生化实验二--果蔬中总糖及还原糖含量的测定

1、综合实验一：果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析实验一实验一 果蔬中维生素果蔬中维生素C的定量测定（的定量测定（4学时）学时）实验二实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定（果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）学时）实验三实验三 果蔬中蛋白质含量的测定（果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）学时）实验四实验四 果蔬中过氧化物酶分析（果蔬中过氧化物酶分析（12学时）学时）实验材料：实验材料：冬枣柚子冬枣柚子14组组梨（梨（2个品种）个品种）58组组盘菜萝卜盘菜萝卜 912组组 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 学习分光光度计的原理和操作方法。学习分光光度计的原理和操作方法

2、。 总糖是指样品中的还原单糖及在本实总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。 多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。出总糖和还原糖的含量。 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠其原

3、理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在在620nm处有最大吸收。处有最大吸收。 1、植物材料、植物材料2、吸管（、吸管（1.0mL2、5.0mL2、 0.1mL2 、0.2mL2 、0.5mL2 ）3、试管（、试管（1.5cm15cm7）4、分光光度计、分光光度计5、水浴锅、电炉、水浴锅、电炉6、电子分析天平、电子分析天平7、容量瓶（、容量瓶（100mL1）、玻璃漏斗）、玻璃漏斗8、量筒、研钵、三角烧瓶、量筒、研钵、三角烧瓶1、蒽酮试剂：、蒽酮试剂：取取2g蒽酮溶于蒽酮溶于1000mL体积分数为体积分数为80%

4、的硫酸中，当日配制使用。的硫酸中，当日配制使用。2、标准葡萄糖溶液、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ /mL）：称取）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几（可加几滴甲苯作防腐剂）。滴甲苯作防腐剂）。3、6mol/ /L HCl溶液溶液4、20% NaOH溶液：溶液：称取称取20g NaOH固体，溶于固体，溶于蒸馏水并稀释至蒸馏水并稀释至100mL。1、葡萄糖标准曲线的绘制：、葡萄糖标准曲线的绘制： 取洁净试管取洁净试管6支，按下表进行操作：支，按下表进行操作：012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/ /mL00.10.20.30.40.5蒸馏水

5、蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10，冷却后室温放置，冷却后室温放置10，在，在620nm处比色处比色A620nm步骤步骤管号管号 以吸光度为纵坐标，各标准液浓度以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ /mL）为横坐标做图得标准曲线。）为横坐标做图得标准曲线。2、样品中还原糖的提取和测定、样品中还原糖的提取和测定 冬枣、柚子、梨：取滤液冬枣、柚子、梨：取滤液1mL100mL 盘菜、萝卜：取滤液盘菜、萝卜：取滤液10mL100mL 吸取吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却

6、，再加入中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中蒽酮试剂，沸水浴中煮沸煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。准曲线查算出样品液的糖含量。3、样品中总糖的提取、水解和测定、样品中总糖的提取、水解和测定 冬枣、柚子、梨：取滤液冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏用蒸馏水定容至水定容至100mL。 盘菜、萝卜：取滤液盘菜、萝卜：取滤液10mL用蒸馏水用蒸馏水定容至定容至100mL。 取总糖水解液取总糖水解液1mL同上法进行还原糖同上法进行还原糖测定。测定。 按照下列公式分别计算果蔬中还原糖按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（和总糖的质量分数（w）。）。W（还原糖还原糖） 100%C1V1mW（总糖总糖） 0.9100%C2V2m 乘乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。水解时所消耗的水量。式中：式中： W（还原糖还原糖）：）：还原糖质量分数（还原糖质量分数（%） W（总糖总糖）：）：总糖质量分数（总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（：还原糖的质量浓度（mg/ /mL） C2：水解后