广西传统中药一点红总黄酮含量分析(一)

1、广西传统中药一点红总黄酮含量分析(一)作者：周吴萍，韦媛媛，李军生，陈晓伟，阎柳娟【摘要】 目的建立一点红总黄酮的含量测定方法，考察一点红原药材质量的优劣。方法利用正交设计法考察最佳提取条件，采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照品，于510 nm波长处测定总黄酮含量。结果芦丁在0.031 20.083 2 mg/ml范围内呈良好线性关系(R2=0.998 4)，平均加样回收率为96.8%，RSD=1.21%（n=6）。3批样品总黄酮平均含量为9.918mg/g。结论该法重复性较好，对仪器要求不高，准确可靠，可用于一点红质量控制。 【关键词】 一点红；总黄酮；芦丁；含量测定Abstract：O

2、bjectiveTo establish a method for determination of flavone content in Emilia sonchifolia.MethodsThe best experimental conditions were optimized through orthogonal design test，and the conteat of flavones was determined at the wavelength of 510 nm by UV-visible spectrophotometry with rutin as a standa

3、rd. ResultsThe calibration curve showed good linearity in the range of 0.03120.0832 mg/ml( R2=0.9984), the average recovery was 96.8%,RSD = 1.21%（n=6）.The average content of flavones in the samples was 9.918 mg/g. ConclusionThe method is simple, accurate, reproducible and can be used for quality con

4、trol of Emilia sonchifolia.Key words：Emilia sonchifolia； Total flavones； Rutin； Content determination一点红是广西传统中草药，为菊科植物一点红Emilia sonchifolia (Linn.) DC.的干燥全草，具有清热解毒、消炎、利尿的功效1 。一点红主要含有黄酮类2，生物碱类1，植物甾醇、脂肪酸3等化学成分，是妇科临床常用药广西特产中成药花红片的主要原料药4。国内外文献仅在其临床应用和药理作用5，6方面有少部分报道，在原料药的质量控制方面未见有相关报道。由于其具体化学活性成分尚未明确，对于

5、原料药材的鉴定和质量检测也只能通过经验和外观品质进行简单的验证。据报道5，黄酮类物质是一点红中抗氧化和消炎的活性成分，故通过测定一点红总黄酮含量来控制原料药质量，对确保成药疗效有重要的意义。1 仪器与试药1.1 仪器UV2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司)；AL104型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；B2200S型超声波发声仪(必能信上海有限公司)。1.2 试剂芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；石油醚、甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿、乙醚（市售分析纯）；10%Al(NO3)3；5%NaNO2；4%NaOH；广西一点红干燥品（广西花红药业提供）。2 方法与结果2.1 对照品

6、溶液制备精密称取芦丁对照品5.2 mg 置25 ml容量瓶中，加60%乙醇溶解至刻度，摇匀，即得浓度为0.208 mg/ml芦丁对照品贮备液。2.2 检测波长的选择分别取芦丁对照品液、一点红总黄酮样品液适量，显色剂显色后，以未加样液的显色层作为参比在200 800 nm范围内进行光谱扫描，结果显示，在可见光区芦丁对照品液和一点红样品液在510 nm处较大吸收，故选择510 nm为测定波长。2.3 标准曲线制备精密量取芦丁对照品溶液0.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，分别加入5%NaNO2 0.75 ml,摇匀静置5min，加入10%Al(NO

7、3)3 0.75 ml，摇匀静置5 min，加入4% NaOH溶液4 ml， 60乙醇稀释至刻度，摇匀，放置5 min后，以第1管作空白对照，在510 nm处测吸光度。以芦丁对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明芦丁在0.031 20.083 2 mg/ml范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。得回归方程为Y=12.305 0X-0.000 3，R2=0.998 4(n6)。2.4 一点红提取条件的优化经过单因素预实验确定考察因素的大概范围，选择溶媒用量、药材粒度、提取时间、溶媒浓度为考察因素,按照正交实验表安排实验（见表1），正交实验数据及其直观分析结果见表2。表1 因素水

8、平（略）表2 正交实验结果（略）从实验的极差结果可知，各个因素对总黄酮提取量的影响程度大小依次为：ACBD，直观分析，较优水平组合为A3B3C3D1。因此，本实验选A3B3C3D1为最佳提取方法，即提取方案为选用细粉，超声提取时间60min，提取溶媒为30%乙醇，提取溶媒量为45ml。2.5 精密度实验吸取芦丁对照品溶液，按显色条件显色后，于510 nm处测其吸光度，连续测定5次，RSD= 0.16%（n=5），结果显示仪器精密度良好。2.6 重复性实验取同一批一点红全草粗粉约0.5g，共6份，精密称定，按照样品测定项下操作，测定一点红中总黄酮含量，其RSD0.56%(n6)，结果说明方法重复

9、性较好。2.7 稳定性实验取对照品溶液和样品溶液显色后于0，1，2，3，4，5 h进行吸光度测定，对照品溶液吸光度的RSD=1.41%(n=6)，样品溶液吸光度的RSD=1.29%（n=6）。结果显示对照品和样品溶液显色后在5 h内测定稳定。2.8 加样回收率实验取已知含量的同一批一点红全草粗粉约0.25 g，共6份，分别精密加入芦丁对照品液(0.85 mg/ml)适量，混匀蒸干，按照样品测定项下操作测定，结果平均加样回收率为96.8%，RSD1.21%(n6)。2.9 样品测定取3批一点红全草粗粉各 0.5 g，分别置100 ml具塞锥形瓶中，加入石油醚30 ml超声提取15 min，弃去石

10、油醚，加入30%乙醇45 ml超声提取60 min，滤过，按上述条件显色，用30%乙醇定容到100 ml，摇匀静置5 min，以未加样液的显色层作为参比，于510 nm处测吸光度。结果见表3。表3 样品测定结果（略）3 讨论实验中曾对不同提取方法进行提取效果对比，结果冷浸提取、索氏提取和回流提取效果不如超声提取，且超声提取操作简单。经过几种提取溶剂对比考察，选用总黄酮常用提取溶剂乙醇进行提取，效果较好。实验过程中，叶绿素溶出对测定影响较大，故用石油醚提取去除叶绿素。选择几个影响因素进行正交实验设计，最佳提取方案经过3批样品的测定结果进行验证，数据表明比其他组合提取率高。广西花红药业独家生产的中

11、草药制剂花红片是临床治疗妇女盆腔炎、附件炎等妇科炎症的常用药，一点红作为主要的原料药，其具体化学成分并未明确，中国药典2005版尚未收录该品种。本实验采用正交设计法对一点红总黄酮提取条件进行了筛选优化，确定最佳提取方法，寻找最适测定波长，建立一套适合的含量测定方法，同时分析了广西3批一点红中总黄酮的含量，为一点红原药材质量检测提供方法参考。【参考文献】1广西壮族自治区革命委员会卫生局.广西本草选编(下册)M.南宁:广西人民出版社,1974:940.2李秀信,王荣花,杨秀萍.一点红黄酮成分的分析及含量测定J.西北植物学报,2003,23(4):671.3高建军,程东亮.一点红化学成分的研究J.中国中药杂志,1993,18(2) :102.4韦飞燕.花红片薄层色谱鉴别研究J.广西中医学院学报,2000,17（1）:65.5B.S Shylesh,J.Padikkala.Antioxidant and anti-inflammatory activity of E