HPLC验证方案

1、设备/系统名称： 高效液相色谱仪 设备/系统型号： Waters515泵、2487检测器 方案编号： VM-QC-001-01 仪器编号： R211-JY-04 方案制备姓名：日期：方案审核 姓名：日期：姓名：日期：方案审核/批准 姓名：日期：姓名：日期： 目 录1.目的42.范围43.组织与分工44.偏差解决55.变更控制56.确认内容56.1安装确认56.2运行确认76.3 性能确认87.验 证 结 果 汇 总 及 评 价128.验 证 周 期139. 设备确认总结报告1410.附件1410.1偏差记录1510.2.偏差和解决报告1610.3.附录文件清单1711. 方案完成后审核/批准1

2、81. 目的为确认waters515HPLC+waters UV2487高效液相色谱系统测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行。2. 范围2.1 设备验证内容包括：安装确认、运行确认、性能确认。2.2 该方案适用于本公司实验室高效液相色谱系统的验证。3. 组织与分工3.1成员组成：部门姓名职务3.2 分工（1）由QC负责制订本验证方案。（2）由QA负责确认本验证方案。（3）由QC负责进行本验证方案的具体执行。（4）由QC负责编写验证报告。3.3.职责划分：（1）验证小组负责本验证方案的设计、批准及实施。（2）QC负责按本验

3、证方案对受试仪器进行验证，并及时报告验证结果，提供验证原始数据。（3）验证小组组长全面协调各项验证工作，负责报告验证结果、审核验证的评价与建议以及相应的结论，并在验证过程中提供相关的技术支持。4. 偏差解决偏差指的是任何的测试失败，偏离规格，缺失文件，或重大偏离已建立的程序而导致潜在的GMP符合性影响。对于一个偏差事件，偏差必须被审核并评估确定导致偏差的根源。另外，根据设备的状态对偏差的影响进行分析。如必要，必须进行偏差原因的调查，将调查结果包括在“偏差和解决报告”中，偏差的解决（如需要采取的纠正措施，或不采取任何纠正措施但接受该偏差）和说明也包括在“偏差和解决报告”中，如需要纠正措施将会影响

4、部分确认，这些部分的确认测试将延迟至改正措施完成。偏差还需要完整的记录在“偏差记录”中并在最终总结报告中讨论。所有的偏差报告和相关的文件必须包括在最终的确认文件中。5. 变更控制所有的变更和修正将根据相应的变更程序进行。如果需要进行变更，应对其作单独评估以决定是否有必要进行再确认。6. 验证内容6.1 安装确认6.1.1仪器基本情况：设备名称液相色谱仪设备编号R211-JY-04型 号Waters515+UV2487生产厂家美国waters公司操作软件浙江智达N2000安装位置精密仪器室检查人： 日期：复核人： 日期：6.1.2 安装确认所需文件资料工程部在设备开箱验收后建立设备档案，整理使用

5、手册等技术资料，归档保存。资料档案：资 料 档 案数量存放处Waters515泵使用说明书1工程部UV2487使用说明书1工程部AT-330柱温箱使用说明书1工程部浙江智达N2000工作站1质量部合格证1工程部检查人： 日期： 复核人： 日期： 设备的外观检查项目结果设备是否无损坏。设备部件是否无缺失。设备是否易于拆卸、清洗。设备安装、固定是否牢靠。设备工作环境是否符合说明书要求。设备安装位置是否恰当，是否留有足够的空间。电气接线连接是否正确，是否有可靠的接地保护。电缆是否无损坏。管路连接是否正确，管路和各连接处是否无泄露。检查人： 日期： 复核人： 日期： 6.1.4高效液相色谱仪主要部件名

6、 称型 号编号液相色谱泵Waters515E04515 795M紫外检测器Waters uv2487E04487 719M柱温箱AT-330-检查人： 日期：复核人： 日期：6.1.5备注/备件核实备品/备件名称型号数量生产厂家色谱柱4.6mm*200mm*0.5m1支大连依利特氘灯LH-36X21个sonntek针孔滤头0.45m*13mm*100个/包8包德国MEMBRANA公司小系滤膜0.45m *50nm*50张/盒6盒德国MEMBRANA公司检查人： 日期： 复核人： 日期：. 设备安装环境检查 确认设备的安装环境和地点符合仪器说明书要求。检查结果在下表记录。确认项目可接受标准确认结

7、果项目结论设备安装检查1、电源：l 电压：22010%l 频率，50/60HZ可靠接地电压：频率：接地：符合不符合2、环境检查l 温度：4 40，l 湿度：20%95%l 温度：l 湿度：符合不符合结论：检查人： 日期： 复核人： 日期：6.2运行确认6.2.1按waters高效液相色谱仪操作规程进行操作，进行控制旋钮的测试。1.通电测试：接通仪器电源，将电源开关按向上，则指示灯亮。2.断电测试：关闭仪器电源，则指示灯灭。3. 泵测试：增加流速时，显示屏显示压力上升，直至稳定，并有废液流出；降低流速速时，显示屏显示压力上升，直至稳定。6.2.2测试结果，在下表记录。项目可接受标准结果结论wat

8、ers高效液相色谱仪操作规程应通过审核、批准符合 不符合通电测试接通仪器电源，将电源开关按向上，则指示灯亮。符合 不符合断电测试关闭仪器电源，则指示灯灭。符合 不符合泵测试增加流速时，显示屏显示压力上升，直至稳定，并有废液流出；降低流速速时，显示屏显示压力上升，直至稳定。符合 不符合结论：检查人： 日期： 复核人： 日期： 6.3性能确认6.3.1验证项目和技术要求检定项目可接受标准泵流量设定值误差泵流量设定值误差Ss2%；泵流量设定值误差流量稳定性误差SR2%定性测量重复性（5次定量进样）RSD1.5%.定量测量重复性（5次定量进样）RSD1.5%UV检测器波长准确性示值误差3nm基线漂移.

9、5 X 10-3（AU/h）基线噪声5 X 10-3（AU）最小检测浓度（静态）4 X 10-7g/ml（萘的甲醇溶液）6.3.2确认使用的检定设备校正情况，结果在下表记录。序号名 称仪器编号规格校准日期有效期至1秒表2电子分析天平3容量瓶4温湿度表结论：检查人： 日期：复核人： 日期： 6.3.3试剂 D-盐酸氨基葡萄糖、重铬酸钾、甲醇、硫酸等。6.4证方法及结果6.4.1泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的检定。 将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集1

10、0-25分钟，称量。按下式计算Ss和SR。表1 流量设定值ml/min0.51.01.5测量次数333收集流动相时间min251510允许误差Ss3%2%2%SR3%2%2%计算公式： Ss=(Fm-Fs)/Fs * 100% SR=(Fmax-Fmin)/F*100%式中Ss为流量设定值误差（%）Fm=(W2-W1)/.t 为流量实测值（ml/min）；W2 容量瓶+流动相的重量（g）；W! 容量瓶的重量(g)；Fs 流量设定值（ml/min）； 实验温度下流动相的密度（g/cm2 ）；t 收集流动相的时间（min）；SR 流量稳定性误差（%）；Fmax 同一组测量中流量最大值（ml/min

11、）；Fmin 同一组测量中流量最小值（ml/min）；F 同一组测量的算术平均值（ml/min）；泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的检定 流量设定值（ml/min） 0.5 1.0 1.5 流量实测值 （ml/min）平均值 流量设定值误差 SS（%）平均值流量稳定性误差（%）结论：检定人： 日期：复核人： 日期： 定性、定量测量重复性的验证将仪器联接好，使之处于正常工作状态，用进样阀的定量管注入稳定的待分析样品溶液（D-盐酸氨基葡萄糖），记录保留时间和峰面积，连续测量5次，计算相对标准偏差RSD。色谱条件与系统适用性试验: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以流动相A：流动相B（90/

12、10）为流动相（流动相A为磷酸：辛烷磺酸钠：水=0.08ml：0.12g：99.8ml；流动相B为乙腈），检测波长为195nm。测定法:取D-盐酸氨基葡萄糖对照品适量,精密称定,加蒸馏水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含5mg的溶液;摇匀, 取20l注入液相色谱仪,记录色谱图。定性、定量测量重复性的检定进样次数保留时 间峰面积平均峰面积标准偏 差RSD%标准规定结论1RSD1.5%2345结论：检定人： 日期： 复核人： 日期： 6.4.3紫外检测器性能 6.4.3.1 UV检测器波长准确性方法：已知苯在233.9nm、238.9nm、243.3nm、248.5nm、254.5nm、260.6

13、nm有特征吸收，故配置100mg/ml苯的乙醇溶液运行“Sample scan”程序。波长误差均应小于3nm。波长准确性规定实测误差规定实测误差233.9nm248.5nm238.9nm254.5nm243.3nm260.6nm结论：检定人： 日期：复核人： 日期：6.4.3.2基线漂移和基线噪声的测定将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，纸速为5mm/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线3040分钟，计算基线漂移和噪声。基线漂移应510-3(AU/h),基线噪声应510-4(AU)。基线漂移和基线噪声的测定

14、 指标项目标准结果结论基线噪声（RIU）510-4基线漂移（RIU/h）510-3（RIU/h）结论：检定人： 日期：复核人： 日期：6.4.3.3最小检测浓度检定在静态条件下，用注射器注入410-7g/ml萘的甲醇溶液，样品峰高应大于或等于两倍基线燥声峰高，按下式计算最小检测浓度。Ct=2HNC/H式中：Ct:最小检测浓度（g/ml）HN:噪声峰高（记录仪格数或实测高度cm）C:样品浓度（g/ml）H:样品峰高（记录仪格数或实测高度cm）结论：检定人： 日期：复核人： 日期：7.验证结果汇总及评价验 证 条 件验证项目认 可 标 准结 果电压： 环境温度： ，相对湿度 ；输液系统泵流量设定值

15、误差 Ss2%;流量稳定性误差 SR2%定性测重复性误差（5次定量管进样）RSD1.5%定量测重复性误差（5次定量管进样）RSD1.5%UV检测器性能基线漂移510-3（RIU/h）;基线噪声510-4（RIU）检测器波长准确性3nm最小检测浓度410-8g/ml结论检定人： 日期： 复核人： 日期：8.验证周期液相色谱仪的验证周期为两年，当更换部件或对仪器性能有怀疑时,应随时验证,并记录验证结果。9. 设备验证总结报告10. 附件11. 方案完成后审核/批准设备验证总结报告设备名称设备编号执行总结：确认项目测试描述通过/失败有无偏差？安装确认文件核实通过 失败有 无主要部件核实通过 失败有 无设备的外观检查通过 失败有 无备件/改换部件核实通过 失败有 无运行及性能确认SOP的核实通过 失败有 无关键仪表校验的核实通过 失败有 无仪器运行及性能测试的核实。通过 失败有 无偏差总结：后续措施和负责人：结论: PASS 通过 FAIL 未通过报告人日期审核人日期1.偏差记录记录偏差报告号码并给出简短描述。当偏差解决后，在偏差结束栏签名并注日期。偏差编号偏差描述偏差完成人/日期2.偏差和解