赤小豆总黄酮分光光度分析方法建立及全国不同产地药材含量测定

1、赤小豆总黄酮分光光度分析方法建立及全国不同产地药材含量测定         11-04-23 15:39:00     编辑：studa20                   作者：卫莹芳，闫婕，王化东，郭山山【摘要】  目的建立一种测定赤小豆中总黄酮含量的方法，为赤小豆的质量控制提供科

2、学依据。方法以芦丁为对照品，亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定赤小豆总黄酮含量。结果线性方程为A=11.402C-0.004 9，相关系数r=0.999 9，平均加样回收率为100.55%，RSD为1.36%(n=6)。对全国11个省的37个不同产地的药材中总黄酮含量进行了测定，赤豆含量为0.76%1.31%，赤小豆含量为0.84%1. 30%。结论该测定方法准确，重复性好，可用于赤小豆药材中总黄酮的含量测定。 【关键词】  赤小豆; 赤豆; 总黄酮; 芦丁; 分光光度法Abstract：ObjectiveTo develop a UV-VIS analysis method for the

3、 determination of total flavonoids in adzuki bean，in order to provide a scientific basis for the quality control of adzuki bean. MethodsWith rutin as standard sample, sodium nitrite - aluminum nitrate colorimetric method was used to determine the content of total flavonoids in adzuki bean.ResultsThe

4、 calibration curve of rutin was A=11.402C-0.004 9, r=0.999 9, and the average recovery was 100.55%,with RSD of 1.36%(n=6). The content range of total flavonoids in Phaseolus angularis was from 0.76% to 1.31%, and content range in P. calcaratus was from 0.84% to 1.30%.ConclusionThis detemination meth

5、od is practical，reproducible and can be used for evaluating the quality of adzuki bean.Key words： Adzuki bean; Total flavonoids; Rutin; UV-VIS spectrophotometry赤小豆为豆科植物赤小豆Vigna umbeuata Ohwi et Ohashi或赤豆Vigna angularis Ohwi et Ohashi的干燥成熟种子，具有利水消肿，解毒排脓的功能1。赤小豆既是常用中药，又是我国广泛食用的豆类。中国的赤小豆资源极其丰富，是产量最多，出口

6、量最大的国家。赤小豆始载于神农本草经，列为中品，其后历代本草、医方亦多有记载。现代药理研究表明，赤小豆具有抗氧化、增强免疫、抗菌、雌激素样作用等药理作用，广泛应用于临床治疗急性肾炎、肝硬化腹水、水痘、腮腺炎、炎性外痔、皮肤病等2。在中药材安全性被日益关注的今天，其药食同源的优点使其备受青睐。赤小豆主要含有五环三萜皂苷类、黄酮类、鞣质等化合物。其黄酮类化合物具有较强的体外抗氧化作用，对Fe2+导致的大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用，是预防和治疗肿瘤、肝病等疾病的有效成分3。中国药典现行版收载赤小豆质量标准极不完善，缺乏内在质量量化指标。本文用亚硝酸钠-硝酸铝显色法建立赤小豆总黄酮含测方法，并对

7、全国11省37个产地的赤豆、赤小豆总黄酮含量进行了测定，为完善制定赤小豆质量标准奠定基础。1 仪器与材料1.1 材料赤豆药材29份，赤小豆药材8份，由成都中医药大学闫婕、郭山山、王化东等自采或购于全国11个省区，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为豆科植物赤豆Vigna angularis Ohwi et Ohashi或赤小豆Vigna umbeuata Ohwi et Ohashi的干燥成熟种子。1.2 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)，KQ-3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BP121S

8、电子天平(万分之一 Startorius德国赛多利斯股份公司)，BP211D电子天平(十万分之一 Startorius德国赛多利斯股份公司)。1.3 试药芦丁对照品(批号：100080-200707，购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用);其他试剂均为市售分析纯。2 方法与结果2.1 显色方法及测定波长的选择精密吸取芦丁对照品溶液和供试品溶液适量，用亚硝酸钠-硝酸铝显色法进行显色，以空白试剂为对照，于200800 nm波长范围内进行扫描，在500nm处有最大吸收，故选500 nm为测定波长。见图1。2.2 对照品溶液的配制取在120干燥至恒重的芦丁对照品25 mg，精密称定，置50 ml量

9、瓶中，加70%乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取20 ml，置50 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得每毫升中含无水芦丁0.2 mg的芦丁对照品标准溶液。2.3 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml，分别置25 ml量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，在500 nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，浓度C(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程为A=1

10、1.402C-0.004 9，r=0.999 9，芦丁在0.008 1840.049 104 mg/ml浓度范围内，吸光度与浓度呈良好线性关系。见图2。图1 赤豆最大吸收波长光谱图图2 芦丁标准溶液标准曲线2.4 精密度实验精密吸取芦丁对照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，按照“2.3”项下方法显色测定吸光度。测定结果的RSD为0.98%，仪器的精密度较好。2.5 稳定性实验精密吸取芦丁对照品溶液适量于具塞试管中，按照“2.3”项下方法显色，显色后放置5，10，15，30，45，60，90，120 min后，吸光度分别为0.487，0.486，0.484，0.483，0.480，0.479，0

11、.475，0.472。结果表明该显色反应在5120 min内较稳定。2.6 重复性实验取同一批赤小豆样品约1.0 g，平行6份，精密称定，按照“2.3”项下方法显色测定吸光度。6次重复试验的测定结果平均值为0.630，RSD为1.39%，该方法有较好的重复性。2.7 加样回收率实验精密称取芦丁对照品25.03 mg，用70%乙醇定容于50 ml量瓶中备用。称取已知含量的赤豆粉末0.5g，平行6份，精密称定，精确加入新制备的对照品溶液5 ml，混匀，加入70%乙醇35 ml，水浴回流1.5 h，滤过，滤液转移置50 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，精密吸取5 ml至25 ml量瓶中，按照“2.3”项下方法显色测定吸光度。结果见表1。平均加样回收率为100.55%，RSD为1.36%(n=6)。表1 加样回收率实验结果2.8 供试品溶液制备方法的选择2.8.1 提取溶