环氧乙烷残留量检测作业指导书

1、环氧乙烷残留量检测作业指导书一.检验液的制备制备检验液应尽量模拟产品使用过程中所经受的条件。推荐在表1中选择检验液制备方法。表1序号检验液制备方法适用产品举例1.取三套样品和玻璃烧瓶连成一循环系统,加入250ml水并保持在37±1;通过一蠕动泵作用于一段尽可能短的医用硅橡胶管上,使水以1L/h的流量循环2h,收集全部液体冷至室温作为检验液。取同体积水置于玻璃烧瓶中,不装样品同法制备空白对照液。使用时间较长的体外管路制品,如输液器、输血器等。2.取样品切成1cm长的段,加入玻璃容器中,按样品的内外总表面积(cm2与水(ml的比为2:1的比例加水,加盖后,在37±1下放置24h

2、,将样品与液体分离,冷至室温,作为检验液。取同体积水置于玻璃容器中,同法制备空白对照液。使用时间较长的体内导管。3.取样品的厚度均匀部分,切成1cm2的碎片,用水洗净后晾干,然后加入玻璃容器中,按样品的内外总表面积(cm2与水(ml的比为5:1(或2:1的比例加水,加盖后置于压力蒸汽灭菌器中,在121±1加热30min,加热结束后将样品与液体分离,冷至室温作为检验液。取同体积水置于玻璃容器中,同法制备空白对照液。使用时间很长的产品,如血袋等。4.样品中加水至公称容量,在37±1下恒温8h或1h将样品与液体分离,冷至室温,作为检验液。取同体积水置于玻璃容器中,同法制备空白对照

3、液。使用时间很短的容器类产品,如注射器等。二.检验项目及分析方法1.浊度和色泽的测定按中华人民共和国药典2000版澄明度检查法测定浊度。用正常视力或矫正视力检测试验液的色泽。2.还原物质(易氧化物2.1方法一 - 直接滴定法2.1.1原理高锰酸钾是强氧化剂,在酸性介质中,高锰酸钾与还原物质作用,MnO4-被还原成 Mn2+:MnO4- + 8H+ +5e = Mn2+ + 4H2O 2.1.2溶液的配制a. 稀硫酸(20%:量取128ml硫酸,缓缓注入500ml水中,冷却后稀释至1000ml。b. C(Na2C2O4=0.05mol/L草酸钠溶液:称取草酸钠6.700g,加水溶解并稀释至100

4、0ml。c. C(Na2C2O4=0.005mol/L草酸钠溶液:用前取0.05mol/L草酸钠溶液加水稀释10倍。d. C(KMnO4=0.02mol/L高锰酸钾标准溶液:取3.3g高锰酸钾,加水1050ml,煮沸15min,加水至1000ml,密塞后静置两天以上,用微孔玻璃漏斗过滤,摇匀。标定其浓度。e. C(KMnO4=0.002mol/L高锰酸钾标准溶液:临用前取0.02mol/L高锰酸钾标准溶液加水稀释10倍。必要时煮沸,放冷,过滤,再标定其浓度。2.1.3. 0.02mol/L高锰酸钾标准溶液的标定取105下干燥至恒重的基准草酸钠约0.2g,精确称重,加入100ml硫酸溶液(92+

5、8,搅拌使之溶解。自滴定管中迅速将25ml待标定的高锰酸钾标准溶液加入到本液中,待褪色后,加热至65,继续滴定至溶液呈微红色并保持30S不褪。当滴定终了时,溶液度应不低于55,同时做空白试验。注:每6.7mg草酸钠相当于0.02mol/L高锰酸钾标准溶液1ml。 2.1.4试验步骤取表1制备的检验液20ml,置于锥形瓶中,精确加入产品标准中规定浓度的高锰酸钾标准溶液3ml,稀硫酸5ml,加热至沸并保持微沸10min,稍冷后精确加入对应浓度的草酸钠溶液5ml,置于水浴上加热至75-80,用规定浓度的高锰酸钾标准溶液滴定至显微红色,并保持30S不褪色为终点,同时与同批空白对照液相比较。 2.1.5

6、结果计算还原物质(易氧化物含量以消耗高锰酸钾标准溶液的量表示,按式(1计算: Vs VoV = Cs (1Co式中: V 消耗高锰酸钾标准溶液的体积,ml。Vs 检验液消耗滴定液高锰酸钾标准溶液的体积,ml。Vo 空白液消耗滴定液高锰酸钾标准溶液的体积,ml。Cs 滴定液高锰酸钾标准溶液的实际浓度,mol/L。Co 标准中规定的高锰酸钾标准溶液的浓度,mol/L。2.2方法二间接滴定法 2.2.1原理水浸液中含有的还原物质在酸性条件下加热时,被高锰酸钾氧化,过量的高锰酸钾将碘化钾氧化成碘,而碘被硫代硫酸钠还原。 2.2.2溶液的配制a. 稀硫酸(20%:量取128ml硫酸,缓缓注入500ml水

7、中,冷却后稀释至1000ml。b. C(KMnO4= 0.02mol/L高锰酸钾标准溶液:同2.1.2 d.。c. C(KMnO4= 0.002mol/L高锰酸钾标准溶液:同2.1.2e.。d. 淀粉指示液:取0.5g淀粉溶于100ml水中,加热煮沸后冷却备用。e. C(Na2S2O3 = 0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液:称取26g硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O或16g无水硫代硫酸钠,溶于1000ml水中,缓缓煮沸10min,冷却,加水至1000ml。置两周后过滤,标定其浓度。 f. C(Na2S2O3 = 0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液:临用前取0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶

8、液用新煮沸并冷却的水稀释10倍。2.2.3. C(Na2S2O3 = 0.1mol/L硫代硫酸钠溶液的标定称取0.15g于120烘干至恒重的基准重铬酸钾,精确称重,置于碘量瓶中,溶于25ml水,加2g碘化钾及20ml稀硫酸(20%,摇匀,于暗处放置10min。加水150ml,用配制好硫代硫酸钠溶液C(Na2S2O3 = 0.1mol/L滴定,近终点时加3ml,淀粉指示液(5g/L,继续滴定到溶液由蓝色变为亮绿色。同时作空白试验。2.2.4试验步骤取表1制备的检验液10ml,加入250ml碘量瓶中,加1ml稀硫酸和10ml产品标准中规定浓度的高锰酸钾标准溶液,煮沸3min,迅速冷却,加0.1g碘

9、化钾,密塞,摇匀。立即用相同浓度的硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色,再加0.25m l淀粉指示液,继续用硫代硫酸钠标准溶液滴定至无色。用同样的方法滴定空白对照液。2.2.5结果计算还原物质(易氧化物的含量以消耗高锰酸钾溶液的量表示,计算公式为: Vo VsV = Cs (2Co式中: V 消耗高锰酸钾溶液的体积,ml。Vs 检验液消耗滴定液硫代硫酸钠溶液的体积。Vo 空白液消耗滴定液硫代硫酸钠溶液的体积,ml。Cs 滴定液硫代硫酸钠溶液的实际浓度,mol/L。Co 标准中规定的高锰酸钾C(1/5KMnO4溶液的浓度。3.氯化物 3.1原理氯离子在酸性条件下与硝酸银反应生产氯化银沉淀。3.2溶液的

10、配制a. 氯化钠标准贮备液:称取110干燥恒重的氯化钠0.165g置于容量瓶中加水适量,使溶解并稀释至1000ml,摇匀,即得100ug/ml氯的标准贮备液。b. 氯化钠标准溶液:临用前精确量取氯化钠标准贮备液稀释至所需浓度。c. 硝酸银试液:取硝酸银1.75g,加水适量溶解并稀释至100ml,摇匀。d. 稀硝酸:取105ml硝酸,用水稀释至1000ml。3.3试验步骤取表1的检验液10ml,加入50ml纳氏比色管中,加10ml稀硝酸(溶液若不澄清,过滤,滤液置于50ml纳氏比色管中,加水使成约40ml,即得供试液。取10ml氯化钠标准溶液置另一50ml纳氏比色管中,加入10ml稀硝酸,加水使

11、成约40ml,摇匀,即得标准对照液。在以上两试管中分别加入硝酸银试液1ml,用水稀释至50ml,在暗处放置5min,置黑色背景上,从比色管上方观察供试液与标准对照液比浊。供试液如带颜色,除另有规定外,可取供试溶液两份,分置50ml纳氏比色管中,一份中加硝酸银试液1.0ml,摇匀,放置10min,如显浑浊,可反复过滤,至滤液完全澄清,再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml,摇匀,在暗处放置5min,作为对照液;另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml,摇匀在暗处放置5min,按上述方法与对照溶液比较,即得。4.酸碱度4.1方法一取表1制备的检验液与空白对照液,用酸度计分别测定其

12、PH值,以两者之差作为检验结果。4.2方法二 4.2.1溶液的配制a. C(NaOH=0.1mol/L氢氧化钠标准溶液:取澄清的氢氧化钠溶液5.6ml,加新沸过的冷水使成1000ml,摇匀。b. C(NaOH=0.01mol/L氢氧化钠标准溶液:临用前取0.1mol/L氢氧化钠标准溶液加水稀释10倍。c. C(HCl=0.1mol/L盐酸标准溶液:取HCl 9.0ml,加水适量使成1000ml,摇匀。d. C(HCl=0.01mol/L盐酸标准溶液:临用前取0.1mol/L盐酸标准溶液加水稀释10倍。e. Tashiro指示剂:溶解0.2g甲基红和0.1g亚甲基蓝于100ml乙醇中95%(V/

13、V。4.2.2试验步骤将0.1mlTashiro指示剂加入内有20ml检验液的烧瓶中,如果溶液颜色呈紫色,则用C(NaOH=0.01mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定;如果呈绿色,则用C(HCl=0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定,直至呈灰色。以消耗0.01mol/L氢氧化钠标准溶液或盐酸标准溶液的体积(以毫升为单位作为检验结果。5.蒸发残渣5.1试验步骤蒸发皿预先在105干燥恒重,精确称重。取表1检验液50ml加入蒸发皿中,在水浴上蒸干并在105恒温箱中干燥至恒重。同法测定空白对照液。5.2结果计算w = (w12w11(w02w01×1000(3式中 w 蒸发残渣的质量,mg。w

14、11未加入检验液的蒸发皿质量,g。w12加入检验液蒸发皿质量,g。w01未加入空白液的蒸发皿质量,g。w02加入空白液的蒸发皿质量,g。6.重金属总含量6.1方法一6.1.1原理在弱酸性溶液中,铅、铬、铜、锌等重金属与硫代乙酰胺作用生成不溶性有色硫化物。以铅为代表制备标准溶液进行比色,测定重金属的总含量。6.1.2试剂及溶液配制a. 酚酞指示液:取1g酚酞,加乙醇100ml。b. 乙酸盐缓冲液(PH3.5:取乙酸铵25g,加水25ml溶解后,加盐酸液(7mol/L38ml,用盐酸液(2mol/L或氨溶液(5mol/L准确调节PH值3.5(电位法指示,用水稀释至100ml,即得。c. 硫代乙酰胺

15、试液:取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成100ml,置冰箱中保存。临用前取混合液由氢氧化钠(1mol/L15ml,水 5.0ml及甘油20ml组成5.0ml,加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml,置水浴上加热20S,冷却,立即使用。d. 铅标准贮备液:称取110干燥恒重的硝酸铅0.1598g置1000ml容量瓶中加硝酸5ml与水50ml,溶解后用水稀释至刻度,摇匀,作为标准贮备液,铅的浓度为100g/ml。e. 铅标准溶液:临用前,精确量取铅标准贮备液稀释至所需浓度。 6.1.3试验步骤取表1制备的检验液50ml于50ml的纳氏比色管中,另取一50ml纳氏比色管,加入铅标准液1ml,加水稀释至50ml,

16、于上述两只比色管中分别加入乙酸盐缓冲液(PH3.5各2ml,再分别加入硫代乙酰胺试液各2ml,摇匀,放置2min。置白色背景下从上方观察,比较颜色深浅。6.2方法二6.2.1原理在碱性溶液中,铅、铬、铜、锌等重金属能与硫化钠作用生成不溶性有色硫化物。以铅为代表制备标准溶液进行比色,测定重金属总含量。6.2.2溶液的配制a. 氢氧化钠试液:取氢氧化钠4.3g,加水使溶解成100ml,即得。b. 硫化钠试液:取硫化钠1g,加水使溶解成10ml,即得。c. 铅标准贮备液:同6.1.2d。d. 铅标准溶6.1.2e。6.2.3试验步骤取表1制备的检验液50ml于50ml纳氏比色管中,另取一50ml纳氏

17、比色管,加入铅标准液1ml,加水稀释至50ml,于上述两只比色管中分别加入氢氧化钠试液5ml,再分别加入硫化钠试液5滴,摇匀,置白色背景下从上方观察,比较颜色深浅。7.紫外吸收取表1制备的检验液,用0.45m的微孔滤膜过滤,在5h内用1cm检验池以空白对照液为参比在规定的波长范围内测定吸光度。8.铵8.1原理铵离子在碱性溶液中能与纳氏试剂反应生成黄色物质,通过与标准对照液比色,知其含量多少。8.2溶液配制a. C(NaOH=3mol/L的氢氧化钠溶液:称取12.0g氢氧化钠,用水溶解并稀释至100ml。b. 纳氏试剂(碱性碘化汞钾试液:取碘化钾10g,加水10ml溶解后,缓缓加入二氯化汞的饱和

18、水溶液,随加随搅拌,至生成的红色沉淀不再溶解,加氢氧化钾30g溶解后,再加二氯化汞的饱和水溶液1ml或1ml以上,并用适量的水稀释使成200ml,静置,使沉淀,即得,同时倾取上清液使用。C.氯化铵标准贮备液:精确称取0.300g氯化铵,用水溶解并稀释至100ml,即得含NH4+ 1.0g/L的标准贮备液。d. 氯化铵标准溶液:临用前,精确量取氯化铵标准贮备液稀释至所需浓度。 8.3试验步骤取表1制备的检验液10ml置于一具塞比色管中,另取10ml氯化铵标准溶液置于另一比色管中,于上述两管中各加入1ml氢氧化钠溶液和1ml纳氏试剂,混合均匀,5min后,比较上述两支比色管中溶液颜色的深浅。9.部

19、分重金属元素(比色分析法9.1锌 9.1.1原理锌与锌试剂反应显色在620nm处测定吸光度。9.1.2溶液的配制a. 0.1mol/L氯化钾溶液:称取7.455g氯化钾,加水稀释至1000ml。b.0.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4.000g氢氧化钠,加水稀释至1000ml。c. 硼酸氯化钾缓冲液(PH=9.0:称取硼酸3.090g加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解,再加0.1mol/L氢氧化钠溶液210ml,即得。d. 氢氧化钠试液:称取4.00g氢氧化钠,用水溶解,稀释至100ml。e. 稀盐酸：取 25ml 盐酸，用水稀释至 100ml。 f. 锌试剂溶液：取 0.130g

20、锌试剂，加 2ml 氢氧化钠试液溶解，用水稀释至 100ml。 g. 锌标准贮备液：称取在 120干燥恒重的氧化锌 0.1246g 加稀盐酸使之溶 解，用氢氧化钠试液调 PH 值至 7。用水稀释至 1000ml，摇匀，即得锌的标准贮 备液。锌的浓度为 100 g/ml。 h. 锌标准溶液：临用前精确量取锌标准贮备液稀释至所需浓度。 9.1.3 试验步骤 取表 1 制备的检验液 5ml 置 10ml 量瓶中， 2ml 硼酸氯化钾缓冲液与 0.6ml 加 锌试剂溶液，用水稀释至刻度。取 5ml 锌标准溶液，同法制成标准对照液，摇 匀，放置 1h，置 1cm 吸收池中，在 620nm 波长处测定吸光

21、度。以空白液调零 点。 9.1.4 结果计算 根据测得吸光度值， 按式（4）计算检验液相应重金属含量： As Cs= Cr (4 Ar 式中：Cs检验液相应重金属的浓度， g/ml； Cr标准对照液相应重金属的浓度， g/ml； As检验液吸光度； Ar标准对照液吸光度。 9.2 铅 9.2.1 原理 铅离子在弱碱性（PH8.6-11）条件下与双硫腙三氯甲烷溶液生成红色络合 物。 9.2.2 试剂及溶液的配制 a. 0.1%双硫腙三氯甲烷贮备液：称取 0.10g 双硫腙溶解于三氯甲烷中， 稀释至 100ml，贮存于棕色瓶中，置冰箱内保存。如双硫腙不纯，可用下述 方法纯化： 称取 0.20g 双

22、硫腙， 溶于 100ml 三氯甲烷， 经脱脂棉过滤于 250ml 漏斗中，每次用 20ml 3%(V/V氨水反复萃取数次，直至三氯甲烷相几乎无绿 色为止。合并水相至另一分液漏斗中，每次用 10ml 三氯甲烷洗涤水相两次。 弃去三氯甲烷相，水相用 10%(V/V硫酸酸化至双硫腙析出，再每次用 100ml 三氯甲烷萃取两次，合并三氯甲烷相，倒入棕色瓶中。 b. 吸光度 0.15(透光率 70%的双硫腙三氯甲烷溶液：临用前取适量双硫腙 三氯甲烷贮备液，用三氯甲烷稀释至吸光度为 0.15(波长 510nm，1cm 比色 皿。 c. 酚红指示液：称取 0.1g 酚红，溶于 100ml 乙醇中即得。 d.

23、 50%柠檬酸铵溶液：取 50g 柠檬酸铵溶于 100ml 水中，以酚红为指示剂， 用氨水碱化 (PH8.5-9，用双硫腙贮备液提取，每次 20ml，至双硫腙绿色不 变为止。弃去三氯甲烷层，水层再用三氯甲烷分次洗涤，每次 25ml，至三氯 甲烷层无色为止，弃去三氯甲烷层，取水层。 e. 10%氰化钾溶液：称取 10g 氰化钾溶于水中，并稀释至 100ml。若试剂不 纯，应先将 10g 氰化钾溶于 20ml 水中，按 50%柠檬酸铵溶液纯化的方法进行 纯化后稀释至 100ml。 f. 10%盐酸羟胺溶液：取 10g 盐酸羟胺溶于水中，稀释至 100ml，如试剂 不纯，按 50%柠檬酸铵溶液纯化的

24、方法进行纯化。 g. 铅标准贮备液：称取 0.1598g 经 110干燥恒重的硝酸铅，溶于 5ml 硝酸和 50ml 水中，溶解后用水稀释至 1000ml，摇匀，作为铅标准贮备液，铅 的浓度为 100 g/ml。 h. 铅标准溶液：临用前精确量取铅标准贮备液，稀释至所需浓度。 9.2.3 试验步骤 取表 1 制备的检验液 50ml，加入 250ml 分液漏斗中，另取 1ml 铅标准溶液 加入另一支 250ml 分液漏斗中，加空白对照液稀释至 50ml。向两支分液漏斗 中各加 0.2ml 盐酸、3 滴酚红指示液，2 滴盐酸羟胺溶液，2ml 柠檬酸铵溶液， 混匀。用氨水调节 PH 值至 8.5-9

25、（溶液 由黄色变成红色） ，加入 1ml 氰化钾 溶液，10ml 双硫腙三氯甲烷溶液，振摇 2min，静置分层。放出双硫腙三氯甲 烷液于比色管中，在 20-60min 内用分光光度计在 510nm 处测定吸收度，以空 白液调零点。 9.2.4 结果计算 根据测得吸光度值，按式（4）计算检验液相应重金属含量。 10.环氧乙烷残留量分析方法（比色分析法） 10.1 原理 环氧乙烷在酸性条件下水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与 品红一亚硫酸试液反应产生紫红色化合物，通过比色分析可求得环氧乙烷含 量。 10.2 溶液配制 a. 0.1mol/L 盐酸：取 9ml 盐酸稀释至 1000ml。 b. 0.5%高碘酸溶液：称取高碘酸 0.5g，稀释至 100ml。 c. 硫代硫酸钠溶液：称取硫代硫酸钠 1g，稀释至 100ml。 d. 10%亚硫酸钠溶液：称取 10.0g 无水亚硫酸钠，溶解后稀释至 100ml。 e. 品红亚硫酸试液：称取 0.1g 品红，加入 120ml 热水溶解，冷却后加 入 10%亚硫酸钠溶液 20ml，盐酸 2ml 置于暗处。试液应无色，若发现有 微红色，应重新配制。 f. 乙二醇标准贮备液：取一外部干燥、清洁的 50ml 容量瓶，加水约 30ml， 精确称重。移