拒霜叶中总黄酮的提取工艺研究

1、拒霜叶中总黄酮的提取工艺研究樊俊红 安彩贤(西安交通大学药学院 陕西 西安 710061摘要 目的研究拒霜叶中总黄酮的最佳提取工艺方法采用水煎醇沉法提取拒霜叶中的总黄酮并用L934正交实验法对其提取工艺进行优选结果最佳工艺条件为16倍量水煎煮3次每次0.5h然后浓缩至相对密度为1.1560加乙醇使含醇量达60%冷藏24h结论此法操作简便适合大工业生产 关键词拒霜叶; 芦丁; 总黄酮; 正交实验Study on Extraction Process of Leaves of Hibiscus Mutabilis L.FANJUNhong, ANCaixian(College of Pharmac

2、y,Xian Jiaotong University,Xian,710061,China) Abstract: Objective: To study the optimum extraction condition of flavonoids from the leaves of Hibiscus Mutabilis L. Methods: The decoction and alcohol deposit method was used to extract flavonoids from the leaves of Hibiscus Mutabilis L. The orthogonal

3、 design L934was used to study the optimum extraction condition. Results: The optimum extraction process was as follows extracted with 16 times the amount of the solvent volume water for 3 times and with each time for half of hour. Then the liquids were condensed until the relative density was 1.1560

4、and the alcohol added made the alcohol concentration be 60% in the liquids. Finally the liquids were disposed 24 hours under the cold storage. Conclusion: The method was operated simply and fitted to produce by the industry.Keywords: leaves of Hibiscus Mutabilis L.; rutinum; flavonoid; orthogonal de

5、sign 拒霜叶为锦葵科malvaceae植物木芙蓉Hibiscus Mutabilis L.的干燥叶其味辛平无毒具有凉血解毒消肿止痛等功效据文献报道拒霜叶主要含黄酮苷酚类氨基酸还原糖等其叶的煎剂对金黄色葡萄球菌伤寒杆菌等均有抑制作用还具有明显的抗炎活性1为探索最佳提取工艺保证有效成分的提取率且适合大生产实验以主要成分总黄酮含量为指标用正交实验设计优选出最佳提取工艺1 仪器与试药SP-2000UV型可见-紫外分光光度计上海光谱仪器有限公司旋转蒸发器RE-52上海亚荣生化仪器厂拒霜叶(购自陕西省药材公司)芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供所用试剂均为分析纯2 方法与结果2.1.样品的提取分别

6、称取50g拒霜叶粗粉9份按表1表2选择的因素和水平进行水煎提取水煎液静置过夜次日过滤滤液浓缩干燥称重从9份干膏中分别精密称取约50mg样品置于25ml量瓶中加甲醇使其溶解作为供试品溶液1再称取450g拒霜叶粗粉根据水提的最佳工艺条件提取提取液平均分成9等份静置过夜次日过滤滤液按表4表5选择的因素和水平进行浓缩醇沉然后过滤滤液进行减压浓缩干燥称重从9份干膏中分别精密称取约50mg样品置于25ml量瓶中加甲醇使其溶解作为供试品溶液22.2总黄酮的测定2.2.1.标准曲线的制备精密称取芦丁对照品约10mg置于50ml量瓶中加甲醇溶解至刻度摇匀即得对照品贮备溶液分别精密吸取0.51.52.53.54.

7、5和5.5ml至25ml量瓶中各加5%NaNO3溶液1ml摇匀放置6min然后加10%AlCl3溶液1ml摇匀放置6min加NaOH试液10ml最后加水至刻度摇匀放置15min测定以同法配制空白对照品在波长为500nm处检测测定吸光度值得回归方程A=11.514C-0.0121 r=0.99982.2.2.样品的测定分别取供试品溶液12 各5.0ml至25ml量瓶中按标准曲线项下自各加5%NaNO3溶液起依法测定吸光度值按回归方程计算样品中总黄酮的含量2.3.正交实验及结果2.3.1.水煎提取 根据初步预实验的结果拟订3种因素每种因素选择3个水平按L934正交实验设计表对拒霜叶进行水煎煮实验结

8、果见表123表1 因素水平表 因 素 水平 加水倍数倍 煎煮时间h 煎煮次数1 14 0.5 12 15 1.0 23 16 1.5 3表2 正交试验结果L9(34)实验号码 A B C 干膏量g 总黄酮含量%药材1 1 1 1 6.6 0.3712 1 2 2 6.8 0.3783 1 3 3 7.2 0.3404 2 1 2 7.4 0.4875 2 2 3 8.4 0.3286 2 3 1 5.3 0.1907 3 1 3 9.1 0.6068 3 2 1 7.1 0.2869 3 3 2 6.9 0.321k1 6.9 7.7 6.3k2 7.0 7.4 7.0k3 7.7 6.5 8

9、.2R 0.8 1.2 1.9k'1 0.363 0.488 0.282k'2 0.335 0.331 0.395k'3 0.404 0.284 0.425 R 0.069 0.204 0.143 表3 方差分析表(SAS)项目 Soure DF AnovaSS Mean Square F Value ProbA 2 1.1667 0.5834 13.4734 P0.1B 2 2.5267 1.2634 29.1778 P0.1 C 2 5.5400 2.7700 63.9723P0.1A 2 0.0073 0.0037 1.8500 P0.1 总黄酮B 2 0.068

10、8 0.0344 17.2000 P0.1 含量 C 2 0.0339 0.0170 8.5000 P0.1由表23看出影响出膏量的主次因素为煎煮次数>煎煮时间>加水倍数影响总黄酮含量的主次因素为煎煮时间>煎煮次数>加水倍数最佳搭配是A3B1C3即用16倍量水煎煮3次每次0.5h2.3.2.验证实验 称取拒霜叶50g共3份用上述水煎的最佳提取工艺进行提取滤液浓缩干燥检测结果见表4表4 验证试验结果总黄酮含量 干膏量 干膏中总黄酮含量编号 药材量g -1g mgg g/100g药材 干 膏 量1 50 9.0 33.075 0.595 2 50 9.2 33.587 0.

11、618 3 50 9.1 33.721 0.614结果分析按所确定的最佳水煎条件制备三批样品其中总黄酮含量比正交表中最高含量略高或相当表明此最佳条件可行2.3.3.醇沉实验 根据初步预实验的结果拟订3种因素每种因素选择3个水平按L934正交实验设计表对水提取物进行醇沉实验结果见表567 表5 因素水平表 因 素 水平 相对密度 醇沉浓度% 冷藏时间h1 1.10 60 122 1.15 70 243 1.20 80 36表6 正交试验结果L9(34)实验号码 D E F 干膏量g 总黄酮含量%药材1 1 1 1 3.7 0.4712 1 2 2 3.5 0.5383 1 3 3 3.1 0.4

12、474 2 1 2 4.0 0.6285 2 2 3 3.4 0.5326 2 3 1 3.2 0.4997 3 1 3 4.1 0.5358 3 2 1 3.6 0.5319 3 3 2 3.3 0.461k1 3.4 3.9 3.5k2 3.5 3.5 3.6k3 3.7 3.2 3.5R 0.3 0.7 0.1k'1 0.485 0.545 0.500k'2 0.553 0.533 0.542k'3 0.509 0.469 0.505 R 0.068 0.076 0.042表7 方差分析表SAS项目 Soure DF AnovaSS Mean Square F V

13、alue ProbD 2 0.0822 0.0411 2.834 P0.1 干膏 E 2 0.8155 0.4078 28.12 P0.1 量 F 2 0.0155 0.0078 0.5379 P0.1D 2 0.0071 0.0036 2.000 P0.1 总黄酮E 2 0.0101 0.0050 2.778 P0.1 含量 F 2 0.0032 0.0016 0.8889 P0.1由表6表7可以看出影响出膏量的主次因素为醇沉浓度>相对密度>冷藏时间搭配为D1E3F1以干膏量少为好或D1E3F3影响总黄酮含量的主次因素为醇沉浓度> 相对密度>冷藏时间搭配为D2E1F2干膏量与含量之间的搭配完全不一致,考虑到有效成分的含量并参照正交表中4号的实验结果选择最加乙醇使含醇量达60%优搭配为D2E1F2即药液浓缩至相对密度为1.1560冷藏24h 3 讨论 拒霜叶所含的黄酮类化合物一般以苷的形式存在易溶于水甲醇乙醇等强极性溶剂中由于拒霜叶的水提取物有较强的抗病毒作用因此采用水提的方法加入多倍量浓醇其目的是沉淀除去蛋白质多糖类等