微生物实验课件：微生物染色

1、实验二实验二 微生物染色微生物染色微生物染色微生物染色1. 微生物细胞小而透明，在普通光学微生物细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易观察。染色后微生物显微镜下不易观察。染色后微生物细胞与背景形成明显的色差，从而细胞与背景形成明显的色差，从而能清楚的观察到其形态；能清楚的观察到其形态；2. 用于鉴别。用于鉴别。染色的意义染色的意义实验目的实验目的 学习微生物的染色原理、染色的基本操作技术，从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。微生物染色微生物染色染色的意义染色的意义实验二实验二 微生物染色微生物染色二、染色原理二、染色原理 由于微生物细胞含有大量水分，对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机

2、体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。 经测定，细菌等电点pH在2-5之间，故在中性、碱性或偏酸性溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的pH值，所以细细菌带负电荷菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的较多。

3、微生物体内各结构与染料结合力不同各结构与染料结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。 实验二实验二 微生物染色微生物染色活活菌菌染染色色简单染色法抗酸染色革兰氏染色复杂染色法普通染色芽孢染色法荚膜染色法细胞壁染色法特殊染色正染色负染色死菌染色细菌染色三三 、细菌染色法、细菌染色法:负染色 背景着色，菌体不着色，多用于荚膜的观察。背景着色，菌体不着色，多用于荚膜的观察。三、染色方法三、染色方法 简单染色法简单染色法 简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态，用简单染色即可。(二二)复染色法复染色法 用两种或多种两种或多种染料染细菌

4、，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。 革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构细胞壁的成分和结构不同而造成的。实验二实验二 微生物染色微生物染色四、实验材料四、实验材料1.显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯等。2.石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95乙醇、蕃红染液3.菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌

5、 染色染料简介染色染料简介 主要有三大类：碱性染料、酸性染料、中主要有三大类：碱性染料、酸性染料、中性染料。性染料。 碱性染料的离子带正电荷，可与带负电荷碱性染料的离子带正电荷，可与带负电荷的物质结合。微生物蛋白质常带负电荷，的物质结合。微生物蛋白质常带负电荷，故碱性染料常用。故碱性染料常用。 常用碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复常用碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红和孔雀绿。红和孔雀绿。 酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。的物质结合。 中性染料是碱性染料和酸性染料的结合物，中性染料是碱性染料和酸性染料的结合物，故又称复合染料。故又称复合染料。

6、染色染料简介染色染料简介实验二实验二 微生物染色微生物染色涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色1min水洗、吸干镜检镜检制备涂片标本制备涂片标本简单染色简单染色五、实验内容与步骤五、实验内容与步骤细菌的简单染色步骤细菌的简单染色步骤 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检1涂片涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量菌种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2干燥干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微

7、加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色1min水洗、吸干镜检镜检制备涂片标本制备涂片标本简单染色简单染色五、实验内容与步骤五、实验内容与步骤3固定固定 固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过23次，共约23秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60）,放置待冷后，进行染色。4染色染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。5水洗水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6干燥干燥

8、 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 7镜检镜检 用显微镜观察，并用铅笔绘出细菌形态图。 用油镜观察用油镜观察香柏油在边台上香柏油在边台上涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色1min水洗、吸干镜检镜检制备涂片标本制备涂片标本简单染色简单染色五、实验内容与步骤五、实验内容与步骤2 细菌的革兰氏染色步骤细菌的革兰氏染色步骤 复染复染 涂片干燥固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥观察1取大肠杆菌和枯草杆菌(均以无菌操作)分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。2用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。3加碘液媒染1min后水洗。4斜置载玻片，滴加95乙醇脱色

9、，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时2030s，随即水洗。 用油镜观察香柏油在边台上用油镜观察香柏油在边台上5用蕃红染液复染1min，水洗。6用吸水纸吸掉水滴，2 细菌的革兰氏染色步骤细菌的革兰氏染色步骤 复染复染5用蕃红染液复染1min，水洗。6用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果革兰氏染色的结果。实验二实验二 微生物染色微生物染色六、注意事项六、注意事项1革兰氏染色成败的关键是脱色时间关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也

10、会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 选用培养18- -24小时菌龄小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。菌名 菌体形态 液体颜色 G+或 G 大肠杆菌 枯草杆菌 七、实验结果七、实验结果简单染色 ： 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌和枯草杆菌染成（ ）色。革兰氏染色（大肠杆菌大肠杆菌与枯草杆菌） ： 将结果填于下表中小小 结结1.食品微生物检验方法是食品监测必不可少的重要组成部分，可衡量食品卫生质量，为卫生管理工作提供依据，保障人民的身体健康。2.食品微生物检验包括生产环境的检验，原辅料检验，食品加工、储藏、销售诸环节的检验，食品的检验等内容。3.食品微生物检验指标主要有菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌及其毒素等。 小小 结结4、食品微生物检验的一般程序包括：检验前准备、样品的采集与处理、样品的送检与检验、检验、结果报告等。5、染色是强化细胞或细胞组份与周围环境之间的反差，便于利用普通光学显微镜来观察微生物细胞