血清肌酸激酶CKDGKC推荐方法测定

1、血清肌酸激酶CKDGK雅荐方法测定1 .实验原理德国临床化学学会（DGKC和国际临床化学学会（IFCC）推荐 的连续监测法。ADP +磷酸肌酸CK; 肌酸+ ATP己糖激酶（HK）ATP +葡萄糖ADP +葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+NADPDH） -6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+HNADPH在340nm处有特异吸收，通过测定NADPH生 成 速率计算出CK活性。2 .标本：2.1 病人准备：无特殊要求。2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。3 .标本存放：稳定性：28c保存稳定7天；1525c 保存稳定1天;-20 C保存稳定4周（避光保存）。3天内 的活性损失：28c保存24小时或

2、1822 c保存1小时至少损失10%.4,标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染的标本。6 .实验材料6.1 试剂 奥林巴斯CK测定试剂盒（试齐IJ1 +试齐（J2）6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28C,若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L ）为防腐齐八 不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措 施使用试剂。6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供

3、的校准品对自动分 析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文7 .仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8 .操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参 数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见 AU2700生化分析仪操作规 程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2s为质控警告限， 3s为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参 见室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TruCal U 复合校

4、准品CK校准值校准 仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠 的检测结果。不使用校准品进行CK活力检测，可以直接 使用A A/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所 得结果的可靠性不如使用校准品。计算CK活力的计算因 子见下表：A A/min X因子 =CK活力U/L计算因子（37 C ） ：340nm41274207334nm365nm472912 .参考值范围1: （ U/L ）成人：女性24167男性24190参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据 好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义"2：肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中

5、的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。 在血清中CK形式为CK-MM CK-MB, CK-BB和巨酶等的二 聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的 升高。CK和CK-MB 一起检测有助于心肌梗死的诊断和监 视。14 .操作性能14.1 线性范围 V 1200U/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方 法，AU2700批内精密度小于3%,总精密度小于3%。用于 分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)样品11593.182.00

6、样品149.51.052.12样品22201.540.70样品21571.631.04样品35083.690.73样品32282.311.0114.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂 盒(x),同时对71个样品进行CK活力检测，将检测结果 作方法学比较，其 统计结果如下：y=0.98x+0.02( U/L );r=1.000。14.4 灵敏度:本试剂的检测限为5U/L。14.5 病人结果可报告范围：5-1200U/L 。16 .病危报警值的处理：无。17 .方法局限性17.1 本法对CK活力的线性上限为1200U/L ,当测定值超 过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1

7、0稀释， 重新测定，结果乘以11。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度£1704Nmol/L , 胆红素浓度684Nmol/L ,血红蛋白w2.00g/L ,甘油三酯浓度22.6mmol/L 时没有观察到干扰。18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家 进行维修。19 . 参考文献1. Stein W. Creatine kinase (total activity) , creatine kinase isoenzymes and variants. In: ThomasL ed. Clinical laboratory diagnostics. Frankfurt:

8、TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80.2. MOss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA , Ashwood ER. editors. Tietz Textbook ofClinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia:W. B.Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Recommendations of the German Society forClinical Chemistry. Standardization of methods forthe estimation of enzyme activities in biologicalfluids:Standard method for the determination of creatine kinase activity. J Clin Chem Clin Biochem1977;15:255-60.4. Lorentz K , Rohle G , Siekmann L. Introductionof new standard methods 1994 for the determ