荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究

1、C EREALS AND OILS PROCESSING荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究南海娟刘本国高晗张磊贾蕾蕾(河南科技学院食品学院【摘要】本文利用四氯苯醌与赖氨酸之间的荷移反应测定食品中赖氨酸的含量。主要研究了吸收波长、反应时间、温度、硼砂用量、定容溶剂以及四氯苯醌用量等对测定结果的影响。试验结果表明:荷移反应最优条件为:max=348nm,时间60min,温度60,硼砂用量2mL,四氯苯醌用量2mL,水为溶剂。在0.31.5mol/L赖氨酸范围内测定,相对标准偏差在0.41%以内,相对误差为0.53%1.39%,结果令人满意。【关键词】赖氨酸;四氯苯醌;荷移反应;分光光度法中图分类号

2、:TS201.2文献标识码:A文章编号:1673-7199(201005-0122-04荷移反应是指由富电子和缺电子物质形成电荷转移络合物的反应,基于某些物质生成的荷移络合物具有特定的颜色、最大吸收波长等特性,可测定物质的含量。由于此法简便、快速,试剂稳定,重现性好,因此在食品及药物分析上有广泛的应用前景。荷移分光光度法是在量子化学的基础上提出的荷移理论发展起来的一种定量分析方法。近年来,国内外用此方法对氨基酸和磺胺类药物含量进行分析的报道很多。赖氨酸是人体中必不可少的八大必需氨基酸之一,在食品中的含量常常被作为衡量食品营养价值的主要指标。因此,快速、简便地分析食品中赖氨酸的含量受到了广泛的重

3、视。目前测定赖氨酸含量的方法主要有电位滴定法、高效液相色谱法、荧光法、示波极谱法、脉冲伏安法、分光光度法等。但利用四氯苯醌与赖氨酸的荷移反应测定赖氨酸含量的方法未见报道。1材料与方法1.1材料供试仪器:TU-1800紫外分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司;HH-4恒温水浴锅,金坛市杰瑞尔电器有限公司;79-1磁力搅拌器,江苏正基仪器有限公司。供试药品:赖氨酸,生化试剂,层析纯,上海丽珠东风生物技术有限公司;四氯苯醌,国药集团化学试剂有限公司;四硼酸钠,北京化工厂;无水乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、二甲亚砜,天津科密欧化学试剂有限公司;所用试剂除赖氨酸外均为分析纯,试验用水为蒸馏水。1.2方法1

4、.2.1试剂配制方法1.5×10-3mol/L赖氨酸标准溶液:称取0.0230g赖氨酸于烧杯中用水溶解后移入100mL容量瓶中以水定容。3.0×10-3mol/L四氯苯醌-乙醇溶液:准确称取0.0735g四氯苯醌(简称TCBQ,下同粉末在干燥烧杯中用乙醇溶解后移入100mL容量瓶中,用无水乙醇定容。0.1mol/L硼砂溶液:准确称取9.5357g四硼酸钠,用水溶解后移入250mL容量瓶中定容。1.2.2研究方法1.2.2.1最佳定容溶剂的确定分别精密吸取1mL赖氨酸标准溶液于6支25mL 比色管中,各加入2mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ 溶液,分别用蒸馏水、甲醇、乙醇

5、、丙酮、乙腈和二甲亚砜溶液稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,122用1cm石英比色皿在348nm处测定其吸光度值。(溶剂水的参比:2mL硼砂+2mL无水乙醇,用水定容至25mL的溶液。溶剂甲醇的参比:2mL硼砂+2mL无水乙醇,用甲醇定容至25mL的溶液。1.2.2.2最佳吸收波长的确定精密吸取1mL赖氨酸标准溶液于25mL比色管中,加入2mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白做参比(2mL硼砂、2mL无水乙醇,水定容至25mL的溶液,下同,用1

6、cm石英比色皿于200600nm扫描荷移络合物(用加入2mL硼砂、2mLTCBQ用水定容至25mL的溶液为参比、赖氨酸、TCBQ的吸收光谱图。1.2.2.3最佳反应时间的确定分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于7支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中分别加热30、40、50、60、70、80和90min后,取出冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm石英比色皿在348nm处测定其吸光度值。1.2.2.4最佳反应温度的确定分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于5支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释

7、至25mL刻度,摇匀,分别置于30、40、50、60、70水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值。1.2.2.5最佳硼砂用量的确定分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于6支25mL比色管中,分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL 刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm 处测定其吸光度值。1.2.2.6荷移试剂用量的研究方法分别精密吸取1mL赖氨酸溶液、2.0mL硼砂溶液于6支25mL比色管中,分别加入0

8、.5、0.8、1.0、1.5、2.、2.5mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值。1.2.2.7工作直线的制作方法分别精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL赖氨酸溶液于25mL比色管中,加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ 溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值并制作工作直线。1.2.2.8方法重现性的试验方法分别精密吸取0.4mL和0.8mL赖氨酸溶液于

9、3支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处重复测定3组平行试验的吸光度值并计算RSD值及相对误差。2结果与分析2.1试验条件的选择2.1.1不同定容溶剂对荷移络合物吸光度值的影响由表1可知:除以水与甲醇定容的溶液外,其他溶液均呈现浑浊状态,用水定容时所测得的吸光度值最大,因此选用水作为定容溶剂。2.1.2不同波长下荷移络合物吸光度值的变化由图1可知:赖氨酸在200600nm的波长范围内基本无吸收;TCBQ在400600nm之间吸收很小,在2004

10、00nm内有两个吸收峰,分别是320nm和215nm图1赖氨酸、TCBQ以及荷移络合物的吸收光谱图表1溶剂对吸光度值的影响溶剂水甲醇乙醇丙酮乙腈二甲亚砜吸光度0.5900.573浑浊浑浊浑浊浑浊1.赖氨酸的光谱图 2.TCBQ的光谱图3.赖氨酸与TCBQ反应生成荷移络合物的光谱图123C EREALS AND OILS PROCESSING 赖氨酸量(10-3mol /L 相对误差(%RSD (%标准品测定值1230.60.6060.6080.6111.390.411.21.2091.2071.2030.530.25表2方法重现性图2反应时间与吸光度值的关系图4硼砂用量与吸光度的关系处;400

11、600nm 之间,赖氨酸与TCBQ 形成的荷移络合物吸收很小,该络合物在348nm 处出现最高吸收峰。此时,赖氨酸和TCBQ 对络合物的干扰均较小,所以最佳吸收波长确定为348nm 。2.1.3不同反应时间对荷移络合物吸光度值的影响由图2可知:在3060min 之间吸光度呈大幅度增长趋势,60min 后吸光度值变化趋于平缓,说明60min 内反应基本完全。因此,确定60min 为最佳反应时间。2.1.4不同反应温度对荷移络合物吸光度值的影响由图3可知:随着温度的升高,荷移络合物的吸光度值先增长后略微下降,温度为60时,吸光度值最大,故选择荷移反应温度为60。2.1.5不同硼砂用量对荷移络合物吸

12、光度值的影响由图4可知:随着硼砂用量的增加,荷移反应生成络合物的吸光度值呈现先增大后减小的,在硼砂用量为2mL 时,吸光度值达到最大。所以选用硼砂量为2mL ,此时测得的pH 为9.67。2.1.6不同TCBQ 用量对荷移络合物吸光度值的影响由图5可知:随着TCBQ 用量的增加,吸光度值呈增加趋势,在2mL 后趋于平缓,说明添加2mL TCBQ 可使反应进行比较完全,因此TCBQ 用量选用2mL 。2.2工作曲线按照试验测定的最佳条件,测定赖氨酸浓度与吸光度的关系,得到工作曲线如图6所示。由图6可知:工作曲线方程为A =0.575C +0.0269(C :10-3mol /L ,其相关系数R

13、2=0.996。2.3方法重现性的测定分别取0.4mL 标准溶液(相当于0.6×10-3mol /L 、0.8mL 标准溶液(相当于1.2×10-3mol /L ,按照最佳试验条件测定得吸光度值,查工作曲线得赖氨酸含量见表2。图3反应温度与吸光度值的关系图5TCBQ用量与荷移络合物吸光度值的关系图6工作曲线124HPLC法测定红曲诱变菌种中MonacolinK含量李永丽雷恒王红磊汪芳安(武汉工业学院食品学院【摘要】红曲菌种经微波、紫外线、氯化锂诱变后,通过固态发酵生产MonacolinK。采用高效液相色谱法检测发酵产物中酸型和内酯型MonacolinK含量。在一定条件下,将

14、标准内酯型MonacolinK转化为酸型MonacolinK,从而可以对固态发酵红曲中酸型和内酯型同时进行定量测定,且对萃取溶剂、萃取条件、流动相配比进行选择。此法前处理简单,适用于大量诱变菌株的测定筛选,准确度高。【关键词】诱变;高效液相色谱;酸型MonacolinK中图分类号:TS202.3文献标识码:A文章编号:1673-7199(201005-0125-04红曲是我国传统发酵产品,广泛应用于食品、天然色素、中药等领域。自红曲的降脂活性物质Mona-colinK被发现后,人们对功能红曲的生产和功能物质的检测进行了一系列的研究。红曲霉固态发酵产品中,由表2可知:当赖氨酸浓度为0.600&#

15、215;10-3mol/L时,相对误差为1.39%,RSD=0.41%;当浓度为1.20×10-3mol/L时,相对误差为0.53%,RSD=0.25%。由方法的RSD值和相对误差可知:该试验方法的重现性较好,因此该方法用于赖氨酸含量测定的结果比较可靠。3结论测定赖氨酸的荷移分光光度法的最优条件为:吸取1mL含赖氨酸的样品溶液于25mL比色管中,加入2mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ溶液,分别用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm石英比色皿在348nm处测定其吸光度值,根据工作曲线A=0.575C+0.0269(C:10-3mol/L,得到赖氨酸含量。该方法在0.3×10-31.5×10-3mol/L赖氨酸含量的范围内测定食品中赖氨酸含量结果比较可靠。参考文献1李省云,杨毅萍,张丽娜.甘氨酸的荷移分光光度法测定J.太原师范学院学报:自然科学版,2004,3(3:6063.2徐莉英,蔡蕍,王晓燕,等.甲磺酸培氟沙星的荷移反应荧光光谱法测定J.中国医药工业杂志,2007,38(2:123125.3唐清华,李桂华,柳全文,等.胶束增敏荷移分光光度法测定药物奎尼丁J.信阳师范学院学报:自然科学版,20