枳实中多甲氧基黄酮类化合物的研究

1、枳实中多甲氧基黄酮类化合物的研究    按内容性质和研究方法的不同可以把论文分为理论性论文、实验性论文、描述性论文和设计性论文.                         作者：韩金旦，王奎武，沈莲清Curiosity killed the cat.  【摘要】  目的研究

2、枳实中的多甲氧基黄酮类化合物。方法对枳实95%乙醇提取物的醋酸乙酯部分和正丁醇部分进行色谱分离，通过核磁共振和质谱分析鉴定其化合物的结构。结果从枳实中分离鉴定出4个多甲氧基黄酮类化学成分，分别为桔皮晶 (Tangeretin，)，蜜桔黄素 (Nobiletin ，)，4', 5, 7, 8-四甲氧基黄酮(4',5,7,8-Tetramethoxyflavone，)，5-降甲基蜜桔黄素( 5-Demethylnobiletin，)。结论，化合物均为首次从枳实中分离得到()。 【关键词】 &#

3、160;枳实;多甲氧基黄酮;化学成分Abstract：ObjectiveTo investigate the chemical constituents of Fructus Aurantii Immaturus.MethodsThe constituents of the EtOAc-solube portion and normal butanol solube portion in the&

4、#160;95% ethanol extract were isolated and purified by means of chromatography.Compounds were identified by 1H-NMR, 13C-NMR and MS.Results Four polymethoxylated flavonoids were isolated 

5、;and identified as Tangeretin (), Nobiletin (), 4', 5, 7, 8-Tetramethoxyflavone () and 5-Demethylnobiletin ().ConclusionCompounds- were isolated from Fructus Aurantii Immaturus for the&#

6、160;first time.Key words： Fructus Aurantii Immaturus;Polymethoxylated flavonoids;Chemical constituents枳实Fructus Aurantii Immaturus是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinesis Osbeck的干燥幼果，具有破气消积、化痰散痞的作用，用于治疗积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、结胸、

7、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症1，主要含挥发油、生物碱(辛弗林、N-甲基酪胺)、黄酮类化合物、维生素C及维生素D等成分2。黄酮类化合物是枳实中的主要有效活性成分，此前的研究多集中在枳实中含有的芸香柚皮苷与柚皮苷、橙皮苷与新橙皮苷等黄酮苷类化合物中37，而对多甲氧基类黄酮化合物(PMFs)的研究较少。近年来有关PMFs抗癌的研究取得了很大进展811，由于PMFs对多种癌细胞有较强的抑制作用，受到国内外的广泛关注。国内外对多甲氧基黄酮类成分的抗癌活性报道越来越多，提示这类成分具有潜在的新药开发价值。为进一步开发利用枳实中的多甲氧基黄酮类成分，作者利用现代色谱和波谱技术对其所含有的此类黄酮进行了分离纯化

8、和结构鉴定，从中得到了4个PMFs类活性成分，分别鉴定为桔皮晶 (Tangeretin，)，蜜桔黄素 (Nobiletin，)，4'，5，7，8-四甲氧基黄酮(4'，5，7，8-Tetramethoxyflavone， Tetramethyl-O -isoscutellarein， )，5-降甲基蜜桔黄素( 5-Demethylnobiletin， )。God sends fortune to fools.  1仪器与材料1.1仪器与试剂X-4 数字显示显微熔点测定仪 (温度计未

9、校正);Nicolet NEXUS-470 型红外光谱仪(溴化钾压片);Bruker 500 AVANCE  型核磁共振仪，内标为TMS (实验所测 1H-NMR和13C-NMR 分别为500，125 MHz);Thermo LCQ FLEET 型电喷雾质谱仪(ESI-MS);柱色谱用硅胶 (青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20 (Pharmaeia 公司);GF254高效薄层板 (烟台汇友硅胶开发有限公司

10、)。其余试剂均为分析纯(医药学/临床医学论文 )。Deeds are fruits; words are but leaves.  1.2材料枳实，由杭州惠松医药公司提供。2方法与结果What I have done is due to patient thought.  2.1提取与分离将枳实10 kg机械粉碎后，用95%的乙醇水溶液回流提取3次，减压蒸馏回收溶剂后得到浸膏1.5 kg，上述浸膏加入2.5 L水，成悬浮液，分别用醋酸乙酯，正丁醇萃取，减压蒸馏回收溶剂，得到醋酸乙酯部分浸膏335 g，正丁醇部分浸膏847g。醋酸乙酯部

11、分浸膏经多次硅胶柱层析，Sephadex LH-20纯化得到化合物桔皮晶()，蜜桔黄素()，4', 5, 7, 8-四甲氧基黄酮()和5-降甲基蜜桔黄素()。2.2结构鉴定分离所得的化合物结构见图1。2.2.1化合物淡黄色针状结晶， mp. 153154。 ESI-MS m/z：373 M+H+;IR (KBr) cm-1：2 948， 2 842， 1 651，1 588，1 512， 1

12、0;462， 1 362， 1 265，1 111， 1 075， 1 016，828;1H-NMR (DMSO-d6) ：7.89 (2H， dd，J=9.0，2.0 Hz， H-2'，6')， 7.03 (2H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3'，5')，6.64 (1H，s，H-3)，4.11，4.03，3.97，3.95，3.89，(each 3H，s

13、，5×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6) ：161.1 (C-2)，106.4 (C-3)，177.3 (C-4)，148.2 (C-5)，143.9 (C-6)，151.2 (C-7)，138.9 (C-8)，147.6 (C-9)，114.6 (C-10)，123.6 (C-1')，127.6 (C-2'，6')，114.3 (C-3?，5?)，162.1 (C-4')，62.1，61.9

14、，61.6，61.5，55.3 (5×OCH3)。以上数据与文献 11 报道的桔皮晶数据基本一致，故该化合物鉴定为桔皮晶(Tangeretin) 。见图1。2.2.2化合物淡黄色针状结晶，mp. 137138。ESI-MS m/z：403M+H+ ，425M+Na+;IR (KBr) cm-1：2 944，2 840，1 588，1 514，1 462，1 365，1 267，1 016，830;1H-NMR

15、0;(DMSO-d6) ：7.59(1H，d，J=8.0 Hz，H-6')，7.49(1H，s，H-2)，7.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.80 (1H，s，H-3)，4.02，3.97，3.87，3.78(each 3H，s， 4×OCH3)，3.84(6H，s，2×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6)：161.3 (C-2)，107.3 (C-3)，176.9 (C-4)，148.6 (C-5)，144.6 (C-6

16、)，152.0 (C-7)，138.7 (C-8)，148.2 (C-9)，115.3 (C-10)，124.2 (C-1)，109.4 (C-2)，150.0 (C-3)，152.2 (C-4)，112.2 (C-5)，119.8 (C-6)，62.3，62.2，62.0，61.9，56.2，56.1 (6×OCH3)。以上数据与文献11报道的蜜桔黄素数据基本一致，故该化合物鉴定为蜜桔黄素(Nobiletin) 。见图1。 论文教育信息网  2

17、.2.3化合物 淡黄色针状结晶，mp. 166 167。ESI-MS m/z： 343M+H+，365 M+Na+;1H-NMR (CDCl3)：7.97 (2H，dd，J=7.0，2.0 Hz，H-2，6)，7.12 (2H，dd，J=7.0，2.0 Hz，H-3，5)，6.68(1H，s，H-8)，6.67(1H，s，H-3)，3.98，3.88，3.85，3.84(each 3H，s，4×OCH3); 13C-NMR (CDCl3)：163

18、.2(C-2)，107.7(C-3)，177.2(C-4)，157.0(C-5)，131.3(C-6)，157.7(C-7)，95.1(C-8)，152.4(C-9)，109.4(C-10)，124.6(C-1)，128.9(C-2，6)，116.0(C-3，5)，160.9 (C-4)，62.4，57.7，57.6，56.9(4×OCH3)。以上数据与文献12报道的Tetramethyl-O-isoscutellarein数据基本一致，故化合物鉴定为4'，5，7，8-四甲氧基黄酮(Tetramethyl-O-isoscutellarein) 。见图1。2

19、.2.4化合物 淡黄色针状晶体，mp. 145146。ESI-MS m/z： 389M+H+，411M+Na+;IR (KBr) cm-1：2 940，1 650，1 514，1 483，1 374，1 145，1 023，835;1H-NMR (DMSO-d6) ：7.62(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，7.49(1H，s，H-2)，7.09(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，6.96(1H，s，H-3)， 4.0

20、2，3.91，3.89，3.85，3.81(each 3H，s，5×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6)：163.9(C-2)，103.9 (C-3)，183.0(C-4)，149.0(C-5)，136.2(C-6)，152.7(C-7)，133.0(C-8)，145.6(C-9)，106.6(C-10)，123.1(C-1)，109.5(C-2)，149.4(C-3)，152.9(C-4)，112.1(C-5)，120.3(C-6)，62.2，62.0，60.9，56.1，56.0(5×OCH3)。以上数据与文献11报道的5-降甲基

21、蜜桔黄素数据基本一致，故该化合物鉴定为5-降甲基蜜桔黄素(5-Demethylnobiletin) 。见图1。图1化合物，和的结构式3结论从中药枳实中分离得到了4 个多甲氧基黄酮类化学成分，分别为桔皮晶 (Tangeretin，)，蜜桔黄素 (Nobiletin，)，4',5,7,8-四甲氧基黄酮(4',5,7,8-Tetramethoxyflavone，)和5-降甲基蜜桔黄素(5-Demethylnobiletin，)。所有化合物均为首次从该中药中分离得到。Still waters have deep bottoms.  【参

22、考文献】  1国家药典委员会.中国药典，部S.北京:化学工业出版社,2005:172.2王文凯, 甘晓兰. 中药枳实研究概况J. 湖南中医药导报, 2003,9(12): 55.3傅国强, 王少军, 钱星文, 等. RP-HPLC法测定枳实药材中橙皮苷含量J. 江西中医学院学报, 2004, 16(2): 62.4彭国平, 牛贺明, 徐丽华. 枳实活性成分的研究J. 南京中医药大学学报, 2001

23、,17(2): 91.5王万能, 全学军, 陆天健, 等. 超声波协助桔皮总黄酮的提取J. 江苏农业学报, 2006,22(2): 168.6朱玲, 杨峰, 唐德才. 枳实的药理研究进展J. 中医药学报, 2004, 32(2): 64.7谭生建, 刘刚, 姜韧, 等. 高效液相色谱法测定枳实中导滞丸中橙皮苷和黄芩苷含量J. 解放军药学学报, 2006, 22(5): 

24、;387.8吴宏伟, 雷海民, 李强, 等.高效液相色谱法测定陈皮多甲氧基黄酮部位中3种黄酮的含量J. 药物分析杂志, 2007, 27(12): 1895.9张淑芬，马炳伦，郑大威, 等. 柑桔果皮中多甲氧基黄酮的LC-APCI-MS定性分析J. 分析测试学报, 2004, 23(9): 110.10Xiao Wang, Fuwei Li, Hongxia Zhang, et al. Preparative isolation and purification of polymethoxylated flavones from Tange