不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程

1、不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（、套）起反应，以发现在37中有反应活性的抗体。这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。4.标本要求受检者不抗凝静脉血4

2、.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb等。每次用3套试剂（、）进行抗体筛选，见表1005-1。5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：Cw、Kpa、Kpb、Jsa、Jsb、Lua、Lub、Xr/mina等。每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。5.4.致敏红细胞（质控细胞）。5.5.0.9%生理盐水。5.6.Coombs

3、微柱凝胶卡。6.器材试管、吸管、37水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1取受检者血清2滴于标记有、的3支小试管中。7.1.2对应加入、套2%5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37孵育30分钟。7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。表1005-1红细胞血型筛选细胞反应格局表序号血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLuaLubR1R1+00+00+0+0+0+R

4、2R2+0+00+00+0+00+R1r1+0+0+0+00+0+00+0+试验结果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法）R1R1R2R2R1r1注：为阳性；0为阴性7.1.4再取受检者血清2滴于标记有111的11支小试管中。7.1.5.在11支小试管中分别加入11套2%5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴，37孵育30分钟。7.1.6.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中表1005-2红细胞血型谱细胞反应格局表序号血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLu

5、aLub1R1wR1+00+0+0+0+0+2R1R1+00+0+00+0+0+0+3R2R2+0+00+0+00+0+00+4rr0+0+00+00+5rr00+0+0+00+0+0+6r r000+0+00+0+0+0+0+7r r000+0+0+0+0+0+0+0+8Ror+00+0+00+00+0+0+9r r000+0+00+0+00+10r r000+0+0+0+00+0+11r r000+0+0+0+00+结果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法）1R1wR12R1R13R2R24rr5rr6r r7r r8Ror9r r10r r11r r注：为阳性；0为阴性；W为弱阳性7.2抗球

6、蛋白法7.2.1.如果盐水法（1）（3）抗体筛选试验阴性，继续做以下试验。7.2.2.再振摇试管，使管底红细胞重新悬浮，用生理盐水洗涤3次。7.2.3.最后一次洗涤后，弃去全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。7.2.4.立即加入多特异性抗球蛋白血清1滴，混匀。7.2.5以3000r/min离心10秒，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集和溶血情况，并用显微镜确证，记录结果于表1005-1中。7.2.6.如果抗体筛选试验阳性，再取受检者血清2滴于标记有111的11支小试管中。7.2.7.在11支小试管中分别加入11套鉴定谱细胞悬液1滴和多特异性抗球蛋白血清1滴，37孵育30分钟。7.2.8.以3000r/

7、min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中。7.3.微柱凝胶法(强生卡)7.3.1.在Coombs微柱凝胶卡上标记、，分别加入、套筛选红细胞40µl和被检血清40µl。7.3.2.将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内，孵育15分钟。.取出微柱凝胶卡观察结果，并记录于表1005-1中。7.3.4.如果抗体筛选试验阳性，将11套鉴定谱细胞对应加入标记有111的微柱凝胶卡中各40µl。7.3.5.然后，再各加入被检血清40µl。7.3.6.重复操作7.3.2.和，观察结果，并记录于表1005-2中。8.结果判断8.1.必须

8、记录观察到的每个细胞样本的凝集强度或溶血现象。8.2.盐水法和抗球蛋白法以±为阳性凝集结果；微柱凝胶法中抗原抗体复合物浮在微柱凝胶卡表面或胶中，为阳性反应；沉于尖底部为阴性反应，见图1005-1。图1005-1微柱凝胶法结果判断8.3.抗球蛋白法阴性无凝集，应加入致敏红细胞（质控细胞）1滴，混匀后以1000r/min离心15秒，观察结果，若凝集表示试验结果为阴性；若不凝集，表示抗球蛋白血清可能失效，试验无意义。8.4.盐水法和抗球蛋白法判断溶血和凝集的终点必须准确和前后一致，如果溶血和凝集都存在，离心后要立即观察上清液的情况，然后轻轻地把细胞摇散以观察凝集。8.5.红细胞血型筛选细胞和谱细胞反应格局见表1005-1和1005-2。9.注意事项9.1.每种试验必须做自身对照，即待检者自身血清和自身红细胞反应，无凝集则试验有效；若有凝集则提示存在自身免疫抗体。9.2.抗体筛选阳性后，要用生理盐水洗涤红细胞3次，离心后再观察结果，避免假阳性反应。9.3.根据反应凝集强度±记为阳性结果，表示待检者血清中有不规则抗体，结合谱细胞反应格局，确定抗体特性；无凝集表示