实验一果蝇的性别鉴定、性状观察及饲养方法

1、实验一 果蝇的性别鉴定、性状观察及饲养方法试验 131周日 第四组 胡尧 1301080324郑安迪 钟瑞 胡尧 周易摘要:本文记录了果蝇(Drosophila melanogaster 性别鉴定、性状观察与饲养的方法,对比雌雄个体间差 异,拍照记录并设计表格记录了野生型及棒眼、残翅、黑檀体和三隐性 4种突变体的性状,配制果蝇培养 基, 练习了如何麻醉和转移果蝇等。 利用 FlyBase 数据库了解了果蝇残翅基因vg 的相关信息, 同时对 FlyBase 基因组数据库的使用有了初步了解。1. 引言果蝇是遗传学研究重要的实验材料和模式生物,属双翅目果蝇科。因为其易于饲养, 染 色体数目少, 具有

2、许多天然的或诱发的可遗传突变性状等优点而受到全世界遗传学家学家的 广泛关注和使用,并且利用果蝇解决了一系列重大的遗传学问题。我们的果蝇杂交实验, 是 重走经典科学研究之路, 也能掌握一定的实验方法和技能, 也有利于我们今后的学习和研究。2. 实验材料与方法2.1实验动物、仪器和试剂野生型黑腹果蝇 (D. melanogaster 以及四种突变体:黑檀 (ebony body , ee 、 棒眼 (bar, BB 、三隐 (miniature wing , mm ; white eye , ww ; singed bristle , sn 3sn 3 和残翅 (vestigial , vgvg

3、。 主要实验工具:培养瓶 7个、麻醉瓶一个、瓶塞若干、冰袋一个、体视显微镜一台、 解 剖针一支、滤纸若干。其他仪器:生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、培养基配料、玻璃板和小烧杯等。2.2实验方法1 取平整的冰袋放置在体视镜的操作台上, 铺上一张滤纸, 并在滤纸表面刷一层水 使之与冰袋贴合紧密 【1】 ,打开体视镜的灯,对好焦。2拿出培养瓶,轻拍培养瓶壁,让果蝇震落到培养基上。之后迅速打开瓶塞倒扣着 罩上麻醉瓶,等待果蝇沿着瓶壁自行爬到麻醉瓶顶端。3将麻醉瓶转移到冰袋上,轻拍瓶壁,让果蝇震落到滤纸上等待果蝇自行麻醉。4观察时用解剖针轻轻拨动观察。注意不要用力过大弄伤果蝇 【2】 。注释:【1】既要防止

4、果蝇被冷凝水淹死,又可以保持果蝇接触环境温度不至于过低(低于-6°C对果蝇有 伤害 ,【2】 注意不要用力过大弄伤果蝇, 尤其是留作交配的雄性果蝇, 会通过振动翅膀吸引雌蝇前来交配, 若损伤雄蝇翅膀则可能影响交配成功率。黑腹果蝇的雌雄差异明显,主要有以下特征:(1 大小 雌体通常比雄体大。(2 形态 雌体腹部稍尖,较宽厚呈卵圆形;雄体腹部钝圆,相对窄小呈柱状。(3 条纹 雌体腹部背面有宽窄相近的 5条黑色条纹;雄体腹部只有 3条,上部 2条窄,最后 1条宽且延伸至腹部腹面,呈一明显黑斑。(4 性梳 果蝇胸足跗节共有 5亚节。雄蝇第一对胸足跗节的第一亚节基部有一 梳状黑色鬃毛结构, 即

5、“性梳”, 放大 100倍左右可看清这一结构。 雌蝇没 有性梳。(5 外生殖器 果蝇外生殖器位于腹部腹面末端。雄蝇外生殖器色深,雌蝇外生 殖器色浅。收集处女蝇时, 因果蝇大多刚刚羽化为成虫, 性征发育尚不完全, 体色也还没有性 成熟的成年果蝇着色深, 故应以外生殖器结构差别为主, 综合多种性别差别来判断, 确保万无一失。我们主要观察 野生型黑腹果蝇 (D.melanogaster 以及四种突变体:黑檀(ebony body , ee 、棒眼(bar, BB 、三隐(miniature wing , mm ; white eye , ww ; singed bristle , sn 3sn 3

6、和残翅(vestigial , vgvg 的突变性状以及区别雌雄差异。即体色、眼的形状和颜色, 翅膀的大小和形状还有刚毛的特征。酵母菌是果蝇的幼虫和成虫的主要食物, 凡是能发酵的物质都可成为它们的培养基。 本实验室使用玉米粉等物质作为培养基,以配制 1000mL 培养基为例说明配制的过程:称取 105g 玉米粉、 75g 蔗糖和 7.5g 琼脂待用。量取 1000mL 水,一半倒入锅中,加入琼 脂加热溶解。水开后加入蔗糖,搅拌均匀。然后将玉米粉加到剩余的水中,搅拌均匀, 沿锅边慢慢倒入,边倒边搅拌使玉米粉不致结块。继续煮几分钟,培养基成为糊状物时 即可离火。加入用于防腐的丙酸及酵母粉,搅拌均匀

7、即可用洗净的小烧杯分装,再倒入 事先灭好菌的培养瓶中。培养基在室温下干燥 1-2天,待其表面完全凝固后使用,表面 太软将粘住果蝇致其死亡。 培养基不能久存,最好在一个星期内使用。温度对果蝇的生长发育影响较大,25是最适生长温度,此温度下果蝇的活力强; 30以上的高温则可能致死;在 10-20环境中生活周期延长;低于 10则可能影响生 活力。利用此特性可调节果蝇生长,控制群体大小。比如原种培养旨在保种,可将培养 瓶置于 18-20培养;杂交实验需要大群体,则将培养温度设为 25。3.观察结果记录3.1性别鉴定照片记录如下:a bc da.野生型雌性背面(有明显的条纹 ;b.野生型雄性背面(尾部条

8、纹颜色很深,连成一片 ;c.三隐雌性外 生殖器;d.黑檀雄性外生殖器3.2果蝇的性状观察首先比较一下五种果蝇的颜色、眼形、翅形、平衡棒、刚毛和体色等性状。 具体见表 1。 1野生型的观察 2黑檀的性状观察 3棒眼的性状观察 4三隐的性状观察 5残翅的性状观察 4.讨论 在 /上查找果蝇的残翅基因 vg （/reports/FBgn0003975.html）是一个位于 2 号染色体上、编码蛋白 质的核基因， 长度为 14753bp， 具有 390 个等位基因。 其在细胞遗传图上的位置为 49E1-49E1， 序列位置为 2R:12,884,632.12,899,385 +。 在基因组图谱上的位置如