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文档简介
1、原位杂交产品知识介绍原位杂交产品知识介绍原位杂交 vs 免疫组化n原位杂交:核酸水平,碱基互补配对n免疫组化:蛋白水平,抗原抗体反应n杂交更具特异性原位杂交的应用原位杂交的应用n没有好的抗体没有好的抗体n核酸量远多于蛋白核酸量远多于蛋白n蛋白为分泌型蛋白为分泌型n抗体背景高度着色抗体背景高度着色探 针 主 要 类 型n双链DNA探针:如HPVn单链DNA探针:如EBERn寡核苷酸探针nRNA探针EBER原位杂交原理nEBER:EBV编码的小RNA,胞核内nEBER表达量很高,各期均可表达,最适用于临床诊断EBV感染n原理:单链DNA探针与小RNA杂交n定位:细胞核EBER的临床应用价值一)诊断
2、EBV感染性疾病,如:传染性单核细胞增多症、慢性活动性EBV感染 协助诊断特殊部位肿瘤,如:鼻型NK/T细胞淋巴瘤 ,鼻咽癌协助诊断免疫缺陷状态下的淋巴组织增生,如:器官移植后淋巴增生性疾患 协助识别EBV阳性细胞,如:RS细胞协助临床诊断:EBER的临床应用价值二)nEBV感染性疾病:抗病毒治疗,预后好n器官移植后淋巴增生性疾患:早期预后较好nEBV(+)的非霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后差nEBV(+)的霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后好或无显著差异n鼻型NK/T细胞淋巴瘤:预后很差协助了解预后和指导治疗:EBER原位杂交的主要过程n酶消化n变性:55Cn杂交:37Cn杂交:单链DNA探
3、针与RNA病毒互补配对n显色:细胞核着色图图1 传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症图图2 经典霍奇金淋巴瘤经典霍奇金淋巴瘤, RS细胞细胞(摘自周小鸽教授资料)(摘自周小鸽教授资料)目录 背景知识临床应用价值原位杂交原理市场定位和优势HPV产品的:一般介绍nHPVHuman Papilloma Virus,人乳,人乳头瘤病毒):双链头瘤病毒):双链DNA病毒,病毒,110种以种以上上nHPV可感染多种器官和组织可感染多种器官和组织nHPV主要分为皮肤型和生殖道粘膜型主要分为皮肤型和生殖道粘膜型n男女生殖系统均可感染男女生殖系统均可感染HPVn宫颈宫颈HPV感染最为常见,举例介绍感染最为常
4、见,举例介绍 HPV与宫颈癌的关系一)与宫颈癌的关系一)HPVHPV主要分为高危、低危型主要分为高危、低危型高危型:高危型: 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, W123B56, 58, 59, 68, 73, W123B,与宫颈癌关系,与宫颈癌关系密切密切低危型:低危型:6,116,11等等HPVHPV平均感染期为平均感染期为8 8个月,大多数感染可以自然消个月,大多数感染可以自然消退。退。HPV16,18HPV16,18最易感染,且感染期最长。最易感染,且感染
5、期最长。 HPV与宫颈癌的关系二)与宫颈癌的关系二)n宫颈癌的发生率在女性恶性肿瘤中排第二位,仅次于乳腺癌。n99.7%的宫颈癌患者体内存在HPV。n好发部位:宫颈鳞状上皮和柱状上皮的交界处。宫颈癌演变过程宫颈癌演变过程n尖锐湿疣,CIN I CIN II CIN IIIn(重度非典型增生+CIS) 早期浸润癌 n 浸润癌 n概念:nCIN:宫颈上皮内瘤,包括非典型增生和原位癌;病变n 局限于上皮细胞层内,未突破全层n CIN I: 轻度非典型增生病变不到上皮1/3)n CIN II: 中度非典型增生病变达到1/3,不到2/3)n CIN III:重度非典型增生病变达到2/3,但未及全层 )n
6、 及原位癌nCIS:原位癌,病变累及全层,但未突破基底膜宫颈病变的治疗宫颈病变的治疗 病病 变变 名名 称称 治治 疗疗 方方 法法 重度宫颈炎 CIN I CIN II 激光 冷冻 LEEP 重度非典型增生 CIS 锥切 浸润癌 子宫全切术 放疗 化疗宫颈癌术后存活率宫颈癌术后存活率n宫颈浸润癌5年存活率:67%n宫颈早期浸润癌:90%n宫颈原位癌:100%结结 论论 HPV是宫颈癌的主要致病因素是宫颈癌的主要致病因素 宫颈癌早期诊断、早期治疗意义重大宫颈癌早期诊断、早期治疗意义重大 对宫颈病变不同阶段的诊断,决定了临对宫颈病变不同阶段的诊断,决定了临床治疗方式、随诊方案床治疗方式、随诊方案
7、目录 背景知识临床应用价值原位杂交原理市场定位和优势HPV产品的:宫宫 颈颈 癌癌 筛筛 查查n巴氏涂片巴氏涂片PAPPAP涂片)涂片)nCCTCCT电脑辅助宫颈细胞学检测系统)电脑辅助宫颈细胞学检测系统)nTCTTCT膜氏液基超薄细胞学检测系统)膜氏液基超薄细胞学检测系统)n CCTCCT、TCTTCT都是都是PAPPAP方法的改进方法的改进nHPV-DNAHPV-DNA病毒学检测病毒学检测n TCT+HPVTCT+HPV检测检测HCHC)n阴道镜下活检阴道镜下活检n 即病理切片检查,严格说,已不属筛查范即病理切片检查,严格说,已不属筛查范围围杂交捕获杂交捕获 vs 原位杂交原位杂交n杂交捕
8、获(HC):定性,分型,临床,筛查n原位杂交(ISH):定性,定位,分型,病理,n 诊断nHC与ISH在应用上互补HPV原位杂交产品的临床应用价值原位杂交产品的临床应用价值n病因学诊断n协助病变分期n作为预测因素n指导疫苗应用目录 背景知识临床应用价值原位杂交原理市场定位和优势HPV产品的:HPV原位杂交的主要过程n微波修复:暴露核酸n变性:打开双链DNA探针、双链DNA病毒n杂交:单链DNA探针与单链DNA病毒互补配对n显色:细胞核着色操 作 要 点n微波高火,30分钟n变性95C,8分钟n杂交:37Cn杂交液与盖玻片大小匹配n条件匹配,充分洗涤尖锐湿疣尖锐湿疣 ,H P V通用型泰普试剂盒
9、)通用型泰普试剂盒)尖锐湿疣,尖锐湿疣,HPV 6/11型泰普试剂盒)型泰普试剂盒)尖锐湿疣,尖锐湿疣,HPV 16/18 (泰普试剂盒)(泰普试剂盒)宫颈癌,宫颈癌,HPV 16/18 (泰普试剂盒)(泰普试剂盒)宫颈癌,宫颈癌,HPV 16/18 (泰普试剂盒)(泰普试剂盒)目录 背景知识临床应用价值原位杂交原理市场定位和优势HPV产品的:市市 场场 定定 位位n目标科室:病理科n目标客户:病理医生n产品目的:协助病因诊断及病理分期产产 品品 类类 型型n高危型:16/18型n通用型28种亚型)n低危型:6/11型使使 用用 指指 导一)导一) n生殖道炎症与尖锐湿疣的鉴别诊断及预后生殖道
10、炎症与尖锐湿疣的鉴别诊断及预后n 选用:通用型选用:通用型28种亚型)、种亚型)、16/18型、型、6/11型原位杂交型原位杂交n 通用型(通用型(+):): 尖锐湿疣尖锐湿疣n 16/18型(型(+):): 提示癌变趋向提示癌变趋向n 6/11型(型(+):): 病因诊断、提示预后病因诊断、提示预后使使 用用 指指 导二)导二) n尖锐湿疣、CIN I、CIN II、CIN IIIn 首选:16/18型原位杂交n 参考:通用型原位杂交避免漏诊)n 目的:16/18型阳性,可提高病变诊断级别使使 用用 指指 导三)导三)nCIS、宫颈癌n 首选:16/18型原位杂交或PCR分型n 参考:通用型
11、原位杂交HPV阳性,辅助诊断)n 原因:采用PCR分型,防止因原位杂交灵敏度不够而n 可能导致的漏诊泰普泰普HPV原位杂交原位杂交 vs PCR宫颈癌组织:宫颈癌组织:原位杂交:原位杂交:20例()例()PCR:20例()(临床禁)例()(临床禁)免疫组化:免疫组化:15例()例() 5例(例() (北(北 医医 病病 理理 系系 提提 供)供)产品比较产品比较HPV通用型)通用型) 公司名称公司名称 TIB Dako Panpath亚型亚型28 种种10种6种5,6,8,11,16,18,26,27,30,31,33,35,39,40,41,42,43,45,47,48,51,52,53,54,55,57,58,596,11,16,18,3133,35,45,51,5216,18,6,11,3133规格(人份)规格(人份)20,50试剂150探针5040价格价格最适合中国市场最适合中国市场进口进口送货送货即即 时时等待等待我我 们们 的的 优优 势势n通用型产品覆盖面广(28种亚型),包含HPV52/58型;n高危型灵敏度高;n微波修复,容易掌握;n除了普通规
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