三参胶囊的质量标准研究

1、三参胶囊的质量标准研究                 作者：兰雁，陈文文，罗诚，黄勤挽，吴纯洁【关键词】  三参胶囊；,质量标准；,薄层色谱；,高效液相色谱摘要：目的建立三参胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对丹参、人参、制首乌进行了定性鉴别，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定了胶囊中丹参素钠的含量，采用Shimpack VPODS C18柱（5 m，150 mm×4.6 mm）；检测波长280 nm；流

2、动相：0.5%冰醋酸-甲醇（946）；流速：1.0 mlmin-1；柱温：30。结果此法线性范围0.110 91.663 5g，r=0.999 9；丹参素钠的平均回收率为98.82%（RSD=1.45%，n=5）。结论该方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法。关键词：三参胶囊；  质量标准；  薄层色谱；  高效液相色谱Abstract：Objective To develop a quality standard for Sanshen capsule. MethodsTLC was used to identify the ingredients such

3、 as Danshen Root Ginseng Root and Tuber Fleeceflower Root respectively . Meanwhile, the content of Danshensu in Sanshen capsule was determined by RPHPLC with Shim-pack VPODS C18（5 m，150 mm×4.6mm） .The detection wavelength  was 280 nm；0.5%Acetic acid-Methanol（946）was used as mobile phase, t

4、he rate of 1.0  mlmin-1and the column temperature was at 30.ResultsThe method was linear within the range of 0.110 91.663 5 g,（r=0.999 9）. The average recovery of Danshensu was 98.82%,（RSD1.45%，n=5）.ConclusionThe method is accurate，reliable,and can be used for quality control of the production.

5、Key words：Sanshen capsule;  Quality standard;  TLC；  HPLC     三参胶囊由丹参、三七、人参、制首乌等8味药组成，此方属于医院临床经验方，为更好发挥本方疗效，满足临床不断扩大的需求，现按中药新药6类注册要求研制开发，制成胶囊剂。本方功能主治为破瘀消，扶正祛邪。临床用于治疗气滞血瘀型及气虚血瘀型肺癌为主的恶性肿瘤。本文对方中丹参、制首乌、人参、三七进行了薄层色谱鉴别研究；采用RPHPLC法测定方中主药丹参中丹参素钠的含量，研究的方法简便、快速、重复性好，可作为本品质量控制方法。现

6、报道如下：1  仪器与试药岛津LC10ATvp液相色谱仪，SPDM10Avp检测器，浙江大学2010色谱工作站；sartoriusBP211D电子天平（感量0.1 mg；0.01 mg，载量210 g；80 g）；autoscienceAS5150A超声波清洗器；TGL-16G高速离心机；939全自动薄层制板器，ZF90型暗箱紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂）。丹参素钠（110855200304，供含量测定用），中国药品生物制品检定所提供。丹参酮A（0766200213），中国药品生物制品检定所提供。人参二醇（0701200109，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。人参三醇（07

7、02200009，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。何首乌对照药材（09349704），中国药品生物制品检定所提供。三参胶囊，批号20030401，20030402，20030403；硅胶G由青岛海洋化工厂生产，水为重蒸馏水；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。所有药材均购于市场，经检验均符合中国药典2000年版部各药材项下的规定。2  方法与结果2.1  定性鉴别2.1.1  丹参的薄层色谱鉴别11取本品2.5 g，加乙醚10 ml，超声处理10 min，滤过，残留物备用，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯适量使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮A对照品，加醋酸乙酯制成

8、每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2000版部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（191）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1a。2.1.2   制首乌的薄层色谱鉴别23    取本品2.5 g，加甲醇50 ml，超声处理15 min，滤过，滤液水浴挥干，残渣加水10 ml使溶解，再加盐酸2 ml，置水浴上加热回流30 min，立即冷却，用乙醚提取两次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2 ml

9、使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2000版部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 l，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（1521）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图1b。再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1c。2.1.3   人参、三七的薄层色谱鉴别   取本品5 g，加7硫酸溶液100 ml，置水浴上加

10、热回流1 h，放冷，用石油醚（3060）振摇提取3次，50 ml/次，合并石油醚液，挥干，残渣加0.5 ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇、人参三醇对照品，加无水乙醇制成每毫升各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2000版部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液10 l，对照品溶液5 l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿乙醚（11）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1d。图1  丹参、制首乌、人参、三七的薄层色谱鉴别（略）2.2 

11、 含量测定4    2.2.1  色谱条件   Shimpack VPODS C18柱（5 m，150 mm×4.6 mm）；流动相：0.5冰醋酸甲醇（946）；流速：1.0 mlmin-1；检测波长280 nm；柱温：30；进样量：10 l。 2.2.2  对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。2.2.3   样品溶液制备 取本品内容物，研细，取0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水约20 ml，超声处理（功率150 W，频率50KHz）

12、30 min，取出，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液离心，即得。2.2.4   系统适应性实验    取样品溶液10 l，注入高效液相色谱仪测试，丹参素钠的保留时间为10 min左右，理论板数以丹参素钠峰计大于3 000，丹参素钠峰与相邻峰分离度大于1.5。见图2b。2.2.5   线性关系考察    精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg 的溶液，摇匀，作为对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液1，2，4，8，15 l，进样测定。分别以进样量（g）为横坐

13、标（X），峰面积（A）为纵坐标（Y）作图，进行回归分析。丹参素钠回归方程为：Y=4.634 1×102+9.813 17×105X，相关系数：r=0.999 9。结果表明丹参素钠进样量在0.110 91.663 5 g范围内与峰面积呈很好的线性关系。2.2.6   阴性对照实验    按处方制备缺丹参的阴性样品。依照“2.2”项下方法制成阴性样品溶液。取供试品溶液、对照品溶液（每毫升含丹参素钠0.110 9 mg）、阴性样品溶液各10 l注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，测定结果为供试品溶液在与对照品溶液相同位置的地方

14、出峰，且分离效果较好，缺丹参阴性样品溶液无干扰。结果见图2。2.2.7   精密度实验   精密吸取对照品溶液（每毫升参素钠0.110  mg）10 l，连续进样5次，记录峰面积，结果丹参素钠平均峰面积为1 145 667，RSD=0.44%。2.2.8  重复性实验    取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果样品中丹参素钠的平均含量为5.79 mgg-1，RSD=0.698%表明本法重复性良好。2.2.9  稳定性实验   取同一批号的样品适量，按依照“2.2.3”

15、项下方法制成供试品溶液，于室温下保存，按上述色谱条件测定方法于制备完成后放置不同时间精密吸取10 l注入液相色谱仪，记录色谱图，考察其稳定性，结果供试品平均峰面积为1 285 530.7，RSD=1.82%。可知样品溶液在16 h内稳定。2.2.10  加样回收实验   精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg的溶液，精密称取样品（丹参素钠含量为5.79 mgg-1）适量，5份，分别精密加入丹参素钠对照品溶液（C1.086 mgml-1）1.5 ml，再分别加甲醇20 ml，按样品含量测定方法测定，计算回收率。丹参素钠的平均回收率为

16、98.82%，RSD=1.45%。结果见表1。图2  对照品（a）、样品（b）、阴性样品（c）色谱图（略）表1  丹参素钠含量测定加样回收率实验结果（略）2.2.11   样品测定    取样品3批，分别按依照“2.2.3”项下方法制成供试品溶液；精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升参素钠0.110 9 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液和对照品溶液各10 l注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）*为每粒中平均含量3  讨论3.1  关于薄层鉴别

17、   采用以上方法对三参胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰，经多批样品鉴别，均能检出与对照相同的斑点。同时我们也对方中莪术、土鳖虫的薄层色谱鉴别进行了研究，结果分离效果不好，且阴性有干扰，故未收入正文。3.2  检测波长的选择   取丹参素钠对照品溶液及阴性溶液，分别进行紫外扫描（190370 nm），丹参素钠峰在280 nm波长处均有最大吸收，而阴性对照的吸收较小，故选择280 nm作为检测波长。3.3  提取溶剂的考察   曾分别用乙醇、稀乙醇、甲醇、水作为提取溶剂进行考察，丹参素钠含量分别为5.21，4.26，4.63，5.98 mgg-1，结果以水为提取溶剂时，丹参素钠的含量最高，故选择水为提取溶剂。3.4   提取时间的考察   取同批样品内容物，研细，取0.5 g，3份，精密称定，置25 ml量瓶中，分别加水20 ml，超声处理（150w，50kHz）15，30，45 min，进行测定，结果丹参素钠的含量分别为4.22，5.98，5.99 mgg-1。超声处理30  min后含量几无变化，试验选择提取时间为30