标本处理核酸纯化程序

1、标本处理（核酸纯化）程序实验室主 题文件编号F07临沧市第二人民医院标本处理（核酸纯第1页共4页第1版第0次修改检验科分子生物实验室化）标准操作程序撰写日期：2015.11.201目的：保证标本处理标准化、规范化，使不规范操作因素对实验结 果造成的影响减至最小。2适用范围：乙型肝炎病毒核酸提取、解尿支原体核酸提取、沙眼 衣原体核酸提取、HP酸提取、HC股酸提取、结核杆菌核酸提取、 淋球菌核酸提取。3操作人：李成庭、李丽蒙、高子文 李华娇 张国华4标准操作程序4.1 乙型肝炎病毒（DNA&清）1）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将离心管依次编号。2）取出1.5ml离心管，对应标本编号，置于

2、离心管架上。3）将移液器调到70 H l,先混匀DNAI取液，再吸取70 口加入到已 编号的离心管中。然后吸取30 口血清，加入离心管中混匀，注意每 吸取一份血清标本应更换一次枪头。 处理全部标本，然后将离心管插 到金属浴孔内，100 c加热10分钟。4）裂解完成后将离心管取出，然后10000rpm离心5分钟，取上清液 20 口加样上机。5）收拾台面至准备状态。4.2 CT、UU NGH DNA（分泌物）1）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和离心管依次编号。2）双手换上新手套，取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上3）向有棉拭子的离心管中加入 2ml无菌生理盐水，振荡混匀

3、，将混悬液用移液器吸取1.0ml加入到已编号的离心管中。10000rpm离心5分钟，弃上清液，留取沉淀加50微升DNAI取液混匀，金属浴100c加热10分钟。4）裂解完成后取出离心管，然后10000rpm离心5分钟，取上清液2加样上机。5）收拾台面至准备状态。4.3 结核杆菌（DNA痰液、胸腹水等）1）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和离心管依次编号。2）双手换上新手套，取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上。3）用移液器吸取4倍体积4%NaO副痰液容器，液化30分钟，用移50U1DNA液器调吸取1ml加入到已编号的离心管中，然后 10000rpm离心5分钟，弃上清，留取

4、沉淀，用无菌生理盐水洗涤两次，沉淀加 提取液，充分震荡混匀。胸腹水、脑脊液直接混匀后，用移液器调吸 取1ml加入到已编号的离心管中，然后 10000rpm离心5分钟，弃上清，留取沉淀，力口 50U1DNA提取液，充分震荡混匀。然后将离心管插到金属浴孔内，100 c加热10分钟。4）裂解完成后将离心管取出，然后10000rpm离心5分钟，取上清液 2 口加样上机。5）收拾台面至准备状态4.4 丙型肝炎病毒RNA（血清）1）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将离心管依次编号。2）取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上.3）1.5ml无菌管加入50ul蛋白酶 Q200ul血清-200ul

5、裂解液混匀72c加热10min （同时将洗脱液72c预热）-加入250ul无水乙醇一将混合液全部吸至离心柱 12000rpm/1min-将离心柱装在新的 收集管中一加500ul抑制物去除液12000rpm/1min-将离心柱装在新的收集管中一加500ul去离子液12000rpm/1min-将离心柱装在新的收集管中一再加 500ul去离子液 12000rpm/4min 7将离心柱装在1.5ml的离心管中，开盖72C/2minf在离心柱正上方加入 72c预热 的洗脱液35ul,盖盖14000rpm/1min,离心管内即病毒核酸溶液，最好 立即使用，如需保存，置-20 C。注：配试剂蛋白酶K+1.3

6、75ml洗脱液，混匀，-20 C保存CarrierRNA+110ul内标液混匀，-20 C保存去离子浓缩液+44ml无水乙醇裂解工作液:1人份病毒裂解液200ul+ CarrierRNA4ul,现用现配（根 据标本数依次增加）。PCR式剂HC唬应液A-2ul, HCV5应液B-3ul,HCV反应液C-25ul混 匀（根据标本数依次增加）。4.5乳头瘤病毒DNA（宫颈样本）1） 双手戴上手套，从冰箱取出标本，将离心管依次编号后。2）取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上.3）向有样本刷的离心管中加入2ml无菌生理盐水，振荡混匀，将 混悬液用移液器吸取1.0ml加入到已编号的离心管中。10000rpm离 心5分钟，弃上清液，留取沉淀加 50微升DNAI取液混匀，金属浴 100 c加