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文档简介

1、蛋白质的分析一电转移一电转移 1将蛋白质样品进行将蛋白质样品进行SDS-PAGE，待溴酚蓝跑出胶后停待溴酚蓝跑出胶后停止电泳。止电泳。2载手套切载手套切24张定性滤纸和一张张定性滤纸和一张PVDF膜，它们的大膜，它们的大小应与凝胶的大小相同。在膜的一（左）角作一记号小应与凝胶的大小相同。在膜的一（左）角作一记号（或剪角），依次序浸入（或剪角），依次序浸入100甲醇甲醇10秒，去离子水秒，去离子水5分钟，然后与滤纸和海绵（纤维）垫浸泡于转移缓冲分钟，然后与滤纸和海绵（纤维）垫浸泡于转移缓冲液中。液中。3剥胶，并将凝胶裁成合适大小，切角以做记号。剥胶，并将凝胶裁成合适大小，切角以做记号。4. 次序

2、：次序：负极（黑孔板）负极（黑孔板） 纤维垫纤维垫-12张滤纸张滤纸-凝胶凝胶-PVDF膜膜-1-2张滤纸张滤纸-纤维垫纤维垫-正极板（白孔板）正极板（白孔板） 扣上吊扣扣上吊扣 插进转膜槽中。插进转膜槽中。 + _ PVDF膜膜凝胶凝胶滤纸滤纸纤维垫纤维垫6. 将膜放入塑料盒中，加入将膜放入塑料盒中，加入20mL封闭液，置脱封闭液，置脱色摇床中缓慢摇动，室温色摇床中缓慢摇动，室温1小时或小时或4（层析冷（层析冷柜）封闭过夜。柜）封闭过夜。三靶蛋白与第一抗体结合三靶蛋白与第一抗体结合7弃去封闭液，用弃去封闭液，用TTBS稀释试剂稀释试剂B（1：1000），），取取510mL加入盒中，室温平缓摇动温育加入盒中，室温平缓摇动温育1小小时。然后尽量回收抗体溶液，时。然后尽量回收抗体溶液，- 20 保存，可保存，可重复使用。重复使用。 用用T

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