肿瘤标志物ppt课件

1、P53蛋白是一种由蛋白是一种由393个氨基酸组成的含磷蛋白，位于细胞核。个氨基酸组成的含磷蛋白，位于细胞核。研究发现在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见研究发现在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见P53蛋白蛋白表达，表达，在轻在轻中中重度不典型增生、原位癌、浸润癌中，重度不典型增生、原位癌、浸润癌中，P53蛋白表达的阳性率逐渐升高，表明蛋白表达的阳性率逐渐升高，表明P53基因与肺癌发基因与肺癌发生有关生有关对对P53基因的不同类型肿瘤中突变频率检测结果，鳞癌为基因的不同类型肿瘤中突变频率检测结果，鳞癌为63.6%，腺癌为，腺癌为65%，发现，发现P53蛋白在不同分化程度肺癌组织蛋白在不同分化程

2、度肺癌组织之间无显著性差异，但之间无显著性差异，但在肺鳞癌组织中随分化程度降低在肺鳞癌组织中随分化程度降低P53表达却增强，认为表达却增强，认为P53蛋白与肺鳞癌的关系可能较肺腺癌更蛋白与肺鳞癌的关系可能较肺腺癌更为密切为密切。而且在肺鳞癌伴有和不伴有淋巴结转移病例中，。而且在肺鳞癌伴有和不伴有淋巴结转移病例中，P53表达无显著性差异，而肺腺癌中伴有与不伴有淋巴结转表达无显著性差异，而肺腺癌中伴有与不伴有淋巴结转移者移者P53表达具有显著性差异，提示表达具有显著性差异，提示P53过度表达与肺腺癌淋过度表达与肺腺癌淋巴结转移有关巴结转移有关P53蛋白蛋白鳞癌鳞癌P53细胞核阳性细胞核阳性1bcl

3、-2蛋白是原癌基因蛋白是原癌基因bcl-2编码的一种能调节细胞死亡而不影编码的一种能调节细胞死亡而不影响细胞增殖的蛋白质，响细胞增殖的蛋白质，1993年年Pezzella等研究等研究bcl-2在在NSCLC患者中的表达与预后之间的关系。该实验采用患者中的表达与预后之间的关系。该实验采用bcl-2特异性单特异性单克隆抗体及免疫组化染色测定克隆抗体及免疫组化染色测定80例肺鳞癌及例肺鳞癌及42例肺腺癌患者例肺腺癌患者肿瘤组织中肿瘤组织中bcl-2蛋白。结果蛋白。结果25%(20/80)的鳞癌患者及的鳞癌患者及12%(5/42)的腺癌患者的腺癌患者bcl-2蛋白阳性蛋白阳性，在邻近的正常呼吸道上，在

4、邻近的正常呼吸道上皮中，皮中，bcl-2蛋白仅存在于基底细胞。蛋白仅存在于基底细胞。bcl-2蛋白阳性患者的蛋白阳性患者的5年生存率高于阴性患者年生存率高于阴性患者(P0.1)，年龄为，年龄为60岁或岁或60岁以上岁以上bcl-2蛋白阳性患者的预后最好蛋白阳性患者的预后最好(P0.02)。该研究表明，原癌基因。该研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中发生异常表达，其表达与预后有一定关系在肺癌患者中发生异常表达，其表达与预后有一定关系原癌基因原癌基因bcl-2蛋白蛋白2肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP CA19-9 CA72-4 CA125 CA15-3 SC

5、C HCG 肿瘤肿瘤结肠结肠 胰腺胰腺 胃胃 食道食道 肝脏肝脏 胆囊胆囊 乳腺乳腺 卵巢卵巢 子宫颈子宫颈 绒毛膜绒毛膜 3肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP NSE SCC CYFRA21-1 HCG PSA TPA Calcitonin HTG 肿瘤肿瘤肺（肺（SCLC） 肺（肺（NSCLS） 胚胎细胞胚胎细胞 前列腺前列腺 膀胱膀胱 甲状腺甲状腺 C-细胞细胞 耳鼻咽喉耳鼻咽喉 4临床检测肿瘤标志物试验方法进展临床检测肿瘤标志物试验方法进展单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法血凝法血凝法对流电泳法对流电泳法火箭电泳法火箭电泳法放射免疫

6、法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA） ELISA法法斑点法斑点法金标法金标法荧光免疫法荧光免疫法化学发光法化学发光法（CLIA）电化学发光法电化学发光法（ECLIA）分子生物学分子生物学5双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法抗体与凝胶混合抗体与凝胶混合后，装于小玻璃管中，后，装于小玻璃管中，待凝固后待凝固后加入抗原加入抗原溶液，使其扩散入凝溶液，使其扩散入凝胶与抗体反应形成环状乳白色沉淀带胶与抗体反应形成环状乳白色沉淀带 一种抗原或抗体混合物成分的定性与定量一种抗原或抗体混合物成分的定性与定量的分析方法的分析方法。通常采用。通常采用凝胶作为支持介质凝胶作为

7、支持介质，让抗原与抗体混合物在介质中互相扩散，让抗原与抗体混合物在介质中互相扩散，相 互 反 应 形 成 沉 淀 弧 线 或 沉 淀 弧 带相 互 反 应 形 成 沉 淀 弧 线 或 沉 淀 弧 带 6血凝法血凝法细菌和红细胞等颗粒性抗原，当细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应为凝集反应。反应中的抗原称为。反应中的抗原称为凝集原（凝集原（agglutinogen），抗体），抗体称为凝集素（称为凝集素（agglutinin）根据

8、凝集反应的原理，以后又发根据凝集反应的原理，以后又发展建立了，各种间接凝集试验、展建立了，各种间接凝集试验、间接凝集抑制试验以及固相免疫间接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法吸附血凝试验等新方法7 胶乳微粒免疫检测技术胶乳微粒免疫检测技术是在胶乳凝集定性试验基础上发是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的展建立的-种非放射性均相免疫种非放射性均相免疫测定法，可以测定法，可以对各种微量的抗原对各种微量的抗原物质和小分子半抗原物质和小分子半抗原(加药物、加药物、团体激素等团体激素等)进行精确的定量测进行精确的定量测定定。根据特异性抗体致敏的胶乳。根据特异性抗体致敏的胶乳微粒微粒(一般为一般为

9、直径约直径约1m的聚苯的聚苯乙烯胶乳乙烯胶乳)，与待测标本中的相，与待测标本中的相应抗原相遇时发生凝集反应，胶应抗原相遇时发生凝集反应，胶乳凝集程度与被测物的浓度呈函乳凝集程度与被测物的浓度呈函数关系，由此可测出标本中待测数关系，由此可测出标本中待测物的含量。测定方法主要有粒子物的含量。测定方法主要有粒子计数法和浊度法两种计数法和浊度法两种 8 对流免疫电泳对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。在的缓冲液中，蛋白质在的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极抗原带负电荷向

10、正极泳动泳动；而；而抗体抗体大部分属于大部分属于Ig，由于分子量大，由于分子量大，暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动受电渗作用的影响向负极泳动 (电电渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动。对移动。琼脂琼脂是一种酸性物质，在碱性溶液是一种酸性物质，在碱性溶液中中带负电荷带负电荷，而，而与它接触的溶液带正电荷，与它接触的溶液带正电荷，因此液体向负极泳动因此液体向负极泳动，产生电渗产生电渗) 在在抗原抗抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线体相遇的最适比例处形成乳白色沉

11、淀线。由。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短反应时间。此法操作简便，仅敏度，并缩短反应时间。此法操作简便，仅需需3060分钟，灵敏度比双向扩散高分钟，灵敏度比双向扩散高1015倍；但缺点是特异性倍；但缺点是特异性不如双向琼脂扩散高不如双向琼脂扩散高 9 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(rocketimmunoelectrophoresis，RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂

12、凝胶中的抗体不发生移动，而于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当正极泳动。当抗原与抗体分子达到适抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关捡样中的抗原浓度呈正相关。因此，。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可

13、准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量抗体的含量(即反向火箭免疫电泳即反向火箭免疫电泳) 10竞争法竞争法双抗体夹心法双抗体夹心法间接法间接法 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1971年瑞典学者年瑞典学者Engvail和和Perlmannn,荷兰学荷兰学者者Van Weerman和和Schuurs分别报道将免疫技分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附试验法，称为酶联免疫吸附试验)。最

14、初发展的免疫。最初发展的免疫酶测定方法。是使酶与抗体或抗原结合，用以检酶测定方法。是使酶与抗体或抗原结合，用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。后来发展为查组织中相应的抗原或抗体的存在。后来发展为将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果结果。这种技术就是目前应用最广的酶联免疫吸。这种技术就是目前应用最广的酶联免疫吸附试验，俗称附试验，俗称ELISA (enzyme linked immunosorbant assay) 11 免疫印迹技术免疫印迹技术免疫印迹免疫印

15、迹(immunoblotting)又称又称蛋白质印迹蛋白质印迹(Western blotting)，是一种是一种借助特异性抗体鉴定抗原的借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法有效方法。该法是在凝胶电泳和固。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。将含有目一种新的免疫生化技术。将含有目标蛋白标蛋白(抗原抗原)的样品首先用的样品首先用SDS-聚聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或或非变性电泳非变性电泳(Native-PAGE)等分离等分离后，通过转移电泳原位转印至硝酸后，通过转移电泳原位转印至硝酸纤维素膜或其它膜的表面，然

16、后将纤维素膜或其它膜的表面，然后将膜表面的蛋白质再用抗原抗体反应膜表面的蛋白质再用抗原抗体反应进行特异性检测进行特异性检测12 免疫微粒技术免疫微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作为载体，包被上具有特异性亲和力的微粒作为载体，包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质各种免疫活性物质(抗原或抗体抗原或抗体)，使其致敏，使其致敏为免疫微粒，用于免疫学及其他生物学检测为免疫微粒，用于免疫学及其他生物学检测与分离的一项技术。作为载体的微粒通常是与分离的一项技术。作为载体的微粒通常是以某种高分子有机单体为原料，经过乳液聚以某种高分子有机单体为原料，经

17、过乳液聚合、悬浮聚合及辐照聚合等高分子聚合方法合、悬浮聚合及辐照聚合等高分子聚合方法制备而成。由于制备材料及工艺不同，微粒制备而成。由于制备材料及工艺不同，微粒的种类繁多，现已制成的种类繁多，现已制成惰性微粒惰性微粒如聚苯乙烯如聚苯乙烯胶乳微粒、胶乳微粒、活性微粒活性微粒如羧化聚苯乙烯微粒、如羧化聚苯乙烯微粒、磁性微粒磁性微粒及及标记微粒标记微粒(用同位素、荧光素或用同位素、荧光素或酶标记酶标记)等四大类微粒，数量多达几十种。等四大类微粒，数量多达几十种。将制备好的微粒与抗原将制备好的微粒与抗原(或抗体或抗体)经物理吸附、经物理吸附、化学偶联及生物素亲合亲桥联法等致敏方法化学偶联及生物素亲合亲

18、桥联法等致敏方法形成免疫微粒。广泛形成免疫微粒。广泛应用于各种可溶性大分应用于各种可溶性大分子物质的检测、分离与纯化、细胞标记与识子物质的检测、分离与纯化、细胞标记与识别别等。近年来，等。近年来，微粒技术在核酸分子杂交、微粒技术在核酸分子杂交、DNA与与RNA的分离及的分离及PCR等研究领域等研究领域亦显示出广阔的应用前景亦显示出广阔的应用前景 13 免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术是是采用荧光素标记的已知抗采用荧光素标记的已知抗体体(或抗原或抗原)作为探针，检测待作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗测组织、细胞标本中的靶抗原原(或抗体或抗体)，形成的抗原抗体，形成的抗原抗体复合物

19、带有荧光素，在荧光复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原以分辨出抗原(或抗体或抗体)的所在的所在位置及其性质，并可利用荧位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定以达到对抗原物质定位、定性 和 定 量 测 定 的 目 的性 和 定 量 测 定 的 目 的14 免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，抗体反应和组织化学的呈色反应，对相对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术项新技术。把免疫反应的特异性、组织。把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜包括荧光显微镜、电子显微镜)的的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水