解脲支原体对七种抗菌药物的敏感性测定及其与相关耐药基因检测的

1、解脲支原体对七种抗菌药物的敏感性测定及其与相关耐药基因检测的比较    (六)统计学分析： 抗菌药物的MIC分析采用百分位数法：MIC分布比较采用Ridit分析；四 环 素MIC中度敏感以上的Uu株对其它抗菌药的敏感性分析，计算几何均数G。 结果 (一)7种抗菌药体外抗Uu标准株14型及分离株的敏感性测定：实验表明三类抗菌药物对Uu标准株14型具有良好抗菌作用，其中四环素类的MIC均为1μg/ml、喹诺酮类及大环内酯类的MIC分别为2μg/ml及1μg/ml，复孔间差异小，结果稳定，均匀一致。7种抗菌 药体外抗U

2、u分离株作用的敏感性测定表明，测试药物中以阿奇霉素对Uu作用最强，其次为红 霉素；喹诺酮类中以环丙沙星效果较好，抑菌范围为0.1254μg/ml；四环素、美满霉 素、强力霉素对Uu的抗菌活性较差，其MIC90已分别达16μg/ml、4μg/ml及8μg/ml 。 (二)临床Uu分离株中7种抗菌药MIC的相关分析：表1显示7种抗菌药物对42株Uu分离株MIC的分布情况。从表1中看出四环素MIC达8μg/ml以上有12株，强力霉素MIC达4μg/ml以上有10株，美满霉素MIC达4μg/ml以上有7株

3、；大环内酯类的抑菌效果最佳，其中红霉素作用中有1 5株、阿奇霉素作用中有12株的MIC仅为0.06μg/ml，经多组Ridit分析表明，红霉素、阿奇 霉素与四环素的R值比较差异有显著性(P<0.05)，但与其它抗菌药的R值 比较差异无显著性(P0.05)。结果提示大环内酯类对Uu的抑菌效果较好 ，四环素较差，余属一般，其抑菌效力依次为美满霉素、环丙沙星、氧氟沙星及强力霉素。 (三)四环素中度敏感以上Uu株对其它抗菌药的MIC分布：表2列举出12株四环素MIC≥8μg/ml的Uu对其他6种药物的MIC分布情况。可以看出四环素MIC 值较高者

4、，强力霉素及美满霉素的MIC值均也较高，但大环内酯及喹诺酮类的MIC值较低，说明这些Uu菌株对四环素类敏感性降低，而对后两类仍较敏感。几何均数表明此12例Uu分离株 对7种抗生素的敏感性依次为阿奇霉素、红霉素、氧氟沙星、环丙沙星、美满霉素、强力霉素和四环素。但对红霉素与阿奇霉素而言，个别菌株已达8μg/ml。 (四)42株Uu分离株tetM基因的扩增：分离株DNA经PCR扩增以后，在琼脂糖凝胶电泳上于397b p 表17种抗菌药物对42株解脲支原体MIC分布比较 药物 MIC(μg/ml) 0.06 0.12 0.25 0.5 1 2 4 8 16 32 64 合

5、计 四 环 素 7 3 4 7 1 4 4 5 3 4 0 42(n1) 红 霉 素 15 7 6 3 4 3 1 2 1 0 0 42(n2) 美满霉素 11 4 4 5 5 6 7 0 0 0 0 42(n3) 强力霉素 9 2 7 5 3 6 5 5 0 0 0 42(n4) 阿奇霉素 12 5 7 8 6 0 2 2 0 0 0 42(n5) 环丙沙星 0 9 6 8 9 8 2 0 0 0 0 42(n6） 氧氟沙星 2 7 10 10 7 5 0 0 0 0 1 42(n7) 合计 56 37 44 46 35 32 21 14 4 4 1 294 表2四环素中度敏感以上Uu株的其

6、他抗菌药的MIC分布 编号 MIC(μg/ml) 四环素 强力霉素 美满霉素 氧氟沙星 环丙沙星 红霉素 阿奇霉素 2 32 8 4 4 1 4 0.5 5 8 4 4 1 0.5 1 0.5 6 32 8 4 2 2 2 0.5 7 16 8 4 2 2 2 1 9 16 8 4 2 2 1 0.5 15 8 2 2 1 4 0.12 0.12 17 32 4 1 2 2 1 1 21 32 4 4 0.5 0.5 0.5 0.12 23 16 8 4 0.25 0.5 0.06 0.06 25 8 4 2 0.5 4 0.06 0.06 26 8 4 2 0.25 0.5 0

7、.06 0.06 36 8 2 2 0.25 0.25 8 8 G 15.10 4.76 2.83 0.89 1.12 0.59 0.33 处可见一明显的条带(图1)，与PCR DNA标记所示分子量相似的阳性 带有30例，阳性检测率为71.4%。 (五)tetM PCR产物的酶切反应：42个Uu分离株中30株经PCR扩增出现单条397特异性扩增带，将扩增产物用Taq-1限制性内切酶保温过夜酶解后，在2%琼脂糖凝胶电泳上出现预期三条清晰酶切片段，1株未出现预期三条酶解带(图2)。 图1Uu分离株tetM基因的PCR产物 Lane 1PCR marker，Lane 2Lane 16酶切产物 图 2

8、tetM PCR产物的酶解结果 (六)tetM基因检测与MIC的关系：表3示tetM检测结果与四环素族MIC浓 度的分布，四环素MIC为0.06μg/ml的也被检出tetM基因，如第19、30、38株等 ，第5株MIC=8μg/ml的模板DNA并未扩增出 表3tetM基因检测 与四环素族MIC浓度的关系 编号 tetM MIC(μg/ml) 四环素 美满霉素 强力霉素 1 + 0.5 0.12 0.25 2 + 32 4 8 3 - 0.5 0.12 0.12 4 - 0.25 0.25 0.25 5 - 8 4 4 6 + 32 4 8 7 + 16

9、 4 8 8 - 0.12 0.06 0.06 9 + 16 4 8 10 + 2 1 1 11 - 0.25 0.12 0.12 12 + 0.12 0.06 0.06 13 + 0.5 0.5 0.25 14 + 4 1 2 15 + 8 2 2 16 + 0.5 0.5 0.5 17 + 32 1 4 18 - 0.5 0.25 0.06 19 + 0.06 0.06 0.06 20 + 2 2 2 21 + 32 4 4 22 + 2 0.5 1 23 + 16 4 8 24 - 0.06 0.06 0.06 25 + 8 2 4 26 + 8 2 4 27 + 1 0.25 0.25

10、 28 + 4 0.5 0.5 29 + 4 1 2 30 + 0.06 0.06 0.25 31 + 0.06 0.06 0.06 32 - 0.25 0.25 0.5 33 - 0.25 0.06 0.06 34 - 0.06 0.06 0.06 35 - 0.06 0.06 0.06 36 + 8 2 2 37 - 0.12 0.06 0.06 38 + 0.06 0.06 0.25 39 + 0.5 0.5 0.5 40 + 0.5 0.12 0.25 41 + 4 2 2 42 + 2 1 1 tetM基因片段。 讨论 目前，持续性复发性非淋菌性尿道炎已成为日益常见和棘手的问题。虽然尚不清楚在急性NGU治疗后出现复发性持续性NGU的病例有多少，但大多数是在四环素类药物治疗症状减轻或渐消失后重新出现明显轻于急性期的有关症状。四环素类药为微生物蛋白合成抑制剂，测定Uu标准株对四环素类、喹诺酮类及大环内酯类亦均有较好而稳定的抑菌效果，而42个临床株对7种抗菌素的MIC分布差异较大。 从表1可看出，红霉素及阿奇霉素的MIC仅在0.06μg/ml就可分别抑制15株及12株的Uu分离 株生长，提示抑菌效率高。在四环素族中，四环素效果较差，只7株MIC=0.06&a