洁净区环境监测操作规程

1、洁净区环境监测操作规程1 目的用于规范洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌监测的操作。2 适用范围适用于洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌观察的测定。3 职责3.1 质量保证部QA负责噪音、照度的检测。 3.2 生产车间人员负责温湿度、压差的观察。 3.3 生产部空调操作人员负责温湿度、压差的调控，并及时反馈信息。 3.4 设备工程部计量人员负责监控仪器、仪表的定期校验。 3.5 质量控制部人员负责洁净区的沉降菌的配制、计数、报告的完成。 3.6 质量保证部现场监控QA负责洁净区的沉降菌的监测。 3.7 生产车间配合洁净区沉降菌监测的完成。 3.8 QC人员负责浮游菌的监

2、测。4 内容4.1 洁净区洁净等级划分 4.1.1 A级：指高风险操作区，如：灌装、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。 4.1.2 B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。 4.1.3 C级和D级：指生产无菌药品过程中重要程度较次的洁净操作区。4.2 温湿度 4.2.1标准规定：洁净区的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应。无特殊要求时，洁净区温度为1826，相对湿度控制在45%65%。有特殊要求车间根据工艺控制。 4.2.2 温度观察：检查温湿度计是否完整，视线正对温湿度计水平读取显示的数据，需

3、要记录的应立即填入表格中。 4.2.3 湿度观察：视线正对湿度表，准确读数。需记录的应立即填入表格中。 4.2.4 需要加水的湿度计，在观察前应检查在蓄水腔内是否有水，无水则需加入适量水，再观察湿度。 4.2.5 洁净区的温湿度每天至少记录两次，上午一次，下午一次。 4.2.6 设备计量人员每年至少组织校验一次监控系统的仪器设备。 4.3 静压差 4.3.1 湿度观察：标准规定：洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡，相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持2-3帕的压差梯度，以防止污染和交叉污染。 4.3.2 产尘房间与相邻房间呈相对负压。 4.3.3 洁净区的静压

4、差以微压差计显示，每日至少记录两次，上午一次，下午一次。（包括洁净区与室外，不同洁净级别间及所有有压差指示的房间）。 4.3.4 测试时所有的空调系统和层流系统应处于连续的正常运行状态。 4.3.5 洁净室所有的门应关闭，测试时不允许有人穿越房间。 4.3.6 当发现监测结果超出标准规定的范围时，应立即检查原因，必要时对空调系统进行调整。 4.4 噪音 4.4.1 标准规定：洁净区噪音不得高于70分贝。 4.4.2 洁净区的噪音检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测噪音。 4.4.3 检测方法 检测点布置，当面积50m2时，仅测房间中心一

5、个点；当房间面积较大时，每增加50m2增加一个点，测点距在1.2m。 4.5 照度 4.5.1 标准规定：洁净区主要操作间照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均匀度不应小于0.7。 4.5.2 洁净区的照度检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测照度。 4.5.3 检测要求：室内照度测度必须在室温已趋稳定，光源光输出趋于稳定后进行（对荧光灯必须有100h）。 4.5.4 检测方法 Ø 测点平面离地面0.85m，按间距1-2m布点，测点距墙面1m。其要求基本与洁净度的测定位置要求相同。记录实测照度值并计算总的平均照度。 照度测量

6、一般仅测定除局部照明之外的一般照明。 4.6 沉降菌4.6.1 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.6.2 使用的仪器和设备 4.6.2.1 高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 4.6.2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 4.6.2.3 培养皿 一般采用90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。 使用前将培养皿置于121湿热灭菌20min。 4.6.2.4培养基：普通营养琼脂培养

7、基。Ø 将培养基加热熔化，冷却至约45在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入3035恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在28的环境中存放。 4.6.3 测试步骤 4.6.3.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。 4.6.3.2 培养Ø 在3035培养，时间为5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。 4.6.3.3 菌落计数： Ø 用肉眼

8、直接计数，然后用510倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 4.6.4 注意事项 4.6.4.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.6.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.6.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.6.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。 4.6.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.6.5 测试规则 4.6.5.1 测试状态

9、Ø 沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。 Ø 沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。 Ø 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 4.6.5.2 测试人员 Ø 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。 Ø 静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。 4.6.5.3 测试时间 Ø 对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 Ø 对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常

10、运行不少于30分钟开始。 4.6.5.4 沉降菌采样点 Ø 采样点数目及其布置： Ø 最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2。 Ø 采样点的布置： 工作区测试点位置离地0.81.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。4.6.5.5 记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。 表1 最少采样点数目面积（）洁净度级别A、B 级C 级D 级102-32210-2042220-4

11、082240-1001642100-20040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积表2 最少培养皿数洁净度级别所需90mm培养皿数（以沉降0.5h计） A 级14B、C 级2D 级24.6.6 结果计算 4.6.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 4.6.6.2平均菌落数的计算见下式：式中：m为平均菌落数；m1 为1 号培养皿菌落数； m2 为2 号培养皿菌落数； mn 为n 号培养皿菌落数； n 为培养皿总数。4.6.7 结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。 4.6.7.1 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标

12、准。见表3。 4.6.7.2 若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。 4.6.7.3 重新测试仍不合格，按“洁净室环境监控管理规程”进行超标调查。 表3级别状态A 级B 级C 级D 级标准（静态）1个/皿1个/皿3个/皿10个/皿标准（动态）1个/皿5个/皿50个/皿100个/皿4.7 浮游菌4.7.1取样前准备工作：4.7.1.1 依据检测区域的取样点数，按照培养基配制、灭菌标准操作程序制备适量的营养琼脂培养基。4.7.1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。4.7

13、.1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于3035培养48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。4.7.1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。4.7.2仪器、设备和培养基：4.7.2.1 所用的仪器、设备和培养基：Ø 浮游菌采样器Ø 培养皿（90mm×15mm）Ø 培养基（营养琼脂培养基）Ø 恒温培养箱4.7.2.2 仪器、设备、培养基的要求：Ø 浮游菌采样器：ü 浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。ü 应严格按仪器说明书的要求进行操作。ü 采样器必须按仪器的检

14、定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。ü 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。ü 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。ü 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。4.7.3 测试方法：4.7.3.1 测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。Ø 采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。Ø 用消毒剂擦净培养皿的外表面。Ø

15、采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。Ø 采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。Ø 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。4.7.3.2 采样程序：Ø 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。Ø 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。Ø 置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采

16、样量设定采样时间。4.7.4测试规则：4.7.4.1 测试状态：Ø 浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。Ø 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。4.7.4.2 测试人员：Ø 测试人员必须穿戴符和被测环境级别的工作服。Ø 静态测试时，室内人员不得多于2人。4.7.4.3 测试时间：Ø 对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。Ø 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。4.7.4.4 最少采样点数目及其布置，最小采样量，见下表:面积（m2）洁净度级别ABC验证监测验证监测验证监测10231212-102042212-204083212-40100164412-10020040-10-3-20040080-20-6-400160-40-13-Ø 工作区测点位置离地0.8m1.5m左右，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。Ø 每个采样点一般采样一次Ø 对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。Ø 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。Ø 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。4.7.5 培养：取样结束后将平皿