等方法二:从屠宰母畜卵巢中采集II方法三:借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具直接从活体母畜卵巢中吸取针对大家畜或大型动物,如牛体外受精 卵母细胞的培养:在体外人工培养成熟减数第二次分裂中期精子的采集:方法有假阴道法、手握法和电刺激法等 精子的获能:方法有培养法通过获能培养液、化学诱导法通过肝素或钙离子载体A23187I获能溶液或专用的受精溶液V受精:获能的精子 +培养成熟的0 完成受精胚胎早期培养f条件:受精卵在发育培养液中培养培养液成分:无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等两盐,两素,两酸,水血清当胚胎发育到适宜的阶段时,可将其取出向受

21、体移植,或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同,牛羊一般要培养到桑椹胚阶段或囊胚阶段才进行移植,人的体外 受精胚胎,即试管胚胎,可在 8到16个细胞阶段移植3.3胚胎工程的应用及前景概念:是指将雌性动物体内的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎核移植技术和转基因动物,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体叫供体遗传特性和生产性能优秀 丨,接受胚胎的个体叫受体 有健康的体质和正常繁殖能力 丨。应用:胚胎移植是转基因、核移植、或体外受精等技术的最后一道“工序现状:在牛的胚胎移植中,技术方法更为简便、实用。意义:可 充分发挥雌性优良个

22、体繁殖潜力。供体主要职能 只是产生优良特性的胚胎,缩短繁殖周期学习文档仅供参考实质:见课本胚胎移植1生理学根底门广胚胎移植成功与否关系到:供体和受体的生理状况丨供、受体生殖器官的生理变化相同,为胚胎提供相同的生理环境2丨早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系,为胚胎收集提供可能3受体对外来胚胎根本不发生免疫排斥反响,为胚胎的存活提供可能4胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但其遗传物质在孕育过程中不受影响供、受体的选择选择的条件,见课本和处理使用激素进行 同期发情 处理、促性腺激素超数排卵 处理 2配种或人工受精根本程序3丨胚胎收集冲卵早期胚胎、检查胚胎发育到 桑椹胚或囊胚丨、培养或保存-1

23、96 C的液氮 4胚胎移植:手术法引出子宫和卵巢将其注入;非手术法用移植管将其送入子宫I 5移植后的检查是否妊娠丨等概念:指采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。r仪器设备:实体显微镜和显微操作仪意义:来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质,属于无性繁殖。操作程序J选择发育良好、形态正常的 桑椹胚或囊胚,移入盛有操作液的培养皿胚胎分割21用分割针或分割刀切开胚胎,吸出半个,注入空透明带或直接将裸半胚移植给受体。分割囊胚时要将内细胞团均等分割, 否那么会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此时还可用分割针分割滋养层,做胚胎DNA分析性别鉴定。局限:刚出生的动物

24、体重偏低,毛色和斑纹上存在差异,同卵多胎的可能性有限。广 概念:由早期胚胎或原始性腺 中别离出来的一类细胞。简称 ES或EK细胞。形态上:体积小、细胞核大、核仁明显功能上:具有发育的全能性,即可分化为成年动物体任何一种组织细胞;在体外可增殖而不发生分化;可冷冻保存;可进行遗传改造丨移植ES细胞修复坏死或退化部位,治愈糖尿病、肝心衰竭、成骨不良等病症器官移植后免疫排斥的问题胚胎干细胞特点1意义- 2ES细胞体外诱导分化,可培育人造组织器官,解决供体器官缺乏和ES细胞在牛黄酸、丁酰环腺苷酸等 分化诱导因子作用下可向不同类型组织细胞分化一动物胚胎发育的根本过程 1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所

25、进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎,还需移 植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。二胚胎干细胞3、胚胎干细胞的主要用途是:可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律; 可以用于治疗人类的某些顽疾,如帕金森综合症、少年糖尿病等;三胚胎工程的应用8-16个细胞阶不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植,小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植,人的体外受精胚胎可在段移植。)专题4 生物技术的平安性和伦理问|中国政府的态度: 禁止生殖性克隆,不反对治疗性克隆。生物武器(1) 种类:致病菌、病毒

26、、生化毒剂,以及经过基因重组的致病菌。(2) 散布方式:吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。(3) 特点:致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易被发现、危害时间长等。(4) 禁止生物武器公约及中国政府的态度专题5生态工程一、生态工程的根本原理1、生态工程的概念1原理技术应用 生态学和系统学等学科的根本理论和方法通过系统设计、调控和技术组装2操作对 已破坏的生态环境 进行 修复、重建 _对已造成环境污染和破坏的传统生产方式进行改善3结果提高生态系统的生产力促进人类社会和自然环境的和谐开展。2、生态工程所遵循的根本原理1生态工程建设的目的:遵循自然界物质循环的规律,充分发挥资源的生产潜力,防止环境污染,到达经济效益 和

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