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文档简介

1、核酸的荧光探针吴思辉吴思辉 03081020基本原理 核酸本身在室温下有较弱的内源荧光，但荧光量子产率低，不能直接测量，可用一些荧光小分子物质作为生物探针，与核酸作用后导致荧光强度的增强或减弱来进行测定。常用的探针物质 有机荧光染料 金属配合物 金属离子 纳米粒子有机荧光染料 主要是基于嵌入核酸碱基对中，发生共振能量转移而导致荧光强度的增强或减弱来进行测定。 能量转移的形式是单重态单重态转移，由一个发荧光的给体将能量传给一受体，这个受体可发射自己的特征荧光（荧光增强），也可不发荧光（荧光猝灭）。金属配合物 主要是基于配合物立体结构的发光性质，多是过渡金属元素配合物。 测定中离子强度过高会影响D

2、NA的构象，使DNA表面的阴离子被屏蔽，降低核酸分子竞争阳离子的能力。酸度过低会使核酸中磷酸根质子化，而过高则会出现金属的难溶物。另外有时蛋白质的存在会严重干扰测量，须预先去除再进行测定。纳米粒子 某些纳米粒子也可做为核酸检测的荧光探针 与传统的有机染料荧光探针相比，半导体纳米晶体探针的光强度高20倍，荧光寿命长，光稳定性高100倍，谱线宽度只是有机染料谱线宽度的1/3，因此大大提高了分析的灵敏度和选择性。金属离子 主要是基于某些稀土离子本身的发光特性 稀土离子的共振带正好与核酸受紫外光激发时的三线态相重叠，能有效地发生从有机配体到中心离子之间的能量转移。 该法具有光谱线宽窄、发光寿命长和能发

3、射特征荧光且与生物分子有很大亲和力等特点。FOR EXAMPLE GMP在生物体内具有重要的生理功能。 研究表明，致癌物优先结合到核酸中鸟嘌呤形成加合物。因而测定GMP具有重要的意义。 常用的荧光方法是基于GMP和苯甲基乙二醛在一定条件下反应进行测定。这种方法的选择性较高，但必须在60下反应30分钟，在如此高的温度下会影响生物样品的活性及荧光强度的稳定性。 另外，有人将碱基衍生化，应用薄层色谱进行分离。应用色谱法分辨率较高，但所需时间长，一般需数小时，而且需制备特殊的柱子。 近年来发现稀土离子Tb3+与核酸结合后，其荧光强度可以增加数千倍以上，并且这种作用是专一的，核酸中仅GMP可以明显地增强荧光，但此法若仅用Tb3+灵敏度又不太高。 后来发现的稀土共发光效应就很好地解决了这个问题。例如Gd3+加入Tb-GMP体系明显地增强了该体系的荧光强度。 实验表明，GMP的测量线性范围达到3x10-8 -3x10-5mol/L，比Tb-GMP体系宽一个数量级 此外，它的检测限达到3.9x I0-9 mol/l ，比后者低一个数量级。 ?机理呢? Gd3+对Tb3+的荧光

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