强直性脊柱炎实验室检测及其意义

1、强直性脊柱炎实验室检测及其意义内容提要： 强直性脊柱炎 特点及其与B27关系什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA、亚型、关联、RRHLA-B27与哪些疾病相关HLA-B27 怎么检测MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP2强直性脊柱炎(AS) 是一种慢性、进行性，中轴关节受累 的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期发展较快，很短时间内形成 驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。强直性脊柱炎的流行病学v患病率患病率 我国我国0.3% 0.3% 高！高！ （RA 0.36%RA 0.36%）v发病年龄发病年龄

2、40 40岁以前发病岁以前发病 高峰高峰20-30 20-30 岁岁v男女比例男女比例 10:1 10:1强直性脊柱炎相关检测：HLA-B27Ankylosing Spondylitis，AS患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向；主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！AS不是RA的一种特殊类型！5强直性脊柱炎强直性脊柱炎类风湿性关节炎类风湿性关节炎地区分布种族差异大世界性性别分布男女女男年龄20-3030-50家族史明显不明显类风湿因子（）（

3、）AS与HLA-B276健康人群健康人群HLA-B27HLA-B27阳性率及阳性率及ASAS患病率各地区、种族有显著的差异患病率各地区、种族有显著的差异HLAB27HLAB27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性两种错误认识：两种错误认识：HLA-B27HLA-B27阳性阳性ASAS！ HLA-B27HLA-B27阳性不会转阴！阳性不会转阴！HLA-B27阳性率阳性率AS患病率患病率AS患者患者B27阳性率阳性率中国人2-7%0.3%9095%欧洲白种人413180100%南非黑人南非黑人1很低很低22%美国黑人2457%印地安人95061280100%AS与H

4、LA-B27的关联机制连锁不平衡学说分子模拟学说关节源性肽假说其他：T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型7HLA相关概念主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（ MHC 类)：H-2 SLA HLAMHC、HLA复合体基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）8HLA相关概念9不同地区不同地区HLA-B27亚型的流行病学分布亚型的流行病学分布欧洲、非洲2705、2702、2707东南亚（印尼、马来西亚、泰国）2706、2704、2705中国中国、新加坡、日本2704、2705、2707HLA-B27相关疾病 1

5、0疾病HLA-B27阳性率(%)强直性脊椎炎90银屑病性关节炎 55Reiters综合症37反应性关节炎沙门氏菌感染29.7志贺氏菌感染20.7耶尔森氏菌感染17.6淋病双球菌感染14.0正常人群 27HLA-B27检测方法及评价抗原水平微量细胞毒法 84%ELISA 85%IMS-ELISA 88%流式细胞术法 93%基因水平PCR-SSP 96%11微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细

6、胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。12J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189ELISA原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入

7、HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。其结果与MLCT法符合率为99，且不受感染因素的影响，重复性好。 13瞿良等实用医学杂志，瞿良等实用医学杂志，2005,19(21):2190-2191磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）磁珠分离与ELISA结合B27单抗标记磁珠HRP标记CD45单抗通过磁场分离游离相优点：反应时间短（1小时完成）对标本新鲜度要求不高28静置4 d之内可用14杨

8、雅琼等现代检验医学杂志，杨雅琼等现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62流式细胞术法利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，操作简单，自动化程度高；灵敏度可达100%，特异性达97.4%；结果稳定，样本之间，不同仪器之间，不同实验室之间可重复性高。结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。15PCR-SSP通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出