重组L-门冬酰胺酶前体脂质体对急性淋巴白血病小鼠的治疗效果

1、    重组L-门冬酰胺酶前体脂质体 对急性淋巴白血病小鼠的治疗效果        摘要考察L-门冬酰胺酶前体脂质体(L-ASNasePL)与L-ASNase对移植性小鼠急性淋巴细胞白血病的作用。采用DBA/2小鼠两种L1210、P388腹水瘤模型,脂质体组和L-ASNase组小鼠每天ip一次（按L-门冬酰胺酶计7400,3700,1850KU/kg）, 连续10d。设生理盐水组（0.9%NaCl,0.4ml/20g）及阿霉素注射剂（2mg/kg）组为阴性和阳性对照

2、组。结果L-ASNase PL及L-门冬酰胺酶（L-ASNase）皆能显著延长移植性淋巴细胞白血病的小鼠存活天数（P<0.01）, L-ASNase PL对 L1210、P388移植小鼠，生命延长率分别最高达184.7%和183.3%。L-ASNase组生命延长率最高分别为132.9%和132.1%。L-ASNasePL与相同剂量的L-ASNase相比,其高、中剂量组（7400,3700kU/kg）皆显著延长L1210、P388小鼠的存活天数（P<0.05）。关键词L-门冬酰胺酶前体脂质体（L-ASNasePL）；L-门冬酰胺酶（L-ASNase）；急性淋巴白血病 Effect o

3、f Recombinant -L-Asparaginase Proliposome on the Acute Lymphatic Leukaemia in MiceWang Hong（College of Biopharmaceutics, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009）Wu Wutong（College of Biopharmaceutics, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009）Guo Qinglong（College of Biopharmaceutics, Ch

4、ina Pharmaceutical University, Nanjing 210009）Gu Xueqiu（Pharmaceutical Research Laboratory, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110015）AbstractOBJECTIVE：To examine the effect of L-Asparaginase proliposomes(L-ASNasePL)and L-Asparaginase(L-ASNase)on acute lymphatic leukaemia in mice.METHODS:

5、The dose of L-ASNasePL and L-ASNase group mice(7400,3700,1850kU/kg)was given ip one time every day for 10 days adopting L1210 and P388 acute tumor model. Saline and Doxorubicin used as negative and positive control. RESULTS: L-ASNasePL and L-ASNase could extend acute lymphatic leukaemia mice surviva

6、l time significantly（P<0.01）. The life lengthen ratio of L-ASNasePL was the highest to 184.7% in L1210 group and 183.3% in P388 group respectively, and that of L-ASNase was the highest to 132.9% in L1210 group and 132.1% in P388 group respectively. CONCLUSION: Compared with the same dose of L-ASN

7、ase ,the high and middle dose （7400,3700KU/kg）L-ASNasePL extend survival time of L1210 and P388 mice（P<0.05）. Key WordsL-asparaginase proliposomes, L-asparaginase , Acute lymphatic leukaemia脂质体作为药物载体已进入深入研究1,也可作为肽类和蛋白类药物的载体,以提高重组蛋白的使用性,使之适宜于药物的研制和开发。L-门冬酰胺酶（L-ASNase）是治疗人急性淋巴细胞白血病的有效抗癌制剂2，3，是目前联合治

8、疗转移癌和急性淋巴细胞白血病的较好药物，由于静脉注射L-ASNase可能引起某些不良反应，如发烧、皮疹和过敏性休克、血栓出血症严重者死亡，使临床应用受到限制4，5。为此将L-ASNase研制成脂质体制剂，使酶的抗原决定簇被包封物掩盖，以达到降低免疫原性、减少过敏反应目的，利于白血病人的治疗。1材料瘤谱：腹水型小鼠淋巴白血病细胞（L1210），腹水型小鼠淋巴白血病细胞（P388），均购自上海细胞所细胞库。动物：DBA/2小鼠，由中科院上海实验动物中心提供，合格证：中国动管会005号，沪动管会90（10）号文。药品与试剂：前体脂质体自制(批号96072701,96072702,96072703)，

9、通过空白前体脂质体加入L-门冬酰胺酶液进行水合包封,配成所需浓度的L-门冬酰胺酶脂质体混悬液；L-ASNase由中国药科大学生物制药学院提供。阿霉素（DR）浙江海门制药厂。2方法与结果21L-门冬酰胺酶前体脂质体对移植性小鼠淋巴细胞白血病L1210生命延长作用取DBA/2小鼠18g22g,雌雄各半,80只,按移植性肿瘤研究法6接种L1210腹水瘤,按种后随机分为8组,每组10只,雌雄各半,分别按以下三个剂量给药:L-门冬酰胺酶前体脂质体（按L-门冬酰胺酶计7400,3700,1850kU/kg）;L-门冬酰胺酶注射液（7400,3700,1850kU/kg）;另设生理盐水空白对照组（0.9%N

10、aCl,0.4ml/20g）及阿霉素注射剂（2mg/kg）组,于接种后24h腹腔注射,每天一次,共给药10d,给药后观察荷瘤DBA/2小鼠存活天数（存活60d以上小鼠按60d计）,所得实验结果进行统计学（t检验）处理.试验重复三次, 生命延长率计算如下式:生命延长率(T-C)/C×100%式中C为对照组平均生存天数;T为给药组平均生存天数；实验结果见表1。Tab 1The mean survival time of L-asparaginase preparations on L1210 by ip route , ±s, n=10ExperimentLot No.Prep

11、arationAnimalsNumberDosekU/kgThe mean survivaltime(day)(%)Prolong ratio(%)Control108.5±1.57L-ASNasePL10740024.2±4.16*184.710379918.7±3.38*120.010185012.5±3.81*47.096072701L-ASNase10740019.8±4.73*132.910370015.1±3.84*77.610185011.8±3.26*38.8DR102mg31.1±7.87*265

12、.9Control108.6±1.43L-ASNasePL10740024.3±4.24*182.610370018.6±3.43*116.310185012.3±3.65*43.096072702L-ASNase10740019.5±4.43*126.710370015.2±3.49*76.710185011.5±2.80*33.7DR102mg29.6±6.01*244.2Control108.6±1.52L-ASNasePL10740023.9±4.12*177.910370018.9&#

13、177;3.63*119.810185010.6±3.1423.396072703L-ASNase10740019.3±4.14*124.410370014.7±3.93*70.91018509.7±3.0512.8DR102mg30.4±8.10*253.5?*P<0.01, Compared with control ; P<0.05 Compared with L-ASNase 实验结果表明：与生理盐水对照组相比L-门冬酰胺酶脂质体（L-ASNase liposomes）、L-门冬酰胺酶（L-ASNase）及阿霉素（DR）皆能

14、显著延长移植性小鼠淋巴细胞白血病的存活天数（P<0.01）,对L1210的生命延长作用DR作用最强,其生命延长率为265.9%;其次为L-ASNase LP,其生命延长率最高达184.7%。L-ASNase作用最弱,其生命延长率最高为132.9%。L-ASNase LP与相同剂量的L-ASNase相比,其高、中剂量组（7400,3700kU/kg）皆有显著延长L1210小鼠的存活天数作用（P<0.05）,试验重复三次,结果相近。2.2L-门冬酰胺酶前体脂质体对移植性小鼠淋巴细胞白血病P388的生命延长作用取DBA/2小鼠1822g,雌雄各半,80只,按移植性肿瘤研究法接种P388腹

15、水瘤,接种后,随机分为8组,每组10只,雌雄各半,分别按以下剂量给药:L-ASNase LP（按L-ASNase计7400,3700,1850kU/kg）;L-ASNase注射剂(7400,3700,1850kU/kg）;另设生理盐水空白对照组（0.9%NaC1,0.4ml/20g）及DR注射剂（20mg/kg）组,于接种后24h腹腔注射,每天一次,连续10d,给药后记录荷瘤DBA/2小鼠平均生存时间（存活60d以上小鼠按60d计）,计算给药组生命延长率,并分别进行统计学（t检验）处理。试验重复三次,结果见表2。Tab 2The mean survival time of L-asparagi

16、nase preparations on P388 by ip route , ±s, n=10ExperimentLot No.PreparationAnimalsNumberDosekU/kgThe mean survivaltime(day)(%)Prolong ratio(%)Control108.9±1.10L-ASNasePL10740024.5±4.97*175.310379918.8±3.55*111.210185012.7±3.59*42.796072701L-ASNase10740019.9±4.75*123.61

17、0370015.3±3.83*71.910185011.9±3.01*33.7DR102mg30.9±7.53*247.1Control108.4±1.35L-ASNasePL10740023.8±3.60*183.310370018.5±3.44*120.210185012.2±2.94*45.296072702L-ASNase10740019.5±4.50*126.710370015.3±3.37*76.710185011.7±2.95*39.3DR102mg29.6±6.26*2

18、52.4Control108.6±1.43L-ASNasePL10740023.4±3.94*172.110370018.9±3.51*114.010185010.8±3.0125.696072703L-ASNase10740019.5±4.09*126.710370015.0±3.64*74.410185010.4±2.8720.9DR102mg30.4±8.10*253.5*P<0.01 , Compared with control ; P<0.05 , Compared with L-ASNase 实验结果表明:与生理盐水空白对照组相比,L-ASNase LP、L-ASNase及DR皆均能显著地延长移植小鼠淋巴细胞白血病P388的存活天数（P<0.01）。对P388的生命延长作用DR作用最强,生命延长率为253.4%,其次为L-ASNase LP其生命延长率最高达183.3%,L-ASNase作用最弱,其生命延长率最高为132.1%。与相同剂量的L-ASNase注射剂相比,L-ASNase LP高、中剂量组（7400、3700kU/kg）皆有显著延长P388小鼠的存活天数（P<0.05）。实验重复三次,结果相近