治疗类风湿性关节炎中药复方白仙风汤剂的药理作用研究

1、治疗类风湿性关节炎中药复方白仙风汤剂的药理作用研究 作者：郭丽冰 王蕾 林爽 潘贞芸【摘要】 目的研究治疗类风湿性关节炎的中药复方白仙风汤的药理作用。方法采用小鼠扭体镇痛试验和小鼠耳二甲苯致炎抗炎试验对白仙风汤不同提取方法的提取物进行药理指标考察，选择较优的提取方法，再进行大鼠佐剂关节炎试验。结果白仙风汤方法（水醇分提法）提取物能显著镇痛和抑制小鼠耳肿胀度，白仙风汤中、高剂量给药组能显著抑制佐剂关节炎大鼠足肿胀度。结论白仙风汤具有一定的抗类风湿性关节炎作用。 【关键词】 中药复方； 类风湿性关节炎 ； 药理实验； 镇痛抗炎作用 Abstract：ObjectiveTo study the ph

2、armacological effect of a Chinese compound formula Baixianfeng Decoction used for therapy rheumatoid arthritis (RA). MethodsDifferent extraction methods for Baixianfeng were chosen by the writhing test and ear swelling test in mice. Adjuvant Arthritis of Rats experiment was used on the better one. R

3、esultsThe extract of method had significant analgesic effect and could inhibit the ear swelling degrees of mice. The high and middle dosage of Baixianfeng Decoction could significantly inhibit the feet swelling degrees of rats.ConclusionBaixianfeng Decoction hasd anti-RA effect. Key words：Chinese co

4、mpound formula; Rheumatoid arthritis (RA); Pharmacological experiments; Anti-inflammatory and analgesic effect 类风湿性关节炎 (Rheumatoid Arthritis，RA)是一种以关节疼痛、肿胀、强直、变形为主要临床表现的慢性全身性自身免疫性疾病。论文论文参考网类风湿性关节炎目前尚无针对性特效药。中医认为其属中医“痹症”范畴，临床上大体可分为风寒湿痹和风湿热痹两种症型，常以疏风通络，活血止痛类药物，如青风藤、威灵仙等及虫蛇类药物为主方加减治疗1，2。 本实验选取临床上用于治疗类风

5、湿性关节炎中药验方白仙风汤进行药理实验研究。通过小鼠实验指导白仙风汤剂有效成分的提取分离，然后针对临床上类风湿性关节炎的症状，结合现代药理理论，通过大鼠佐剂性关节炎(AA)药理实验对白仙风汤提取部位进行抗类风湿性关节炎药理活性研究，为研究治疗类风湿性关节炎的中药复方白仙风汤有效部位奠定基础。 1 仪器与材料 1.1 仪器电热恒温水浴锅（DK-S26型），上海精宏实验设备有限公司；红外线快速干燥器（WS70-1型），上海圣欣科学仪器有限公司；旋转蒸发仪（RE-5298），上海亚荣生化仪器厂；PV-200足趾容积测量仪，成都泰盟科技有限公司。 1.2 动物NIH小鼠，体重1822 g，合格证（粤检

6、证字）：2006A017号。SD大鼠，雄性，体重180220 g，合格证（粤检证字）：2006A015号。均由广东省医学实验动物中心提供（SPF级）。 1.3 药品白仙风汤组成：威灵仙、白芍、炙甘草、青风藤等购于广州市药材公司；吲哚美辛肠溶片，广东华南药业有限公司，国字准号H44020701；醋酸泼尼松片，广东华南药业有限公司，国字准号H44020682；弗氏完全佐剂(FCA)，美国Sigma公司，Lot 51K8931。 1.4 试剂95%乙醇，化学纯（天津市东丽区天大化学试剂厂）；CMC-Na，化学纯（国药集团化学试剂有限公司）；蒸馏水，学院自制，冰醋酸。 2 方法与结果 2.1 供试品的

7、提取与制备将白仙风汤用两种方法进行提取：全方水提法（方法）和水醇分提法（方法）。 全方水提法：将复方中的所有药进行水煎煮。药材以10倍量水提取两次，1 h/次，过滤，合并滤液水浴浓缩，定容待用。 水醇分提法：将白仙风汤中药材按照有效成分的结构类型及性质分为两部分，分别用醇提法（威灵仙、白芍、青风藤等，70%乙醇提取，以10倍量乙醇回流提取两次，1 h/次，提取液减压回收溶剂）和水提法（当归、透骨草等，以10倍量水回流提取2次，1 h/次，提取液减压回收溶剂）进行提取，将两部分浓缩液用1%CMC-Na溶液溶解并合并，定容待用。 实验分为高、低剂量组，低剂量浓度为0.47 g生药/ml，高剂量浓度

8、为1.85 g生药/ml。阳性对照药为吲哚美辛，配制成0.75 mg/ml的水溶液。 2.2 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响3，4取小鼠90只，雌雄各半，随机分为6组，即生理盐水对照组、阳性对照组、方法高、低剂组、方法高、低剂组，每组15只。除阳性对照组外，其余连续灌胃7d，生理盐水组给予等体积的生理盐水，高低剂量组灌胃受试药物0.2 ml/10 g，从第6天开始灌胃阳性对照组。于末次给药1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 ml/10 g。观察记录注射致痛剂后15 min内各鼠扭体次数，比较组间差异。论文参考网 抑制率（）（生理盐水组扭体的次数用药组扭体的次数）/生理盐水组扭体的次数100

9、 实验结果表明，白仙风汤方法的低剂组、方法高、低剂组与空白组比较均有非常显著的镇痛作用，方法的高剂组也有显著的镇痛作用。见表1。 2.3 对小鼠耳二甲苯致肿的影响5，6取雄性小鼠90只，随机分为6组，每组15只。除阳性对照组外，其余连续灌胃7 d，生理盐水组给予等体积的生理盐水，高低剂量组灌胃受试药物0.2 ml/10 g，从第6天开始阳性对照组给药。于末次给药后1 h，将二甲苯30 l涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳作对照。致炎30 min后用直径8 mm的打孔器取下耳片，称重，按下式计算肿胀度和肿胀抑制率。 肿胀度(mg)=致炎侧耳片重(mg)- 非致炎侧耳片重(mg) 抑肿率（）（生理盐水组

10、耳肿胀度用药组耳肿胀度）/生理盐水组耳肿胀度100表1 白仙风汤对小鼠的镇痛作用与空白组比较，* P0.05，* P0.01；n = 15 实验结果表明，白仙风汤方法低剂组与生理盐水组比较对二甲苯致小鼠耳肿胀有十分显著抗炎作用，而方法高低剂组与生理盐水组比较对抗二甲苯小鼠耳肿胀均无显著抗炎作用。见表2。 关节的疼痛及炎症反应为类风湿性关节炎典型症状，小鼠实验主要考察这两项指标。小鼠扭体法镇痛试验、耳二甲苯致炎试验结果表明，白仙风汤用水醇分提法进行提取具有一定的镇痛抗炎作用，可进行下一步抗类风湿性关节炎药理模型实验。表2 药物抗二甲苯致小鼠耳肿胀作用与空白组比较：* P0.05，* P0.01；

11、n = 15 2.4 大鼠佐剂性关节炎模型试验（大鼠足肿胀试验）5取SD雄性大鼠50只，随机分为5组，每组10只，先测量左右后肢踝关节以下部位的容积 ,连续测两次 ，取平均值作为用药前的足容积，然后逐只将弗氏完全佐剂0.05 ml（内含死结合杆菌0.5 mg）注射于大鼠右后足垫内6，注射弗氏完全佐剂当天即开始给药。模型对照组每日灌胃等容积常水，阳性对照药组每日灌胃给予醋酸泼尼松溶液；高中低剂量组每日灌胃受试药物1.0 ml/100 g。连续给药21 d，给药期间每隔一定天数测大鼠足肿胀左右足一次，同侧足跖与给弗氏完全佐剂前后容积之差值为肿胀程度，计算出肿胀百分率和肿胀抑制百分率，结果见表34。

12、 足肿胀度( %) = (用药后足容积用药前足容积)/ 用药前足容积100 % 表3 白仙风汤对佐剂性关节炎大鼠右足肿胀度的影响表4 白仙风汤对佐剂性关节炎大鼠左足肿胀度的影响 与模型组比较，* P0.05，* P0.01；n = 10 结果显示，对照组右脚于注射佐剂次日即呈明显肿胀,逐日加重达高峰,然后逐渐减轻。于第12天后出现第2 次肿胀，并因迟发性超敏反应(Delayed - type hypersensitivity ,DTH) 而出现全身症状：对侧后肢、前肢肿胀明显，主要出现在踝关节，也累积整个脚趾，并与足趾关节间及前足趾出现关节肿大，由于踝关节肿胀变形，大鼠的行动极为不便，类似于类

13、风湿性关节炎的症状，这在对照组尤为严重。到第18天后症状开始逐渐消退。 实验结果表明中、高剂量组与生理盐水组比较对佐剂性关节炎大鼠左右足肿胀均有显著抑制作用，高剂量组从第8天至第16天均有显著差异，第21天与第16天相比较，其肿胀度有明显的下降，表明白仙风汤对类风湿性关节炎有一定的抑制作用。 3 讨论 中国药典中记载，威灵仙可祛风除湿，通络止痛；白芍可平肝止痛，养血调经，敛阴止汗；青风藤可祛风湿，通经络，利小便。方中的这几味主药均显示有止痛祛风湿之效，因此药理实验针对类风湿性关节炎的典型症状疼痛和炎症进行设计。为证明方药对类风湿性关节炎有效，对白仙风汤用不同提取方法得到的提取物进行小鼠预试筛选

14、实验，将实验内容选择为针对镇痛的小鼠扭体实验和针对抗炎的小鼠耳二甲苯致炎实验7，8。实验结果表明，水醇分提法无论扭体试验还是耳二甲苯致炎实验，与生理盐水组（即空白对照组）比较均有显著性差异。故以水醇分提法的提取物作为进一步类风湿性关节炎动物模型实验的药物。 动物药理实验中大鼠佐剂性关节炎(AA)是常见的类风湿性关节炎实验模型之一，常用于RA发病机制的研究及抗炎药物的筛选9。用弗氏完全佐剂诱导的大鼠多发性关节炎，可能是一种迟发性超敏反应或自身免疫性疾病。其抗原是已改变的大鼠自身抗原或是结核杆菌与大鼠组织的复合物。本模型类似于人的类风湿性关节炎，可用以筛选祛风湿药。以大鼠佐剂性关节炎(AA)实验模

15、型指标，通过整个实验过程的考察分析，白仙风汤发挥作用快，既对早期的急性炎症有抑制作用，对后期的迟发性超敏反应也有抑制作用，这种抑制作用基本上存在于整个实验过程，左右足上的表现基本相同。且对后期作用更强, 提示其对原发性或继发性的炎症损害有明显抑制作用。但低剂量组与模型组比较其抑制作用不显著，因此，临床应用时应适当调整剂量以达到更好的疗效。【参考文献】 1 Firestein, G. S. & Zvaifler, N. J. How important are T cells in chronic rheumatoid synovitis J. Arthritis Rheum, 1990, 33: 768.2 粟德林,杨易木.中医药治疗类风湿性关节炎临床研究J.中医药信息,1991,1:43.3 叶任高.内科学，第5版M.北京:人民卫生出版社,2000:897.4 周时高.中医药为主长期治疗类风显性关节炎的探讨附82例临床分析J.辽宁中医杂志,1999,26(2):61.5 陈 奇.中药药理研究方法学M.北京:人民卫生出版社，2006:347.6 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学M.北京:人民卫生出版社,1985:723.7 徐叔云.药理实验