注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程

1、注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程本品系由含有高效表达人促卵泡激素基因的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，经过细胞培养，分离和高度纯化后冻干制成。含有维持其稳定性作用的保护剂， 不含防腐剂和抗生素。适应症为不排卵（包括多囊卵巢综合症PCOD）且对枸 橼酸克罗米酚治疗无反应的妇女。对于进行超排卵期或辅助生育技术，如体外 受精胚胎移植（IVF）、配子输卵管内移植（GIFT）和合子输卵管内移植（ZIFT） D的患者，本品可刺激多卵泡发育。1. 基本要求1.1设施与生产质量管理按中国药品生产质量管理规范要求实施。1.2原料及辅料应符合现行中华人民共和国药典2005版二部或中国生物制品主要原 辅材料质控

2、标准的要求。未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。1.3生产用水生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水及注射用水应符合现行 中华人民 共和国药典2005版二部标准。1.4生产用器具直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗及去热原质处理或灭菌 处理。2. 制造2.1工程细胞名称及来源重组人促卵泡激素工程细胞系由带有人促卵泡激素a和B链基因的重组质粒共转染的CHO-K1细胞系。种子库建立、传代及保存从原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为主细胞库；从主细胞 库传代，扩增后冻存于液氮中，建立工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。 细胞系冻存于液氮中，检定合格后方可用于生产。主细胞库及

3、工作细胞库细胞的检定应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。2.131外源因子检查细菌和真菌（附录XII A）、支原体（附录XII B）、病毒检查（附录XII C）。细胞鉴别实验应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传学标记物等任一方法进 行鉴别，应为典型CH&田胞。2.133重组人促卵泡激素表达量应不低于原始细胞库细胞表达量。2.2原液细胞的复苏与扩增从工作细胞库来源的细胞复苏后，于无血清、无蛋白培养基中进行传代和扩 增，供转瓶或细胞培养罐接种用。细胞培养液生产用培养液应不含血清、蛋白质。细胞培养细胞培养全过程应严格按照无菌操作，细胞培养时间根据细胞生长情况而定

4、。分离纯化收集的培养液经过超虑法进行浓缩，经多步色谱纯化后得到高纯度的重组人 促卵泡激素，即为重组人促卵泡激素原液。除菌过滤后保存于适宜温度，并规定 其有效期。原液检定按照3.1项进行。2.3半成品配置与除菌原液加入适宜的稳定剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即成半成品。半成品检定按照3.2项进行。2.4成品分批应符合“生物制品分批规程”规定。242分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻，冻干 的全过程中，制品的温度应不高于 30 C。243规格75IU/ 瓶。244包装应符合“生物制品包装规程”规定。3检定3.1原液检定性状应为无色澄明液体鉴别在氧化亚基项下记录的

5、色谱图中，供试品主峰保留时间应与对照品 一致。在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照 品一致。肽图（至少每半年测定一次）取本品，照附录1测定，肽图谱应与对照品一致。N末端氨基酸序列（至少每一年测定一次）：将本品烷基化处理， 再经HPLC分离纯化得到、链后，通过Edman降解法测序，两条链N末端15 个氨基酸序列分别为： 链：A-P-D-V-Q-D-C-P-E-C-T-L-Q-E-N ， 链： N-S-C-E-L-T-X-I-T-I-A-I-E-K-E，其中X代表未测出氨基酸，可能有修饰？。检查3.1.3.1 等电点取本品，照附录2测定，等电点主区带应在3.5-5.5之间，供

6、试品主区带应 与对照品一致？。解离亚基取本品（1.0 mg/ml） 50ul，力卩2非还原上样缓冲液50ul,混匀即得供试品 溶液；取上述供试品溶液10ul，加入190ul 1非还原上样缓冲液，混匀后100C 加热5分钟，放冷即得对照溶液（供试品溶液 5%）。依法（药典2005版三部， 附录IV C,考马斯亮蓝法），用非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，分离 胶浓度为12.5%，供试品溶液和对照溶液各取 20ul ;考马斯亮蓝染色，凝胶成像 仪扫描记录结果。供试品中解离亚基条带显色应不深于对照溶液中的解离亚基条 带（5%）。3.133氧化亚基照高效液相色谱法（中国药典2005年版三部，附录

7、III B ）测定。色谱条件与系统适用性试验：用 Vydac Protein and Peptide C4柱 （25cmX4.6mm，5um,或同等产品），以0.1mol/L TEAP缓冲液（取 85%磷酸 6.75ml,加水 950ml，用三乙胺调 pH 值至 6.00 ±.05,加水至 1000ml，0.45um 滤膜滤过，放置24小时后使用）为流动相 A，乙腈为流动相B, 0.1%三氟乙酸 的80%乙腈溶液为流动相 C （洗柱液）；流速为1.0ml/min;柱温为40C；检测波长为214nm。梯度程序为：时间（min）A %B%C%08614056722805700100720

8、01007386140取本品（0.5mg/ml） 200，加入1%双氧水溶液4讪，反应30分钟即为系统 适用性试验用样品溶液，取 20讪注入液相色谱仪，记录色谱图。 相对a亚基保 留时间约为0.86的杂质峰即为氧化亚基峰。测定法：取本品（0.5mg/ml）? 20山注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面 积归一化法计算，氧化亚基含量不得高于总蛋白量的10%。聚合体取本品原液浓度不定？（0.1mg/ml） ? 80山，加入5X非还原样品缓冲液20门混匀作为供试品溶液；取供试品溶液适量，用1X非还原样品缓冲液稀释为供试 品溶液的2%,作为对照品溶液。取供试品溶液与对照溶液各25门依法检查（药 典200

9、5版三部，附录IV C银染法）,分离胶浓度为12.5%。对照品条带应显色， 供试品中聚合物带的显色应不深于对照品的主带（2%）03.135唾液酸含量精密配制浓度分别为 Oug/ml、40ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml、 200ug/ml的唾液酸对照品作标准曲线；取本品，依法测定（药典 2005版三部， 附录VI E ）,唾液酸含量应为1.41-12.84%?范围太大？。紫外光谱扫描取本品适量，用原液空白溶剂（10mM PB 0.1M NaCl）稀释为200ug/ml,以 空白溶剂为参比，在波长230330nm范围，依法（药典2005版三部，附录II A） 检查。

10、最大吸收波长应在276±3nm处。宿主DNA残留量取本品，依法测定（药典2005版三部，附录IX B ），每剂量重组人促卵泡 激素应不高于100pg。CHO细胞蛋白残留取本品，照CHO宿主细胞蛋白ELISA检测试剂盒（Cygnus）方法测定，分 别用样品稀释液稀释至1mg/ml作为供试品溶液；取200ng/ml CHO宿主蛋白标 准品溶液50ul，并加入200ul供试品溶液，作为回收率实验溶液。按照试剂盒说 明书进行操作。每1mg重组人促卵泡激素中CHO宿主蛋白残留不得过25ng。鼠IgG残留量测定取本品，依法测定（药典2005版三部，附录IX L ），每剂量重组人促卵泡 激素中鼠I

11、gG残留应不高于10ng。细菌内毒素依法测定（药典2005版三部，附录XII E凝胶限量试验），每1mg重组人促 卵泡激素应不高于10EU。含量测定取重组人促卵泡激素对照品适量，用水制成每1ml含有0.1mg的溶液作为对 照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2005版三部，附录III B ）测定。用TSK gel G-2000SWXL （30cmX7.8mm I.D.）或其它相应的色谱柱；以磷酸盐缓冲液（取85% H3PO4 6.74ml,加水 800ml,再加 Na2SO4 14.2g,用 50% NaOH 调 pH 至6.70 ±05,用水定溶为1000ml后抽滤）为流动相；流速

12、为1.0ml/min ;检测波长 为214nm。取对照品20卩,注入液相色谱仪，记录色谱图，以人促卵泡激素峰计， 理论塔板数应不小于1000;另取供试品适量注入液相色谱仪，记录色谱图，按外 标法计算，即得。生物活性测定取本品依法检定（中国药典2005版二部，附录XII M卵泡刺激素生物测定 法检定），每1mg重组人促卵泡激素生物活性应不低于9000IU。3.2半成品检定细菌内毒素检查依法（药典2005版三部，附录XII E凝胶限量试验）检查，每6旧？重组 人促卵泡激素不得过2EU ?含量测定按照成品含量测定项下方法进行，根据结果对半成品分装体积进行微调， 保证成品蛋白含量。3.3成品检定性状本

13、品为白色疏松体。复溶后为无色澄明液体。鉴别试验在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。供试品、抗体如何配制？依法检定（药典2005版三部，附录VHI B， 免疫斑点法），应符合规定？。3.3.3. 检查复溶时间取本品，每支加注射用水0.5ml溶解，溶解时间不得过2分钟。不溶性微粒取本品，用注射用水溶解后，依法（中国药典2005年版二部附录IX C）检查，每瓶中10错误!未找到引用源。m以上的微粒不得过6000粒；25错误!未找到引用源。m以上的微粒不得过600粒。3.333水分取本品，依法（药典2005版三部，附录VII D第一法B库仑滴定法）检 查，含水

14、分不得过3.0%。酸碱度取本品，每支加附带注射用水？0.5mI溶解，依法（药典2005版三部，附录V A）检查，pH应为6.5- 7.5。聚合体取本品，每瓶加入80 pl注射用水溶解，加入5X非还原样品缓冲液20卩， 混匀作为供试品溶液；取供试品溶液 10P，加1冷E还原样品缓冲液490讪作为 对照溶液。取供试品溶液与对照溶液各 25 pj依法检查（药典2005版三部，附 录IV C银染法）对照溶液条带应显色，供试品中聚合物带的显色应不深于对照 溶液的主带颜色（2%）。氧化亚基色谱条件与系统适用性试验照高效液相色谱法（中国药典2005年版三部，附录III B ）测定。色谱条件与系统适用性试验：

15、用 Vydac Protein and Peptide C4柱（25cmX4.6mm，5um,或同等产品），以0.1mol/L TEAP缓冲液（取 85%磷酸6.75ml，加水 950ml，用三乙胺调 pH 值至 6.00 ±.05,加水至 1000ml，0.45um滤膜滤过，放置24小时后使用）为流动相 A，乙腈为流动相B，0.1%三氟乙酸C （洗柱液）；流速为1ml/min;柱温为40C ；检测波长为214nm。梯度程序为：时间（min）A %B%0861456722857007200738614的80%乙腈溶液为流动相C%001001000取本品（0.5mg/ml） ?200p

16、l，加入1 %双氧水溶液4讪，反应30分钟即为系统适用性试验用样品溶液，取 20 gl注入液相色谱仪，记录色谱图。相对a亚基保留时间约为0.86的杂质峰即为氧化亚基峰。需确认！测定法 取本品适量，每瓶加水100g溶解，合并，混匀作为供试品溶液， 取供试品溶液200 g注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，氧化 亚基不得过10%。336含量测定取重组人促卵泡激素对照品适量，用水制成每1ml含有0.03mg的溶液作为对照溶液。取本品，每瓶加水250 pl溶解作为供试品溶液，照高效液相色谱法（中 国药典 2005 版三部，附录 III B ）测定。用 TSK gel G-2000SWXL

17、 （30cmiX7.8mm I.D.）或其它相应的色谱柱；以磷酸盐缓冲液（取85% H3PO4 6.74ml,加水800ml， 再加Na2SO4 14.2g，用50% NaOH调pH至6.70 ±.05，用水定溶为1000ml后抽 滤）为流动相；流速为1.0ml/min ;检测波长为214nm。分别取对照品和供试品 100 g，注入液相色谱仪，记录色谱图，以人促卵泡激素峰计，理论塔板数应不小 于1000;按外标法计算，即得。重组人促卵泡激素含量应为标示量的 90%110%。生物活性测定取本品，供试品、标准品如何配制？依法（药典2005版二部，附录XII M卵 泡刺激素生物测定法检定）

18、，重组人促卵泡激素的生物活性应为标示量的 80% 150%。无菌检查取本品，用注射用水溶解，依法（药典2005版三部，附录XII A膜过滤法） 检查，应符合规定。细菌内毒素取本品，用注射用水溶解后，依法（药典 2005版三部，附录XII E凝胶限 量试验）检查，每支成品含细菌内毒素不得过 5EU。异常毒性取本品，用注射用水溶解，依法（药典 2005版三部，附录VII F小鼠实验 法）检查，应符合规定。4 保存、运输及有效期低于室温下保存及运输，有效期暂定 2年。5使用说明应符合“生物制品包装规程”规定。6.附录6.1肽图检测方法仪器及耗材恒温水浴、磁力搅拌器、小型冻干机、氮气瓶、台式离心机、透

19、析袋（3-10kd ）、 超滤离心管（5kd孔径，4ml）、通风橱。试剂和溶液6.121 盐酸胍溶液（6mol/L）称取盐酸胍14.3g至25.0ml容量瓶，加水溶解并定容，即得。6.1.2.2 TE 缓冲液（Tris，0.2mol/L ； EDTA 1mmol/L，pH8.3）称取Tris 1.2g，EDTA 18.6mg加 40ml水溶解，用2mol/L盐酸调节pH至8.3，移入50ml容量瓶，用水定容。还原及酰化试剂盐酸胍缓冲液：取盐酸胍溶液1.2ml，TE缓冲液0.4ml，混匀即得（用前配 制）。DTT溶液（9.0mg/ml）:称取DTT约9mg加入1.0ml盐酸胍缓冲液，28C 保存

20、。碘乙酸溶液（130mg/ml）:称取碘乙酸65mg加入0.5ml盐酸胍缓冲液溶解， 用铝箔避光保存，氮气充封后存于-20 C。6.1.2.4 0.1% TFA 溶液取100ul TFA，加入100ml水中，室温1月。6.1.2.5 含0.1% TFA的45汇腈溶液，28°C保存1月。6.1.2.6 V8 蛋白酶缓冲液（Tris-HCl 50mM，pH7.8）称取 Tris 0.6g，溶于 80ml 水，2mol/L HCl 调节 pH 至 7.8，定容至 100ml， 28C保存1月。6.1.2.7 流动相A: 5%乙青，0.1%TFA的水溶液。流动相B: 90%L腈，0.1%TF

21、A的水溶液样品溶液制备：6.131 对照品溶液制备：取果那芬对照品适量，用水透析后离心浓缩至浓 度约为3mg/m。6.1.3.2 供试品溶液制备：取原液，同法制备。去糖基化6.141 取对照品和供试品各150ul，加入20ul 10 PNGaseF缓冲液，按照 说明书要求分别加入6ul SDS/ -巯基乙醇溶液和6ul NP-40溶液，混匀后加入 5ulPNGaseF酶，30C保温 24 小时。6.1.4.2 100 C处理10分钟灭活糖苷酶。6.1.4.3 加水稀释至4ml,用4ml超滤离心管离心除盐，并缩小体积至200ul 并干燥样品。还原烷基化6.1.5.1 还原：将干燥样品回溶于200

22、ul盐酸胍缓冲液中，加入100ul DTT 溶液，氮气流处理，封口后37C反应1小时。6.1.5.2 烷基化：在上述样品管中加入 20ul碘乙酸溶液，氮气流处理，封 口后37T反应1小时，加入300ul 0.1%TFA容液终止反应。再加入 30ul -巯基 乙醇，通风橱内操作，室温反应15min。用水透析脱盐后冻干样品。6.1.6 V8蛋白酶切6.1.6.1 蛋白酶溶液制备：取酶适量，用水溶解制备为1mg/ml。6.1.6.2 取冻干样品，每管加入300ul蛋白酶缓冲液(Tris-HCl 50mMpH7.8) 回溶，加入15ul蛋白酶溶液，37T反应16小时。6.1.7 RP-HPLC 分析色

23、谱柱：C18, 300?、5 m 4.6 250mm色谱条件：波长：214nm 流速：1.0ml/min ;柱温：30C，进样量：180ul/针。洗脱条件：T (min)流动相A (%流动相B(%)100310001580204565356040606101007001007110006.1.8观察结果。6.2等电点测定6.2.1 主要仪器：Pharmacia平板电泳仪（或者同等产品）、电泳冷却板、制胶模具。622主要试剂：丙烯酰胺、N 甲叉双丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠（SDS）、 过硫酸氨（AP）、TEMED、pl等电点标准蛋白marker、载体两性电解质pH®10、 甲基红。溶液配

24、制丙烯酰胺贮液称取丙烯酰胺5.0g，甲叉双丙烯酰胺0.15g，加水溶解，定容至50ml,滤 纸过滤。623.2电极液阳极液:1mol/L磷酸溶液（取浓磷酸3.2ml，加水至50ml）;阴极液:1mol/L NaOH溶液。6.2.3.3 50% 甘油称取甘油50g加水混合均匀后定容至100ml。6.2.3.4 甲基红指示剂称取甲基红0.1g，加入7.4ml NaOH（0.05mol/L）使之溶解，加水定容至200ml。6.2.3.5 固定液（10%TC）称取三氯乙酸10g，加水溶解，用水定容至100ml。6.2.3.6 脱色液取甲醇25ml，乙酸5ml，加水至100ml。623.7 染色液称取考

25、马氏亮蓝R-250 0.1g，用脱色液定容至100ml6.238 0.025mol/L磷酸缓冲液 pH7.0溶液A: NaHPO 12HO18.81g，加水溶解并定溶于100ml。溶液B:柠檬酸 钠2HO 2.39g，加水溶解并定溶于100ml。取溶液A 82.4ml，溶液B 17.6ml， 混匀，取25ml加水至1000ml即得。操作步骤凝胶制备：按照下表进行配制10%丙烯酰胺贮液2.5ml载体两性电解质0.35ml50%甘油0.5ml水1.25ml10%APS25 lTEMED6 l6.2.4.2样品制备处理依具体情况而定，如果供试品和对照品溶液盐浓度过高， 应先透析或过滤除 盐。样品浓度

26、制成0.52.0mg/ml。分别取供试品及对照品溶液各10 l，加入两性 电解质2 l，加入甲基红试液0.5 l。6.2.4.3 电泳6.243. 1 点样：将滤纸片剪成0.5cmX).5cm大小，排放在凝胶上，分别将样品、对照品及等 电点标准液各10 l点在滤纸上。6.2.4.3. 2 预电泳：开机预冷电泳槽冷却板，在冷却板中央滴加石蜡油，将载胶的支持膜铺在油 上, 6C预冷30min;将电极条分别用阴、阳极电极液充分湿润，吸去多余电极 液后平行置于凝胶两端。将电极压在电极条上，200V预电泳20min。6.2.4.3. 3 电泳：200V恒压20min，然后根据情况调整电压，直至电流不再降

27、低为止。6.2.4.4 显色胶片于固定液中固定 3060mi n；于脱色液中平衡20mi n；于染色液中染色 2060mi n。最后于脱色液中脱色至本底无色。625观察结果根据等电点标准蛋白判断样品等电点。注射用重组人促卵泡激素制造及检定规程起草说明我公司研制生产的注射用重组人促卵泡激素（rhFSH）,是利用中国仓鼠卵 巢（CHO）细胞分泌型表达技术，使目的蛋白直接分泌于培养基中，经过一系 列的下游纯化及冻干等工艺步骤和严格的质量检验而获得的真核基因工程产品。 为了获得高质量的基因工程重组人 FSH产品，在制备和检定过程中，我们按中 华人民共和国药典（2005版）和中国生物制品规程（2000版

28、）对生物制品 质量控制要点的要求，结合连续中试生产的三批样品（批号：2005070120050702、 20050703）的质量研究结果，参照同类进口产品果纳芬质量标准，起草了重组人促卵泡激素原液和成品的检定规程，现说明如下：1 .重组人促卵泡激素原液1.1性状根据中试产品质量研究结果，三批注射用重组人促卵泡激素原液均为无色澄 清液体，无肉眼可见不溶物。由于本品为注射剂，依据中华人民共和国药典 2005版二部对注射剂标准的要求，规定本品为无色澄清液体，不得含有肉眼可 见不溶物。1.2鉴别本产品含量和氧化亚基项目的检查都采用了 HPLC的方法，在此基础上，我 们通过将待测样品与对照品保留时间的对

29、比，清晰的反应出了蛋白质的性质，对 产品进行了可靠的鉴别，三批注射用重组人促卵泡激素原液的主峰保留时间与对 照品主峰保留时间均一致1.3肽图为了确证产品结构的正确性，我们规定至少每半年进行一次产品的肽图谱分 析。由于重组人促卵泡激素是一种真核细胞为宿主表达的经糖基化修饰的蛋白， 我们通过糖酶和TPCK处理的胰蛋白酶先后作用待测样品和对照品，将其蛋白链 分解成若干肽段，然后利用 RP- HPLC进行了有效地分离，结果表明三批注射用 重组人促卵泡激素原液肽图谱与 果纳芬？对照品完全一致。1.4等电点根据文献报道 ，重组人促卵泡激素的等电点主区带应在4.0-5.2之间。而在我们建立的等电聚焦电泳系统

30、结果分析表明，三批注射用重组人促卵泡激素原液与果纳芬对照品的主区带分布一致，均在 3.5-5.5之间1.5 N 末端氨基酸序列为了确证产品结构的正确性，我们规定至少每年测定一次产品的N 末端15个氨基酸序列。将本品烷基化处理，再经HPLC分离纯化得到、链后，通过Edman降解法测序，两条链N末端15个氨基酸序列分别为：链：A-P-D-V-Q-D-C-P-E-C-T-L-Q-E-N，链：N-S-C-E-L-T-X-I-T-I-A-I-E-K-E ，其中 X 代表未测出氨基酸，可能有修饰。这与文献报道的理论序列是相同的1.6解离亚基依法（药典2005版三部，附录IV C,考马斯亮蓝法），用非还原S

31、DS-聚丙 烯酰胺凝胶电泳法检测，考马斯亮蓝染色，凝胶成像仪扫描记录结果，同法参考 果纳芬的检定标准，将解离亚基的含量定为小于 5%。1.7氧化亚基重组人促卵泡激素的氨基酸结构中含有六个甲硫氨酸残基，容易受到氧化， 产生无活性的氧化产物。实测三批原液氧化亚基的含量都在1 5%之间，我们参考果纳芬对此项的要求为不得高于总蛋白量的10%,所以起草标准同果纳芬进口注册标准。1.8聚合体重组人促卵泡激素由两条链以非共价连接的形式构成，很容易形成高分子聚合物。我们参考果纳芬对此项的检定方法，结合三批原液高分子含量检定结果， 将聚合体含量的标准规定为不得高于总蛋白量的2%01.9唾液酸含量根据文献报道，重

32、组人促卵泡激素唾液酸含量能够直接的反应其糖基化修饰 的程度，而糖基化修饰又与蛋白的活性密切相关。我们建立了C18RP-HPLC分析唾液酸含量的方法，对三批原液进行的检定，结果分别为：7.717%、7.824%、7.679%，所以将重组人促卵泡激素原液唾液酸含量规定为5 15%1.10紫外光谱扫描依法（药典2005版三部，附录II A ）检查，重组人促卵泡激素三批原液与果 纳芬对照品的吸收谱图一致，最大吸收波长应在276±3nm处。1.11宿主DNA残留量依法（药典2005版三部，附录IX B ）测定，三批重组人促卵泡激素每剂量 重组人促卵泡激素应不高于100pg。1.12 CHO细胞

33、蛋白残留照CHO宿主细胞蛋白ELISA检测试剂盒（Cygnus）方法测定，三批重组人 促卵泡激素原液的残留量值分别为：1.650ng/mg、1.114ng/mg> 1.194ng/mg。所 以规定每mg重组人促卵泡激素中CHO宿主蛋白残留不得过25ng。1.13鼠IgG残留量测定本产品的生产纯化工艺中，有针对重组人促卵泡激素的单克隆抗体亲和层 析，所以产品中不可避免会有一些鼠源IgG残留。依法（药典2005版三部，附 录IX L）测定，三批重组人促卵泡激素原液的鼠源IgG残留量分别为0.602 ng/剂量、0.750 ng/剂量、0.869ng/剂量，所以规定每剂量重组人促卵泡激素应不高

34、 于 10ng。1.14细菌内毒素依法（药典2005版三部，附录XII E凝胶限量试验）测定，三批重组人促 卵泡激素原液的细菌内毒素都小于 5EU/mg，所以规定每1mg重组人促卵泡激素 应不高于10EU。1.15比活测定参考果纳芬的含量检测方法进行定量，按照药典2005版二部，附录XII M卵 泡刺激素生物测定法检定生物活性，三批重组人促卵泡激素原液的比活性都在 12000- 13000IU/mg之间，所以规定每1mg重组人促卵泡激素生物活性应不低 于 9000IU10000IU/mg ?2.注射用重组人促卵泡激素2.1鉴别试验结合含量检定项下保留时间与免疫学性质分析，提供了稳定可靠的鉴别实验 方法，三批重组人促卵泡激素成品与果纳芬的 SEC-HPL（保留时间一致，而且免 疫斑点法结果都呈阳性。2.2检查外观随机抽取三批重组人促卵泡激素成品观察，外观都为白色冻疏松体，且复溶后都为无色澄明液体。222复溶时间随机抽取三批重组人促卵泡激素成品加注射用水0.5ml溶