香樟树叶提取物的抗氧化性能研究

1、香樟树叶提取物的抗氧化性能研究*周红丽 张学梅（红河学院理学院2003级化学教育A 班 蒙自661100）摘要：本文以香樟树叶为原料，采用不同的化学方法提取它的主要成分，并进行抗氧化性研究。研究的结果表明，用无水乙醇作提取剂提取的香樟树叶主要成分具有清除OH 的能力, 且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除OH 能力相差不大，即用无水乙醇作提取剂提取的主要成分具有很好的抗氧化性能。而用70%的乙醇和水作提取剂提取的香樟树叶主要成分没有清除OH 的能力，反而还具有一定的氧化性。这说明，用不同的提取剂提取的香樟树叶的主要成分是不同的，从而导致其抗氧化性能也不同。关键词：香樟树叶、羟自由基、抗氧化、分

2、光光度法樟树（Cinnamomum camphora）是一种常绿1.1仪器 乔木，生长在亚洲、大洋洲的暖温带和亚热带地 索氏提取器、电子天平（上海精科天平）、1区。别名香樟、油樟、樟木，属于药用植物。7200型分光光度计（上海龙尼科仪器有限公司）本草拾遗记载：味辛、温、无毒；广西中等。2药志记载：味辛、性温、有小毒。樟树从根1.2材料 到叶均含有樟油和樟脑，种子可榨油，是制肥皂 香樟树叶，采自红河学院校园。邻二氮菲、的良好原料。樟树的叶、枝、根、茎、花、果都磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、30%过氧13富含芳香油，是提炼天然香料的优良树种。 化氢溶液、抗坏血酸等均为国产分析纯。据报道，樟树叶

3、的水蒸气蒸馏提取物的主要2实验方法 化学成分有十二烷酸、肉豆蔻酸、十一烷酸、棕2.1试剂的配制 榈酸、酮、酯、醛、按叶油素、芳樟醇、樟脑、1.000g/L邻二氮菲溶液的配制：称取45-松油醇、异橙花叔醇等。但对樟叶的抗氧0.1000g 邻二氮菲于小烧杯中，加水并加热溶解8化性能研究还处于一个空白。 （或加乙醇溶解），然后加水定容至100mL 。生理情况下，人体有1%5%的分子氧通过0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4缓冲溶液的配多种途径产生氧自由基，生物体内产生的自由基制：称取0.8505g 磷酸二氢钾和0.8872g 磷酸氢主要是O 2与OH 及其活性衍生物。过多的氧自

4、由二钠溶于水，并加水定容至250mL 。 基通过损伤生物大分子，破坏细胞的结构和功1.000g/LFeSO4溶液的配制：称取0.1000g 能，促使疾病的发生与发展。研究发现，氧自由硫酸亚铁溶于水，并加水定容至100mL ，然后加基与衰老、肿瘤、炎症、动脉硬化、肝和肺疾病入几根铁钉。 等发生密切相关。抗氧化剂由于能清除人体的这2%过氧化氢溶液的配制：用量筒量取些自由基而具有预防癌症、心血管疾病等疾病以6.7mL30g/L的H 2O 2用水稀释至100mL 。 及抗衰老的作用。而合成的抗氧化剂如BHA 等可0.0030g/mL抗坏血酸溶液的配制：称取导致DNA 的损伤及动物恶性肿瘤的发生，其安全

5、0.3000g 抗坏血酸溶解于水中，并加水定容至性受到质疑，因此高效、安全的天然抗氧化剂的100mL 。67提取及其应用无疑具有重要的意义。 2.2香樟树叶提取液的制备我国南方樟树资源丰富，以此为原料研制生用不同的提取剂（无水乙醇、70%乙醇、蒸产的成本较低，可创造经济及社会效益。本文利馏水）来加热回流提取和常温浸泡提取香樟树叶用邻二氮菲分光光度法对香樟树叶的不同溶剂中的抗氧化成分。 提取物进行抗氧化性能研究并与抗坏血酸的抗2.2.1用无水乙醇作提取剂加热回流提取 氧化性能作对比，为香樟树的进一步开发利用奠把采集来的香樟树叶用清水洗后，再用蒸馏定基础。 水洗净，然后晾干，把它剪为1cm 左右的

6、碎片，* 基金项目：红河学院孵化基金称取10.0g 放入索氏提取器的滤纸中，在圆底烧作者简介：周红丽 红河学院化学教育专业03级毕业生瓶中加入110.0mL 无水乙醇，在电炉上隔着石棉指导教师：郭亚力 教授网加热回流提取100min ，倒出提取液，再加入同样的溶剂，进行第二次提取。两次的提取液合3并为A 液，备用。2.2.2 用70%乙醇作提取剂加热回流提取方法与用无水乙醇作提取剂加热回流提取的方法相同，只是把提取剂无水乙醇改为70%的乙醇即可。所得提取液为B 液。2.2.3用蒸馏水作提取剂加热回流提取方法与用无水乙醇作提取剂加热回流提取的方法相同，只是把提取剂无水乙醇改为蒸馏水即可。所得提取

7、液为C 液。2.2.4用70%乙醇作提取剂常温浸泡提取把采集来的香樟树叶用清水洗后，再用蒸馏水洗净，然后晾干，把它剪为1cm 左右的碎片，称取10.0g 放入圆底烧瓶中，加入110.0mL70%乙醇浸泡4天，过滤后得滤液D ，备用。 2.2.5用蒸馏水作提取剂常温浸泡提取方法与用70%乙醇作提取剂常温浸泡提取的方法相同，只是把浸取剂70%乙醇改为蒸馏水即可。所得提取液为E 液。2.3邻二氮菲分光光度法测定抗氧化剂的抗羟基自由基性能2+2+采用邻二氮菲Fe 氧化法测定H 2O 2/Fe产2+生的OH ，H 2O 2/Fe体系通过Fenton 反应产生羟2+自由基，邻二氮菲Fe 水溶液可被羟自由基

8、氧3+2+化为邻二氮菲Fe ，从而使邻二氮菲Fe 呈现的红色变浅，在510nm 处的最大吸收峰消失，当体系中存在OH 清除剂时，可以使A 510降低，以69A 510变化反映抗氧化剂抗羟基自由基性能。并定义抗氧化剂对OH 清除率为：10K=1-(Ai -A j /AC ×100%式中：A i 加入2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4缓冲溶液、不同剂量的抗氧化剂溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%过氧化氢溶液反应10min 后的吸光度。A j 只加入不同剂量的抗氧化剂溶液和

9、相应的提取剂的吸光度。A C 未加入抗氧化剂，只加入 2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH 2PO 4-Na 2HPO 4缓冲溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%过氧化氢溶液反应10min 后的吸光度。2.3.1 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能测定依次加入2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液，3.00mL 0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4缓冲溶液，分别加入1.00mL 、2.00mL 、3.00mL 、4.00mL 、5.00mL 、6.00mL 、7.00mL 、8.00mL

10、 0.0030g/mL抗坏血酸溶液，然后加入2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液，立即混匀，最后加3.00mL 2%过氧化氢溶液，分别加蒸馏水和70%乙醇定容为50 mL ，10min 后于510nm 处测定其吸光度A i 。再根据公式分别测定吸光度A j 和A C 。2.3.2 A液的抗羟基自由基性能测定用95%的乙醇作稀释剂，把A 液配制成0.0030g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用95%的乙醇。2.3.3 B液的抗羟基自由基性能测定用70%的乙醇作稀释剂，把B 液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用70%的乙醇。2.3.4 C液的

11、抗羟基自由基性能测定用蒸馏水作稀释剂，把提取液C 液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用蒸馏水。2.3.5 D液的抗羟基自由基性能测定用70%的乙醇作稀释剂，把D 液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用70%的乙醇。2.3.6 E液的抗羟基自由基性能测定用蒸馏水作稀释剂，把提取液E 液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用蒸馏水。 3结果与讨论 3.1结果把以上抗氧化剂抗羟基自由基性能的测定所得的数据和根据公式计算出抗氧化剂对OH 清除率的结果列表如下：3.1.1对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加水

12、定容）测定结果如表1表1 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加水定容）Table 1 check sample antiscorbutic acid anti- hydroxyl free radical performance(wateing constant volume3.1.2对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加70%乙醇定容）测定结果如表2表2 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加70%乙醇定容）3.1.3提取液A 液抗羟基自由基性能测定结果如表3表3 A液抗羟基自由基性能（略） 3.1.4提取液B 液抗羟基自由基性能测定结果如表4表4 B液抗羟基自由基性能（略） 3.1.5提取液C

13、 液抗羟基自由基性能测定结果如表5表5 C液抗羟基自由基性能（略） 3.1.6提取液D 液抗羟基自由基性能测定结果如表6表6 D液抗羟基自由基性能（略） 3.1.7提取液E 液抗羟基自由基性能测定结果如表7表7 E液抗羟基自由基性能（略） 把前三个表中的结果绘制在下面的图1中为： 清除率%剂量 mL图1 (Chart 1 把后四个表中的结果绘制在下面的图2中为：清除率%剂量 mL图2 (Chart 23.2讨论从图1中可以看出，三条抗氧化曲线都呈上升的趋势，即它们都有抗氧化性能；对照样品抗坏血酸随着定容剂的不同，其抗羟基自由基的性能也不同，用70%乙醇比用蒸馏水作定容剂的抗氧化性能强；用无水乙

14、醇作提取剂提取的物质具有清除OH 的能力, 清除率最高可达91%左右，且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除OH 能力相差不大。从图2中可以看出，四条抗氧化曲线都呈下降趋势，与对照样品抗坏血酸的抗氧化性曲线刚好相反，即它们都不具有抗氧化性，反而还具有一定的氧化性；再从B 与D ，C 与E 的抗氧化曲线对比可以看出，即使它们的提取温度不同，但它们的氧化性能相差不大。综上所述，采用不同的提取剂提取的物质的抗氧化性能不同，用无水乙醇作提取剂提取的物质具有清除OH 的能力, 清除率最高可达91%左右，且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除OH 能力相差不大。而用70%的乙醇和水作提取剂提取的物质没有清除O

15、H 的能力，反而还具有一定的氧化性。且香樟树叶抗氧化成分的提取受温度的影响不大。已经有人研究过樟树叶的乙醇提取物因具11有抗菌作用而成为很好的天然食品防腐剂。本文研究的樟树叶的无水乙醇提取物具有很好的抗氧化性能，因此可进一步实验应用于食品的生产、食品原料的保藏、抗衰老化妆品的生产和药业的生产等等。在实验的过程中，要注意不要使硫酸亚铁失2+效，因为硫酸亚铁溶液中的Fe 很容易被氧化成3+Fe ，从而最好是现配现用。配制好的过氧化氢溶液要保存在棕色试剂瓶中，以防见光分解。在配制香樟树叶的提取液时，首先用量筒量取10.0mL 原提取液于小烧杯中，然后把它放在电炉上蒸干，再冷却后称其重减去小烧杯的质量

16、除以10就得到1mL 原提取液中含有多少克提取物质，再把它配制成所需浓度的溶液即可。在用邻二氮菲分光光度法测定香樟树叶提取液的抗氧化性能时，经过实验和资料知，邻二2+氮菲Fe 在510nm 处有最大吸收峰值，且显色2+2+最关键的地方是Fe 的量必须过量，因为Fe 在反应中，即充当催化剂，又充当配位剂和还原剂。加入PH 为7.4的磷酸盐缓冲溶液是为了保证加入抗氧化剂后体系PH 值基本不变，因为在此PH2+值下，Fe 与邻二氮菲能形成稳定的红色配合物。2+实验中选择反应时间为10min ，是因为Fe 与邻二氮菲反应很快，即使测定的吸光度还在变化，但我们测定的时间相差不大，所以所得实验数据是可靠的

17、。在测定A 液的抗氧化性能时，因为用水定容，溶解于乙醇而不溶于水的物质会沉淀出来，从而影响测定结果，所以用95%的乙醇定容。以后的都用相应的提取剂作定容剂。在测定0.0030g/mL B液的抗氧化性能时，因所测吸光度大于1，知所配制的提取液浓度过高。所以把B 液配制成0.0010g/mL的溶液，在测定。以后的提取液都配制成浓度为0.0010 g/mL的溶液。至于表中出现的实验数据误差，是由于人为因素和仪器存在的误差造成的，但我们已把误差降到了最小。当然，由于时间有限，我们只是研究了用乙醇作提取剂提取它的主要成分并进行抗羟基自由基性能测定，而用其他的提取剂提取并测定它对其他自由基如氧自由基、芳香

18、基自由基等的清除作用还待进一步研究。感谢：在此次实验和撰写论文的过程中，我要衷心地感谢系上为我们提供的良好的实验条件以及系领导和各位老师的帮助，尤其是我们的指导教师郭亚力老师的悉心指导和帮助，同时还要感谢我的实验伙伴张学梅同学。参考文献1Zhang SQ(张受谦. Chemical Engineering Handbook(IM. Ji nan:Shandong Science&Technology Press,1987.2江苏医学院. 中药大辞典M.上海人民出版社，1979. 3刘咏，张宗贤. 香樟叶出油最佳提取条件的实验研究J.天然产物研究与开发，2005，17（2）：203-20

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21、00Abstract : This article take the Cinnamomum camphora leaf as a raw material, uses the different chemistry method to withdraw its principal constituent, and conducts the anti- oxidized research. The research result indicated that, does with the absolute ethyl alcohol withdraws the Cinnamomum camphora leaf principal constituent which the medicinal preparation withdraws to have elimination OH the ability,Also is not big with the similar condition similarly hereinafter density antiscorbutic acid elimination OH ability di