盐酸坦洛新及其缓释微丸犬药代动力学研究

1、盐酸坦洛新及其缓释微丸犬药代动力学研究宫爱申 佘高宏 王丹 刘悦 邓炳初(上海恒瑞医药有限公司 上海 200245)摘要： 目的 考察盐酸坦洛新原料药及其缓释微丸在Beagle犬体内的药动学行为，评价该缓释制剂的缓释特征。 方法 Beagle犬分别口服给予盐酸坦洛新原料药及缓释微丸制剂后，采用LC/MS/MS法测定犬血浆中各时刻坦洛新的药物浓度，绘制血药浓度-时间曲线，并计算药动学参数，对主要药动学参数进行统计学分析。 结果 Beagle犬口服给予盐酸坦洛新原料药及缓释微丸后，血浆中药物达峰时间tmax、消除半衰期t1/2均存在显著性差异(P<0.05)；两组峰浓度Cmax经剂量折算后存

2、在显著性差异(P<0.05)。 结论 与盐酸坦洛新原料药相比，Beagle犬口服缓释微丸后，吸收及消除速度减慢、血药峰浓度降低，符合缓释制剂的药动学行为，判断该制剂具有一定程度的缓释特征。关键词：盐酸坦洛新；缓释微丸；LC/MS/MS；药动学ABSTRACT: OBJECTIVE To study the pharmacokinetic behaviors of tamsulosin hydrochloride bulk drug and its sustained release pellets in Beagle dogs and evaluate the sustained rel

3、ease performance of the pellets. METHODS The plasma concentrations of tamsulosin were determined by LC/MS/MS method after a single oral administration of tamsulosin hydrochloride bulk drug and its sustained release pellets to Beagle dogs. The plasma concentration-time curves were plotted and the pha

4、rmacokinetic parameters were estimated and analyzed. RESULTS Differences in peak time tmax, elimination half-time t1/2 between bulk drug and sustained release pellets have been found statistically significant(P<0.05), and the peak concentration Cmax of bulk drug was higher than sustained release

5、pellets after a dose conversion(P<0.05). CONCLUSIONS Compared with the bulk drug of tamsulosin hydrochloride, the rates of absorption and elimination were longer, and the plasma peak concentration was lower in sustained release pellets, which improved a sustained release performance of this prepa

6、ration.KEY WORDS: tamsulosin hydrochloride; sustained release pellets; LC/MS/MS; pharmacokinetics介绍 盐酸坦洛新，化学名为(R)(-)5-2-2-(2-乙氧苯基)乙醚基胺基-2-甲基-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺盐酸盐，属肾上腺素1受体亚型1A的阻断剂，对尿道、膀胱颈部及前列腺存在的1受体具有高选择性阻断作用，从而降低平滑肌张力，降低下尿路阻力，临床用于治疗前列腺增生所致的异常排尿症状，如尿频、夜尿增多、排尿困难等1。由于坦洛新在体内消除迅速，现有上市商品均为缓释制剂，如盐酸坦洛新缓释胶囊、缓释片等。

7、本试验目的在于以盐酸坦洛新原料药为对照，以Beagle犬为受试动物，评价盐酸坦洛新缓释微丸在体内的缓释特征。图1 坦洛新化学结构式Fig. 1 Chemical structure of tamsulosin1 材料与仪器1.1 药品与试剂盐酸坦洛新原料药(批号39060901，纯度99.2%)，盐酸坦洛新缓释微丸(批号08042491，每188 mg含盐酸坦洛新0.2 mg)，均由江苏恒瑞医药股份有限公司提供。内标物SHR117616(批号20070920，纯度95.3%，由本公司化学合成组合成)。HPLC甲醇购自Thermofisher公司，水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂为分析纯，购自国药集团

8、化学试剂有限公司。1.2 试验动物健康成年Beagle犬8只，雌雄各半，体重6-8kg，由苏州中科实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SYXK(苏)2002-0032。1.3 仪器与设备TSQ Quantum Ultra AM三重四极杆串联质谱仪，美国Thermo Finnigan公司；Agilent 1200高效液相色谱系统，德国Agilent公司。Xcalibar 5.0数据处理软件及DAS2.0药代动力学软件。2 试验部分2.1 试验方案健康成年Beagle犬8只，平均分成2组，禁食过夜后分别口服给予盐酸坦洛新原料药及其缓释微丸灌制的胶囊，给药剂量分别为1 mg·kg-1和

9、2 mg·kg-1。原料药组于给药前及给药后1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 5 h, 6 h, 8 h, 10 h, 12 h, 24 h, 36 h由前肢静脉采血1.5 ml，置于肝素化试管中，3500 rpm离心10 min分离血浆，于-20°C保存。缓释微丸组于给药前及给药后15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h, 24 h由前肢静脉采血1.5 ml，处理方法同原料药组。2.2 LC/MS/MS法测定犬血浆中的坦洛新 参照有关文献2-4，建立了快速、灵敏的LC/MS/MS法用于测定犬

10、血浆中的坦洛新浓度，样品经碱化、液-液提取后进行分析。 分析条件色谱条件：色谱柱为Hypersil C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 mm)，保护柱为EasyGuard C18柱(10 mm×4.6 mm, 5 mm)，流动相为甲醇-2%甲酸水溶液(70: 30, v/v)，流速0.6 mL·min-1，柱温25°C。质谱条件：ESI源，正离子扫描，检测方式为选择反应监测(SRM)，鞘气压力60 psi，辅助气15 psi，毛细管温度300 °C。监测反应为坦洛新m/z 409.2228.0 (CE 26 eV)，内标SHR11761

11、6 m/z 540.2367.0 (CE 25 eV)。 血浆样品预处理取犬血浆200 mL，混合后加入内标溶液50 mL (1000 ng·.mL-1 SHR117616甲醇溶液)，加入甲醇：水(80: 20, v/v) 50 mL，饱和Na2CO3 溶液100 mL；混匀后加入无水乙醚4 mL，涡流混合2 min，振荡10 min，离心10 min (4000 rpm)；取上清液于40°C空气流下吹干，残留物溶于100 mL流动相，取10 mL进行LC-MS-MS分析。 方法学确证按照生物样品分析方法确证指导原则的有关要求5，对建立的分析方法进行了方法学确证。方法的选择

12、性结果见图2。结果表明，血浆中的内源性物质不干扰待测物坦洛新及内标物SHR117616的测定。IIIAIBIIC图2 LC/MS/MS法测定犬血浆中坦洛新的典型色谱图(A 空白血浆样品；B 空白血浆加入0.2 ng·mL-1坦洛新及250 ng·mL-1内标；C 一只犬口服给予1 mg·kg-1原料药后1 h的血浆样品)峰I 坦洛新；峰II 内标(SHR117616)Fig. 2 Representative LC/MS/MS chromatograms of tamsulosin in plasma of Beagle dogs. (A blank plasma

13、; B blank plasma spiked with 0.2 ng·mL-1 tamsulosin and 250 ng·mL-1 internal standard; C plasma sample of a Beagle dog 1 h after an oral administration of 1 mg·kg-1 tamsulosin)Peak I tamsulosin；peak II internal standard (SHR117616)取犬空白血浆200 mL，加入坦洛新标准系列溶液50 mL，使血药浓度分别为0.200, 0.500, 1.

14、00, 5.00, 10.0, 25.0, 50.0 ng·mL-1，加入内标溶液50 mL，自加入饱和Na2CO3 溶液100 mL起，按“血浆样品预处理”项下进行操作。以血药浓度为横坐标，样品与内标色谱峰面积比为纵坐标，以加权最小二乘法(w=1/x2)进行线性回归，获得典型标准曲线。结果表明，该方法在0.200-50.0 ng·mL-1浓度范围内线性良好，最低定量限0.200 ng·mL-1。典型的标准曲线方程为y = 0.06635 x + 0.00276，R2 = 0.9948。以0.500, 5.00, 45.0 ng·mL-1为质控样品，对方

15、法的精密度与准确度、提取回收率、稳定性等分别进行了考察，结果均符合相关规范的要求5，且坦洛新标准溶液、血浆样品于室温下放置12 h、4°C下放置7天均保持稳定。3 试验结果3.1 血浆药物浓度测定 采用建立的LC/MS/MS方法对Beagle犬口服给予盐酸坦洛新及其缓释微丸后各时刻的血浆药物浓度进行测定，绘制的血浆药物浓度-时间曲线见图3。图3 Beagle犬分别口服给予盐酸坦洛新及其缓释微丸后的平均血药浓度-时间曲线(n=4)原料药；缓释微丸Fig.3 Mean plasma concentration-time curves of tamsulosin in Beagle dog

16、s after an oral administration of tamsulosin hydrochloride and its sustained release pellets (n=4)bulk drug；sustained release pellets3.2 药动学参数 对血药浓度-时间数据采用DAS2.0药动学软件进行房室模型拟合并计算主要药动学参数，其中tmax、Cmax采用实测值。结果表明，盐酸坦洛新及其缓释微丸在Beagle犬体内的药动学行为符合二室开放模型(权重系数w =1)，主要药动学参数见表1。表1 Beagle犬口服给予盐酸坦洛新及其缓释微丸后的主要药动学参数Ta

17、b.1 Main pharmacokinetic parameters of tamsulosin in Beagle dogs after an oral administration of tamsulosin hydrochloride and its sustained release pellets3.3 统计学分析对原料药及缓释微丸给药组主要药动学参数进行统计学分析，结果表明：Beagle犬口服给予盐酸坦洛新原料及缓释微丸后，血浆中药物达峰时间tmax、消除半衰期t1/2均存在显著性差异(P<0.05)；两组峰浓度Cmax经剂量折算后存在显著性差异(P<0.05)。4

18、讨论Beagle犬口服盐酸坦洛新原料后，吸收迅速，消除半衰期短；与盐酸坦洛新原料药相比，Beagle犬口服缓释微丸后，吸收及消除速度减慢、血药峰浓度降低，符合缓释制剂的药动学行为，判断该制剂具有一定程度的缓释特征。盐酸坦洛新因体内消除速度过快，临床均采用缓释制剂以延缓其消除，延长药物作用时间，以达到减少给药次数的目的。本试验考察了受试制剂盐酸坦洛新缓释微丸的在犬体内的缓释特征，为该缓释制剂的研发及评价提供了重要的体内数据参考。REFERENCES1 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. New Drug Application 020579 R. 1997.2 Ding L, Li L M, Tao P, et a