免疫组化的标准化和质量控制

1、免疫组化的标准化和质量控制免疫组化是一项综合性的操作技术，是病理诊断的主要辅助手段之一，其影响因素复杂，包括技术人员是否熟练掌握整个实验的操作程序，抗体的特异性，检测方法的敏感性，组织的固定，抗原的修复及修复液的PH值等众多因素。步骤较多，且环环相扣，加强质量管理和可信性尤为重要。现就我科近年来免疫组化染色和具体操作过程中进行精细而有效的全程质控，具体操作规程和质控事项综述如下： 一、标本的固定：标本的及时固定是最重要的环节，也是不可逆的，我科要求手术室设立专人专管制度，普通标本离体后要求手术室及时固定，特殊标本离体后及时送我科当天由取材医师及时剖开固定，淋巴结切开固定，乳腺标本每隔一厘米切开

2、固定，胃肠标本剖开固定，首选10%的中性缓冲福尔马林固定液固定，由于中性缓冲福尔马林液渗透力强，组织收缩小，能够使大多数抗原物质保存较好，提高免疫组织化学检测的阳性率。固定液的量一般为组织块体积的5-10倍，小标本固定时间为4-6小时，大标本固定时间为18-24小时，固定后水洗10-20分，利用蜡块内抗原的长期保存。二、脱水：我科在脱水程序中设置一个后固定步骤，弥补病理标本取材时固定不良造成的组织形态缺陷和抗原定位不良现象。同时建立以处理组织标本块数2000块为标准的组织脱水试剂规范化更换制度，保证脱水质量是保证组织切片质量的前题，这一点对免疫组化染色尤为重要。三、切片、烤片、脱蜡：切片厚度3

3、-4个微米之间，淋巴结更薄些，切片完整，厚薄均匀，无皱褶和刀痕，烤片温度60摄氏度温箱烤片1-2小时，暂不染色的切片放置4摄氏度的冰箱，短时间保存，脱蜡必须干净。四、选择优质的抗体及检测系统是优秀染片质量的保证，我科每月的组化切片为500左右，一直是手工操作，严格的操作规程非常重要，每一步细化到人，我科一直沿用中杉金桥的工作液试剂盒，效果稳定，参加多次省质控及全国质控都获得合格证书。五、抗原修复：我科一直采用高压修复，用大功率加热至沸腾后，将功率调至中档，再放入切片，加盖，加减压阀继续加热至冒气并维持2分钟后，撤火缓慢冷却。高压修复具有压力稳定、受热均匀，背景着色浅的优点。对于核染色阳性的抗原

4、用PH9.0的EDTA修复液效果好，胞质、胞膜染色阳性的，用PH8.0的EDTA抗原修复液效果好。六、DAB显色的稳定性：我科用中杉金桥的DAB显色试剂盒稳定，显色效果好。在显色时，一般阳性部分广泛或阳性定位在胞质的组织显色非常迅速，1-3分钟即可见明显棕色，应及时终止显色。阳性部分稀少且定位在胞核的组织，需显微镜下观察，时间不宜过长，以免造成背景染色。七、复染：为了衬托免疫组化的阳性染色，苏木素颜色不宜太深，1-2分钟，同时操作中使用了粘附载玻片，建议复染的苏木素因勤于过滤，减少人为背景染色。八、在整个染色过程中切片始终保持湿润，不能干片，滴加一抗时应将切片上的水甩干，以免抗体被稀释，滴加抗体时确保覆盖全部组织，以免边缘未覆盖到抗体引起边缘效应，同时孵育盒要放平，以免抗体流至组织一端，造成假阴性或局部弱阳性结果。综上所述，质控工作总是发生在实验检测前才能生效，如标本制作前的固定及制作中的质控流程和切片质量对免疫组化的染色效果都是相互影响、相互依存的。在免疫组化操作过程中，有许多至关重要的步骤都是一环扣一环，每走一步都要进行有效监控，才能做出高质量的切片。因此，要求操作人员有高度的责任心，严格遵循操作规范，为病理诊断提供表达准确