肝素钠生产工艺

1、一、肝素分类肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，它与蛋白质结合在一起存在于肠 粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血 栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显 效药物。(1) 普通(标准)肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子量为15000,相当稳定。(2) 通常把分子量小于6000的称为低分子肝素。低分子肝素与普通肝 素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代普通肝素的趋势。近年临床常用的有：达肝素钠(法安明)、依诺肝素钠(克赛)、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙)。(3) 目前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素、改构型肝 素

2、、类肝素等，这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用时间长和出 血作用少的优点，很有开发前途。二、肝素钠简介拼音名： Gansuna 英文名： Hepari n Sodium本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物 质，通过激活抗凝血酶 m (AT- m)而发挥抗凝作用。它对凝血过程的三 个阶段均有影响，在体内外均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶原 时间和凝血酶时间。口服不吸收，皮下、肌肉或静脉给药均吸收良好。三、肝素钠检测 （药典版）拼音名： Gansuna 英文名： Hepari n Sodium本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐， 属黏多糖类 物质，具

3、有延长血凝时间的作用。按干燥品计算，每1mg的效价不得少 于150单位。【性状】本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。本品在水中易溶。【比旋度】 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中含40mg的溶液，依 法测定（附录W E）,比旋度应不小于+ 35°【鉴别】（1）取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml中含2.5mg的 溶液，照 电泳法（附录V F第三法）试验，供试品和标准品所显斑点 的迁移距离之比应为0.91.1。（2）本品的水溶液显钠盐的鉴别反 应（附录川）。【检查】 酸碱度 取本品0.10g，加水10ml溶解后，依法测定（附录W H） , pH 值应为 5.0 7.5。

4、溶液的澄清度与颜色 取本品0.50g，加水10ml溶解后，溶液应澄清无 色；如显浑 浊，照分光光度法（附录IV A），在640nm的波长处测定， 吸收度不得大于0.018 ;如 显色，与黄色1号标准比色液（附录 区A 第一法）比较，不得更深。吸收度 取本品，加水制成每1ml中含4mg的溶液，照分光光度法（附 录V A）测定，在260nm的波长处，其吸收度不得大于0.20 ;在280nm 的波长处，其吸收度不得大 于0.15 。黏度 精密称取本品（按实际测得的单位计算相当于40万单位），加水 适量研细，移入干燥并称定重量的10ml量瓶中，研钵用水冲洗并移入 量瓶中，将量瓶置25C水浴内，俟温度平

5、衡后，加25C水至刻度，摇 匀，称定重量，计算供试品溶液的密度。取溶液，必要时用0.45呵的 滤膜过滤，照黏度测定法（附录 当G第一法），用内径约为1 mm勺毛 细管，在25C ±）.1 C测定其动力黏度，不得大于 0.030Pa.s。总氮量 取本品，照氮测定法（附录四D第二法）测定，按干燥品计算， 含总氮量应为1.3 %2.5 %。硫取本品约25mg精密称定，照氧瓶燃烧法（附录 VB C）进行有机破 坏，选用1000ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液 0.1ml与水10ml为吸收 液，俟生成的烟雾完全吸收后 ，置冰浴中15分钟后，加热缓缓煮沸2分 钟，冷却，加乙醇醋酸铵缓冲液 （pH3.

6、7）50 ml ，乙醇30ml, 0.1 % 茜素红溶液0.3ml为指示液，用高氯酸钡滴定液（0.05mol/L） 滴定至淡橙红色。每1ml高氯酸钡滴定液（0.05mol/L） 相当于1.603mg的S, 按干燥品计算，含 硫量不得少于10.0 %。干燥失重 取本品，置五氧化二磷干燥器内，在60C减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0% （附录忸L ）。炽灼残渣 取本品0.50g，依法检查（附录忸N），遗留残渣应为28.0 %41.0 %。钾盐 取本品0.10g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀， 作为供试品溶液（B）;另量取标准氯化钾溶液（精密称取在150C干燥 1小时的分析纯氯

7、化钾191mg，置1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至 刻度，摇匀）5.0ml，置 50ml量瓶中，加（B）溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（A）。照原子吸收分光光度法（附录 IV D杂质检查法）在766.5nm的波长处分别测定，应符合规定。重金属 取本品0.50g，依法检查（附录忸H第二法），含重金属不得 过百万分之三十。热原 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含1000单位的溶液，依法 检查（附录 幻D），剂量按家兔体重每1kg注射2ml,应符合规定。【效价测定】 照肝素生物检定法（附录 刈D）测定，应符合规定；测得的结果应【类别】抗凝血药。【贮藏】密封，在凉暗处保存。【制剂】肝素钠注

8、射液四、肝素钠生产工艺流程1、盐解:将刮好的新鲜肠粘膜，为标示量的91%110 %。每100斤肠粘膜加入清水100斤，按肠粘膜和水的总重量，加入 4轴勺工业盐，搅拌均匀，再加烧碱液调 PH值为8-9，缓慢升温50-55度，加温时每10-20分钟加水搅拌一次,恒温2小时，注意要间隔搅拌。恒温结束后，要快速升温到96-98 度, 恒温10分钟，趁热捞出上层的渣子。用 100目尼龙布过滤。注意:加盐过多会使下一步交换吸附含量超过规定，加盐过少，肝素和蛋白质 分离不完全，碱性过强，会使肝素降解破坏，收率下降。同时还能使 些蛋白质溶解度增大，造成过滤困难。碱性不足造成提取液偏酸，则在 高温的情况下，肝素

9、迅速破坏，升温过急会使蛋白质早凝固，影响肝素 的分解和溶出。2、 吸附：待提取液温度冷至 50-55度，应检测盐浓度为3。5-5%时, 即可加入5%已处理号的树脂。如树脂上含有盐水，需用清水将树脂洗净 控干，方可使用。搅拌吸附 6-8小时，转速60-80转/分钟为宜，搅 拌须使树脂上下翻动，否则吸附效果差，收率低。吸附完毕，弃去上层 吸附液，然后用100目的尼龙布过滤出树脂。加入提取液的树脂量：新 树脂可按提取液的5-6%加入，旧树脂可按提取液的 8-10 %。3、洗涤：过滤后的树脂用40度左右的温水，漂洗干净。再放入与树脂 重量相等的盐溶液中（盐溶液的浓度为5佐右）洗涤10-20分钟，除去

10、低分子肝素和一些蛋白质，然后将树脂过滤。4、 洗脱：第一次洗脱将过滤号的树脂放入浓度为 20-22%的盐溶液中搅 拌洗脱5-6小时，树脂和盐水的比例为1: 0。7。过滤后将树脂控干进 行第二次洗脱，调盐溶液浓度为 16-18%，搅拌3小时以上，树脂和盐 水的比例与第一次相同，过滤后的水即是药液。5、除杂：将稀碱水加入洗脱后的药液里，要快搅慢加，调PH值为10-12 搅拌2分钟，静止沉淀20小时后，抽出上层药液，下沉的是杂质，且 渣子放另外桶内过滤。过滤后的药液和下次药液除杂时合并待用。6、 沉淀：将抽出除杂后的药液加入盐酸调PH值为7-7。5,即可加入酒精进行沉淀。向药液里加入酒精要快搅慢加。

11、（由于酒精的浓度不同，因此沉淀肝素的酒精用量不等）用酒精计测量酒精度为30-35%，加盖密 封，沉淀20小时。弃去废酒精收集糊状肝素。注意在抽出废酒精时， 不可抽动沉淀的肝素。将多次生产的肝素钠浆收集在一起，以备集中脱水干燥。7、脱水：将生产的肝素钠浆，用双层的确良布过滤后放入 95%勺酒精内 浸泡20小时，加盖密封。过滤后按上述方法重复一次，使其充分的将 肝素上的水分交换下来。&干燥：待肝素钠浆沥干后，放在不锈钢盘中烘干，用铲子来回的翻 动，温度保持在50-55度，注意温度低于要求是不易烘干的，温度高 于60度时会使肝素钠的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，应及 时用双层塑料袋密封

12、包装，于通风干燥处存放。E五、肝素钠精制新工艺本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素，在该过程中采用低温离心技术，解决在除酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂蛋白在纯化过程中很难 被除去的缺点。在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解，再结合一次氧化除杂过程，从而提高精品肝素钠的效价和效价回收率。1、工艺流程2、溶解 称取适量肝素钠粗品加质量分数 3%左右NaCI溶液进行溶解。50C水浴加热，用NaOH溶液调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。3、酶解法除蛋白肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形式存在，通过酶解或盐解 去除复合物的蛋白质成分，游离肝素。但在实际生产过程中，复合物的 解离

13、，蛋白质的除去是不完全的，粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗 品肝素钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残存的结合蛋白质，不 仅因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被掩蔽”的肝素活性得到释放而获得较高活性。为此，利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调 酸除蛋白和氧化除蛋白方法，采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质 时较少影响肝素总效价。在肝素钠溶液中加入少量的胰蛋白酶， 使残留在肝素中的少量蛋白质降 解成小分子肽，从肝素-蛋白质复合物中解离出来，再结合调酸碱和氧化 法除蛋白，制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高。酶解反应条件：蛋白酶加入量 0.05%, pH 79,温度40C，反应时间5h。4、调酸除蛋白在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活，加入亚硫酸氢钠作保