设计开发方案

1、设计研发方案项目名称全程C反应蛋白(hs-CRP+常规CRP)检测试剂盒（胶体金法）降钙素原（目标物）检测试剂盒（胶体金法）人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白I三合一检测试剂盒（胶体金法）N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）检测试剂盒（胶体金法）心肌肌钙蛋白I检测试剂盒（胶体金法）起止日期2015.3-8依据的标准、法律法规及技术协议的主要内容：1.医疗器械监督管理条例国务院第276号2.医疗器械生产监督管理办法局令第12号3. 医疗器械临床试验规定局令第5号4. 医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定局令第10号5. 医疗器械分类规则局令第15号6. 医疗器械注册管理办法局令第16号

2、7. 体外诊断试剂注册管理办法（试行）国食药监械【2007】229号8. 体外诊断试剂生产实施细则（试行）国食药监械【2007】239号9. 体外诊断试剂临床研究技术指导原则及体外诊断试剂说明书编写指导原则国食药监械【2007】240号设计内容（研发起源、检测技术及方法概述、市场及产品分析、项目预期成果指标、项目研发思路、主要生产工艺及反应体系研究、项目实施方案、项目经费预算）：【研发起源】 五项目的临床意义和综述类资料【检测技术及方法概述】本检测试剂盒采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术，检测人全血/血浆样本中人目标物的含量。检测试剂盒含有预先包被在玻璃纤维上的胶体金标记的抗目标物（A

3、b1）与及固定于膜上测试区（T）的抗目标物（Ab2）和质控区（C）的相应抗体。测试时，将标本滴入试剂盒加样孔（S）内, 如是阳性标本，则标本中的目标物与预先包被在玻璃纤维上的金标记抗目标物（Ab1）结合，结合物在毛细效应下向上层析，随后会被固定在膜上相应测试区（T）的抗目标物（Ab2）结合捕获，从而在测试区（T）出现紫红色条带。如是阴性标本，则测试区（T）内将没有紫红色条带出现。无论标本中是否存在目标物，一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。通过金标免疫分析仪检测测试区（T）显色深度，再经

4、过保存在卡壳上二维码上的定标曲线计算得到检测结果。【市场产品分析】 五个项目与目前市场主流产品性能对比【项目预期成果指标】项目全程CRP心梗三项NT-proBNPPCT灵敏度0.5ug/mlMYO:12.5ng/mlCTNI:0.5ng/mlCK-MB:5ng/ml250Pg/m0.5ng/ml线性范围和相关系数0.5ug/ml200ug/mlr0.950MYO:12.5-500ng/mlCTNI:0.5-50ng/mlCK-MB:5-50ng/mlr0.950250Pg/ml10000Pg/mlr0.9500.5-50ng/mlr0.950CV值CV：8%-12%CV：8%-15%CV：8%

5、-10%CV：8%-12%准确性准确性12%准确性12%准确性8%准确性12%批内差15%15%15%15% 批间差20%20%20%20%加样量60-80ul60-100ul60-80ul60-80ul检测时间15-20min15-20min15-20min15-20min保存条件4-304-304-304-30有效期12个月12个月12个月12个月自动化程度半自动半自动半自动半自动样本类型血清/血浆/全血血清/血浆/全血血清/血浆/全血血清/血浆/全血金标检测仪和卡壳CV值3%3% 3% 3%【项目研发思路】1. 研发思路本检测试剂盒采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术，检测人全血/

6、血浆样本中人PCT的含量。检测试剂盒含有预先包被在玻璃纤维上的胶体金标记的抗PCT（Ab1）与及固定于膜上测试区（T）的抗PCT（Ab2）和质控区（C）的相应抗体。测试时，将标本滴入试剂盒加样孔（S）内, 如是阳性标本，则标本中的PCT与预先包被在玻璃纤维上的金标记抗PCT（Ab1）结合，结合物在毛细效应下向上层析，随后会被固定在膜上相应测试区（T）的抗PCT（Ab2）结合捕获，从而在测试区（T）出现紫红色条带。如是阴性标本，则测试区（T）内将没有紫红色条带出现。无论标本中是否存在PCT，一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否

7、正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。通过金标免疫分析仪检测测试区（T）显色深度，再经过保存在卡壳上二维码上的定标曲线计算得到检测结果。2. 技术路线烧金筛选配对抗体确定最佳PH值确定最小蛋白用量标记离心喷金烘干配制包被液包被抗体点膜烘干裁剪卡条组装测试【主要生产工艺及反应体系研究】POCT心肌类定量检测试剂盒的主要生产工艺及反应体系的研究资料主要包括下列内容： 1、主要生产工艺描述及确定依据；2、反应体系的组成；3、被测样本的要求；4、试剂用量、体系的反应条件、体系有效性的确定方法及相关验证资料：4.1 包被浓度的确定；4.2 标记蛋白的用量确定；4.3 重悬液配方确定；4.4 包被液配方确

8、定；4.5 划膜浓度确定；4.6 标记蛋白稀释浓度确定；4.7标记时间确定；4.8烧金工艺确定；4.9样品垫处理液配方确定；4.10标记PH值确定；4.11样本量确定；4.12配对抗体确定； 产品生产工艺的要点难点 1. 配对抗体的选择 2. 包被浓度和标记量的确定3. 稳定合格的烧金工艺 4. 标准曲线的确定5 算法确定 6 补偿函数的确定产品对配套的金标定量检测仪的要求1. 卡条规格为4mm*70mm，所选检测仪所用的卡壳符合规格2. 检测仪准确性：同一卡壳同一试纸条连续测试10次，所得CV值小于1%3. 最低响应信号值为A,其检测范围大于500A4. C,T颜色深浅变化转变成光强变化，检

9、测仪上要显示本底AD，C线AD，Rc峰值，Rc总值，T线AD，Rt峰值，Rt总值5. 检测仪由光强转变成浓度的算法要可变的，便于添加补偿函数。6. 检测仪反应灵敏度小于30个光强单位7. 检测结果取值如果采用散点法，有效点大于100个8. 检测仪软件部分应包含图像分析功能，对全血/血浆样本造成底板污染的卡条，能先处理后再取值9. 检测仪对是否准确放置测试卡要有对应提示10. 检测仪软件扫描具有时间提取功能（产品保质期12个月，但是产品在3,6,9,12个月性能是不一致的，导致产品的标准曲线不是一条，通过补偿函数调节。检测仪扫描产品的生产日期和检测仪自身的测试日期之差确定采用对应的标准曲线）PC

10、T荧光定量检测试剂盒的主要生产工艺及反应体系的研究资料主要包括下列内容： 1、主要生产工艺描述及确定依据；2、反应体系的组成；3、被测样本的要求；4、试剂用量、体系的反应条件、体系有效性的确定方法及相关验证资料：4.1 配对抗体确定；4.2 交联液配方；4.3 蛋白质:FITC值确定；4.4 终止反应条件和时间；4.5 透析次数确定；4.6 交联物的鉴定；4.7 FITC交联的蛋白储存；4.8交联蛋白PH值确定； 产品生产工艺的要点难点 1. 配对抗体的选择 2. 交联蛋白PH值确定3. 稳定的交联蛋白制做工艺 4. 标准曲线的确定5 算法确定 6 灵敏度确定7. 线性范围确定8. 稳定性考察

11、产品对配套的荧光定量检测仪的要求1.卡条规格为4mm*70mm，所选检测仪所用的卡壳符合规格2.检测仪准确性：同一卡壳同一试纸条连续测试10次，所得CV值小于1%3.最低响应信号值为A,其检测范围大于500A4.检测仪软件部分应包含图像分析功能，对全血/血浆样本造成底板污染的卡条，能先处理后再取值5.检测仪对是否准确放置测试卡要有对应提示6.检测仪软件扫描具有时间提取功能（产品保质期12个月，但是产品在3,6,9,12个月性能是不一致的，导致产品的标准曲线不是一条，通过补偿函数调节。检测仪扫描产品的生产日期和检测仪自身的测试日期之差确定采用对应的标准曲线）主要生产工艺的各主要工序流程图蓝色工序

12、在10万级洁净区内进行，其他工序在普通生产领 料配包被用液体配标记用液体配包被溶液标记包 膜稀释金标交联溶液喷 金晾 干 干 燥No不合格品控制不合格品控制半成品检验半成品检验NOYesYes入 库入 库组 装NO o放 行成品检验不合格品控制总 装定 标Yes荧光定量工艺示意图 产品验证方案验证项目所需产品份数 验证方法验证人员准确性9用同一批号试剂，分别测定浓度为(L、0.5H+0.5L、H)的内部参考品，每个参考品重复检测3次质量部，生产部最低检测限20用同一批号试剂20份，对浓度低于L的山羊血清即空白样本进行测定，计算其吸光度平均值（A0）和标准差（SD）。利用剂量-反应曲线计算出吸光

13、度为A0+2×SD时的浓度值即试剂最低检测限（95%置信区间）质量部，生产部线性15用抗原浓度接近检测上限的高浓度内部参考品（H）和接近检测下限低浓度内部参考品(L)，按以下混合比例（L、0.25H+0.75L、0.5H+0.5L、0.75H+0.25L、H）混合成5个稀释浓度（Xi），每个浓度测定3次，分别求出检测结果均值即为实测值（Yi）。以稀释浓度（Xi）为自变量，以检测结果实测值（Yi）为因变量求出线性回归方程质量部，生产部 重复性10取同一批号的产品，测定（0.5H+0.5L）内部参考品，平行测定10次，分别计算平均值M和标准差SD,根据公式CV=SD/M×100

14、%得出变异系数CV质量部，生产部批间差30抽取三批试剂盒，测定（0.5H+0.5L）内部参考品，每个批号重复检测10次，计算30次测量结果的平均值M和标准差SD,根据公式CV=SD/M×100%得出变异系数CV质量部，生产部分析特异性9在（0.5H+0.5L）内部参考品中分别加入胆红素、血红蛋白、甘油三脂，使干扰物最终浓度胆红素250mg/L,血红蛋白2.5g/L,甘油三脂5.0g/L。用同一批试剂对参考品及各干扰样本分别重复测定3次，计算样本检测结果的均值及相对偏差质量部，生产部产品临床验证方案准备阶段确定两家临床医院，签订临床实验协议购买对比试剂，生产临床所需产品1000人份在确定的临床医院取赋值的临床血清预临床阶段用临床试剂和对比试剂分别测试临床血清，通过调节标准曲线和补偿函数等方式使其符合率大于90%临床阶段每家医院测试产品份数大于400人份，其中阳性率大于80%，并且低值，中值，高值分布范围合理临床报告取有效的临床数值编写临床试验报告【项目实施方案】 项目设计、研发、报审各阶段进度计划及验证序号计划时间安排阶段性实施计划13-5周实验的筹划和准备阶段28-12周实验的完善和试剂盒的优化改进38-12周寻找市场上现有的已注册的产品，做对比分析，完善实验项目指标，为临床试验的验证做准备，并联系临床试验单位做临床试验。44-6