大孔吸附树脂分离纯化补骨脂黄酮的研究

1、大孔吸附树脂分离纯化补骨脂黄酮的研究         09-08-30 14:25:00     编辑：studa20               作者：张晓曦，李重九，张壮，王颖，李楠【摘要】  目的筛选适合分离纯化补骨脂黄酮的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。方法以树脂对补骨脂黄酮的吸附量和解吸率为考察指标，选用7种型号的大孔

2、吸附树脂进行纯化。结果LSA-21树脂吸附和解吸效果最佳，最优工艺条件为:补骨脂黄酮上样液的质量浓度为1.4491.736 mg/ml，吸附流速为1 ml/min，洗脱剂为90%乙醇，洗脱流速为1 ml/min，洗脱剂用量为8倍柱床体积。结论LSA-21树脂在所确定的工艺条件下，可较好地分离纯化补骨脂黄酮。 【关键词】  补骨脂 黄酮 大孔吸附树脂Abstract:ObjectiveTo screen the suitable resin for purification of flavonoids from Psoralea corylifolia and to establish

3、 the optimum technological parameters of purification. MethodsAccording to the absorption capacity and elution ratio of the resin, seven types of macroporous resin were used to purify the flavonoids from Psoralea corylifolia. ResultsThe results indicated that the absorption capacity and elution rati

4、o of LSA-21 type of macroporous resin were the best in these types of macroporous resin. The optimum extraction conditions were that the concentration and the current velocity of the original solution were 1.4491.736 mg/ml and 1 ml/min. The eluant was 90% ethanol and the eluting velocity was 1 ml/mi

5、n. The consumption of eluant was 8 times bed volume.ConclusionIn this condition, LSA-21 type of macroporous resin showed good isolation and purification capability of the flavonoids from Psoralea corylifolia.Key words:Psoralea corylifolia;  Flavonoids;  Macroporous absorption resin中药补骨脂始载于

6、开宝本草，为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，别名破故纸、黑故子、胡故子等，其性温，味辛，具补肾助阳之功效。在传统的中医临床上主治肾虚冷泻，阳痿，小便频数，腰膝冷痛，虚寒喘咳等病症。据现代研究表明，补骨脂还具有抗肿瘤，抗菌，抗骨质疏松，雌激素作用以及治疗白癜风等多重药理活性。补骨脂所具有的这些药理活性与其所含的活性成分有着密切联系1。补骨脂中的化学成分主要为香豆素类和黄酮类，也含有单萜酚类。本实验采用大孔吸附树脂法对补骨脂中黄酮类物质进行纯化富集，通过对7种树脂的静态吸附解吸和动态吸附解吸筛选实验，寻找到对补骨脂黄酮具有较好吸附解吸性能的树脂，并研究了

7、该树脂吸附解吸的工艺条件。此采用大孔吸附树脂对补骨脂中黄酮物质进行纯化富集的研究还未见报道。该研究为补骨脂黄酮的分离纯化提供了实验方法并为大量生产中的应用提供技术参数。1 仪器与材料722光栅分光光度计，上海精密科学仪器公司；T6新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；BP211D型电子分析天平，德国sartorius公司；恒温振荡器，常州国华电器有限公司。补骨脂药材，购于同仁堂药店。芦丁对照品(纯度为99.76%)，南京替斯艾么中药技术研究所，批号：TCM027-080118；XDA-1，SP825，LSA-21，D101，AB-8，LSA-30，D4020树脂，日本三菱（购于北

8、京慧德易科技有限公司）；乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠均为分析纯。2 方法与结果2.1 黄酮含量的测定2.1.1 绘制标准曲线2精密称取芦丁对照品21.02 mg，加60%乙醇充分溶解，置于100 ml容量瓶中，定容即得对照品溶液。分别移取芦丁对照品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml置于25 ml容量瓶中，用60%乙醇补充至6 ml，加5%亚硝酸钠1 ml，摇匀，放置6 min；加入10%硝酸铝1 ml，摇匀，放置6 min；加入4%氢氧化钠溶液10 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15 min后以第1份作为对照于505 nm（经全波长扫描确定505 nm为

9、最大吸收波长）波长处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:A=0.012 9 C-0.012 9，r=0.999 9，线性范围：8.38850.33 g/ml。见图 1。2.1.2 补骨脂样品液的制备及黄酮含量测定将补骨脂药粒粉碎，称取补骨脂药粉12 g，加10倍量90%乙醇加热回流提取3次，2 h/次，过滤，合并滤液3，用90%乙醇稀释至500 ml，作为样品溶液。量取0.5 ml于25 ml容量瓶中，按“2.1.1”项绘制标准曲线项下进行操作，测定并计算其黄酮含量。2.2 大孔吸附树脂预处理所用树脂均先用95%乙醇浸泡24 h，使树脂颗粒充

10、分溶涨，然后用95%乙醇洗涤至洗出液与水混合不呈白色浑浊为止，再用去离子水洗至无醇味2。2.3 树脂的筛选42.3.1 树脂静态吸附量和解吸率的测定称量处理好的XDA-1，SP825，LSA-21，D101，AB-8，LSA-30，D4020树脂各1 g，分别置于50 ml带磨口塞的三角瓶中，精密加入补骨脂样品液10  ml，置振荡器上振摇，24 h后取1 ml上清液至25 ml容量瓶，测定并计算吸附后的溶液剩余浓度。按下式计算各树脂室温下的吸附量（mg/g）:吸附量=(起始浓度-剩余浓度)×溶液体积/树脂质量。    经静态吸附后的树脂过滤抽

11、干，分别精密加入90%乙醇10 ml解吸，相同条件下振摇24 h后取1 ml上清液至25 ml容量瓶，测定并计算解吸液浓度。按下式计算解吸率:解吸率（%）=（解吸液浓度×解吸液体积）/吸附量×100%。结果见表 1。表1  大孔吸附树脂对补骨脂黄酮的静态吸附量与解吸率（略）2.3.2 树脂动态吸附率和解吸率的测定取已处理好的7种树脂各6 g湿法装柱，测量其柱床体积为10 ml，加等柱床体积10 ml补骨脂样品液于柱顶，以相同流速进行动态吸附，然后用等量去离子水清洗树脂床中未被吸附的成分，一并收集流出液。测定并计算流出液的浓度，按下式计算树脂的吸附率：吸附率（%）=(样品液浓度×样品液体积)-(流出液浓度×流出液体积)/(样品液浓度×样品液体积)    将上述充分吸附后的树脂分别用等量90%乙醇以相同的流速进行洗脱，收集洗脱液，测定并计算洗脱液中黄酮浓度，计算解吸率(%)。结果见表2。表2  大孔吸附树脂对补骨脂黄酮的动态吸附率与解吸率（略）由表1，2结果可以看出，7种大孔吸附树脂中LSA-21在静态吸附解吸实验和动态吸附解吸实验中均具有较好的吸附