Gel-Pro操作示范手册（精编版）

1、Gel-PRO ANALYZER凝胶定量分析软件操作示范手册GelPro ANALYZER是方便快捷，功能强大的凝胶定量分析软件，为帮助您快速掌握 GelPro ANALYZER的功能，我们在以下的八个章节中给出一些常用功能的使用详解，让您轻松深入地了解Gel-PRO Analyzer凝胶定量分析软件的常见操作以及应用领域。概 述泳道分析DNA分析分子量计算单一条带分析单一条带Dot-blot电 泳 分析 Dot-blot电泳菌落计数菌落计数测量面积 / 密度测量面积 / 密度报告输出 报告生成器实验报告输出宏 Macro宏的功能与应用第一章概述 -泳道分析1. 蛋白质电泳分析第一步 :打开图

2、“ “启动个GelPro 程序后，首先会看到以下画面。可在该对话框中选择实验类型（如图1），并输入相关数据：图 一 a图一 b打开图“ “之后，会出现图二工具框，或单击工具栏中1D- Gel”。第二步 :使用 Rotate旋转功能（如图2）：凝胶成像泳道往往没有与图片框平行，利用 Rotate功能对其进行校正。如图二 a 和 图二 b 所示。 旋转角度输入” Angel”框中。图二 a图二 b第三步 :自动寻找泳道，点击“ Lanes”，出现图五，单击“ Find Lanes ”，软件将自动寻找泳道（如图3）（ 图 三）（图四）第四步 :调整泳道范围框的长度利用鼠标点击泳道边框，调整泳道范围，

3、（如图四）。第五步 :使用“ Lanes”窗口的功能进行调整有时因凝胶照片的原因，需要添加或删除泳道。单击“ Delet Lanes”后， 出现一对话框， 点击对应泳道，删除该泳道后，可再用Add Lanes 进行添加。“Curve Lanes” 可对弯曲泳道进行校正，点击“Labels ”，再选择相应泳道进行标签设置。（图五 ） 第六步 :泳道的密度轮廓窗口点击“ Find Lanes”后会同时出现一单一泳道的光密度轮廓的窗口（如图六），也可在” Plot ”下拉菜单中选择“ show all lanes”显示全部泳道密度轮廓曲线（如图七）（图六）（图七）第七步 :使用“ Bands” 窗口

4、的基本功能在“ Bands”窗口中，“ Min. band height：”可对泳带灵敏度进行调节（如图八-1/2/3/4）， 通过“ Min. band height：”指标的调整，观察该指标对设定自动选择BAND的灵敏度所起到的作用。（图八-1 ）（图八 -2 ）（图八-3 ）（图八 -4 ）第八步 :“Slant窗口的功能使用“ Slant ”（如图 九），” Auto Slant Lines ”功能将自动对倾斜电泳的矫正，也可通过” Add Slant Line ”, 先将鼠标放于相应 Band 之上（这时光标会变为星状） ，至少选择两条以上 Bands（如图 十），点击提示框中的“

5、OK”即可，“ Next MW”，将对下一条 Line 进行校正。（图九）（图十）第九步 :设定分子量标准单击” 1D- Gel”中” MWStandard ”，可在下面对话框中（如图十一）设定分子量；设定的分子量可显示在图像中（如图十二）。（如图十一）（如图十二）第十步 :计算结果（图十三）（图十四）软件对总量（如图十三）、分子量（如图十四）、匹配比较（如图十五）、OD值（如图十六）的计算结果显示如下。（图十五）（图十六）单击” 1D- Gel”中” Result ”即将显示上述数据表格，数据计算包括分子量和带的含量，在菜单” Show” 中可以选择显示其中之一或二者同时显示。带的量以下列形

6、式之一表示：带单位的质量 （在表格上方选择框中选择” Amount”），在整个泳道中含量的百分比（选择”%”），相对丰度（选择”，这里相对丰度值也就是百分比的数值形式） ；绝对积分光密度（选择”IOD”，即带在整个泳道中的量）；最大积分光密度（选择”，即在整个泳道中的光密度最大值）。分子量由用户在第九步设定标准（Marker ）泳道后，其余泳道参照Marker 算出。各带分子量有以下两种显示方式：1. In rows of equal Mol.Weight/Rf，同排表格中的带分子量有相似的数据，最大相差间隔可在Amounts Calibration Options对话框中调整，默认值为3%。

7、如选择In rows of equal Rf，则分子量根据事 先选定的分子量参考数据得出。2. Packed，紧凑型：每一带以在泳道中的顺序表现。同排表格中数据不一定有相似的分子量。带的含量计算有以下几种显示方式：1. 在” Loads”中设定每条泳道上样的总质量，在表格中各带的质量参照各泳道上样的总质量计算获得。同时在” Calibrate : Ratio to Band/Lane”选择” The amount loaded in lans”。2. 在” Calibrate : Ratio to Band/Lane”中选择” The amount in the same band in 列数

8、 ”，数据将选中列的各带量为标准或1，其余带参考其值计算。3. 在” Calibrate : Ratio to Band/Lane”中选择” The amount in band onrow in 行数 ”，数据将选中行的各带量为标准或1，其余带参考其值计算。4. 在” Calibrate : Ratio to Band/Lane”中选择” The band in lane row ”，数据将选中所在行，列的带含量为标准或1，其余带参考其值计算。5. 根据标准刻度计算” the standard calibration” 。 其 后 在 ” Calibrating amounts from k

9、nown bands”对话框进行调整。如图调整时先单击Add/Change 按纽，然后在相应带上点击，对 Band amount 中出现的质量进行调整即可，至少应选择两点进行曲线校正。在其它电泳的处理中，校正方法与此类似。图十七显示方式选项的旁边有一选择框”Rel/Band ”。如果80 ng 质量样品上样，带的量为整个泳道的15%，则带的质量为80 x = 12 ng。因为带之间的间隔关系，所有带之和未必是80（百分比形式则不为1），选择该项调整，所有带之和可为80（百分比形式为1）。在对话框” File ”中可将数据输出到剪贴板，文件或Excel 。在” Show”下拉菜单中选择选择”Ma

10、tch”，会出现匹配比较的结果，即与参考泳道比较后找出是否存在与参考泳道中带分子量一致的带，如有以绿色标记和1 表示，如无用红色标记和0 表示，如比较的泳道有参考泳道中没有的带，则这些带以蓝色标记和-1表示。 通过概述您应了解Gel-Pro分析软件的基本操作流程，以及结果显示的不同方式以及数据的校正。第二章 DNA分析 分子量计算1.DNA电泳分析第一步 :打开图“ “ ( 如 图十七 )选择实验类型” DNA ANALYZE”R ：( 图十八 )(图十九 )第二步 :应用 Best fit功能，自动图像的对比度、亮度，使图像更便于观察分析( 如 图十八 )第三步 :选择“ Lanes”自动寻

11、找泳道( 如 图十九 ) ，应用添加“ Add Lanes”加入未找到的泳道（如图二十）。（图二十 a）（图二十b）第四步 :选择“ Bands”窗口矫正“Bands”的弯曲度( 如 图二十一 ) ，选择“ Add Curves ”（如图二十二）。( 图二十一 )(图二十二 )第五步 :选择“ Bands”窗口矫正“ Bands”的弯曲度( 如 图二十三 ) ，选择“ Add Curves ”矫正（如图二十四）。( 图二十三 )(图二十四 )第六步 :利用“ Bands”窗口中“ Labels ”标注功能( 如 图二十五 ) ，结果（如图二十六）。( 图二十五 )(图二十六 )第七步 :设定分

12、子量标准（如图二十七）；结果显示（如图二十八）。（图二十七）（图二十八）第八步 :查看分子量计算结果“ （如图二十九）。（图二十九） 本节重点是加深对Gel-Pro在图像矫正方面的特点及分子量的计算功能等。第三章单一条带分析1.第一步 :打开图“ ( 如 图三十 ) ，选择“ AOI”功能设定分析范围( 如 图三十一 )选择实验类型”SINGLE BAND ANALYZE”R：( 图三十 )(图三十一 )第二步 :选择“ Lanes”自动寻找泳道，调整泳道范围( 如 图三十二 ) ，查看泳道轮廓窗口( 如 图三十三 )( 图三十二 )(图三十三 )第三步 :选择“ Results ”查看计算结

13、果( 如 图三十四 )( 图三十四 ) 本节重点是了解Gel-Pro针对单一条带分析的解决方案。第四章Dot-blot电泳分析1.第一步 :打开图“ ( 如 图三十五 ) 。 选择实验类型”Dot-blotANALYZE”R 或单击工具栏中” Dotblot ”：图三十五第二步 :打开“Dots “窗口（如图三十六），在选项功能中设定相关数值，选择“FIND DOTS” ( 如 图三十七) 。（图三十六）（图三十七）第三步 :打开“Mass /IOD“窗口，查看IOD 计算结果 ( 如 图三十八 ) 。在该窗口菜单” Show”中可显示积分光密度，最大光密度，最小光密度，以及经校正后的质量。图

14、三十八第四步 :打开“Show“菜单中的“Options ”选项窗口，选择参照行或列，进行相似比较( 如 图三十九 ) 。（图三十九）第五步 :观察数据窗口变化( 如 图四十 )( 图四十 ) 本节重点是了解Gel-Pro针对 Dot-blot电泳分析的解决方案。第五章菌落计数 - 培养皿计数1.第一步 :打开图“ “ ( 如 图四十一 ) 。选择实验类型” Colony Counting”：图四十一第二步 :打开“ Colony Counting”窗口，选择自动计数或手动计数功能。( 如 图四十二 ) 。( 图四十二 )第二步 :我们主要介绍手动计数功能，选择“NO”，打开“计数”选项窗口(

15、 如 图四十三 ) 。( 图四十三 )第三步 :在“ Measure”菜单中选择“Select Measurements”窗口选择想要的计算结果( 如 图四十四 )（图四十四）第四步 :在“ Ranges”中选择计数范围( 如 图四十五、四十六)通过在图四十五Segmentation对话框中调节Level范围，可对显示的记数点进行选择，被选中的点将在图四十六中显示出来。四十五四十六第五步 :点击“ Count ”观察原图中的变化，及“Total Count”数值 ( 如 图四十七、四十八)( 图四十七 )（图四十八）第六步 :点击“ View”菜单查看不同的计算项目：“计算数据” 、“统计”、

16、“分布直方图”( 如 图四十九、图五十、图五十一)（图四十九）（图五十）（图五十一） 本节重点是让客户了解Gel-Pro应用在菌落计数等相关实验中的解决方案。第五章测量面积 / 密度1.第一步 :打开图“及”Area DensityTools ”窗口( 如 图五十二 ) 。选择实验类型”Area Density”：图五十二 第二步 :点击“ Efine Region” 可以选择以下两种选择范围的工具( 如 图五十三 )( 图五十三 )两种工具中前者是魔术棒工具，鼠标左键单击自动选择，按住Ctrl键即可多个选择，后者为手动选择工具。第三步 :利用上面的工具点在图中选取需要计算的范围，点击鼠标右键确定目标，可反复操作( 如 图五十四 )( 图五十四 )(图五十五 )第四步 :在”Area DensityTools ”窗口中可以实时得到相关的计算结果：“平均密度” 、“面积”等 ( 如 图五十四 ) 本节重点是了解Gel-Pro中“ Area Density Tools”测量工具的应用。第六章实验报告输出Gel-Pro具有自动生成实验报告的功能，单击工具栏中的”Report Generator”，选择一模版后即可。在报考中可插入实验中的图像，表格，使您能轻松完成报告，并能定做具有自己特