夜宁胶囊毒理学试验研究

1、夜宁胶囊毒理学试验研究    【关键词】  夜宁胶囊；急性毒性试验；Ames试验；小鼠夜宁胶囊是解放军全国心理疾病防治中心药物研究室与江苏康缘药业股份有限公司研制的新制剂中药，本品由合欢皮、灵芝等组成。具有改善睡眠、镇静安神的功效，对失眠、睡眠不稳、多梦、头晕头昏的人有很好的作用。笔者通过急性毒性试验、遗传毒性试验、30 d喂养试验对夜宁胶囊进行毒理作用的研究，以方便临床用药，现报告如下。1  实验材料1.1  样品  夜宁胶囊由江苏康缘药业股份有限公司(批号041012、041014、041016)，推荐成人服用

2、量为4.5 g/60 kg·bw·d(每d 3次、每次3粒、内含夜宁药粉0.5 g/粒)。1.2  实验动物  昆明种小鼠(南京中医药大学药理研究中心动物房提供，合格证号：苏实动证200412号)，SD大鼠(南京中医药大学药理研究中心动物房提供，动物合格证：苏实动证200412号)。环境温度18-22，相对湿度40-65%。1.3  检验仪器  XD811生化分析仪。2  实验方法2.1  急性毒性试验2.1.1  小鼠急性毒性试验  选择体重20-24 g健康昆明种小鼠20只，雌雄各半。受试物

3、剂量为60 g·kg-1·bw、灌胃量为0.2 mL·10 g-1·bw，空腹连续ig 3次，每次间隔2 h，ig后4 h内密切观察小鼠活动及死亡情况，喂养观察14 d，记录小鼠中毒表现及死亡情况。2.1.2  大鼠急性毒性试验  选择体重170-210 g健康SD大鼠20只，雌雄各半。受试物剂量为120 g·kg-1·bw。灌胃量为1 mL·100g-1·bw，空腹连续ig 4次，每次间隔2 h，ig后4 h内密切观察小鼠活动及死亡情况，喂养观察14 d，记录大鼠中毒表现及死亡情况。2.2&#

4、160; 遗传毒性试验2.2.1  Ames试验  平板渗入法。试验设312.5、625、1250、2500、5000 g/皿5个剂量组，同时设自发回变、溶剂对照及阳性对照组。每个组别均设5个平皿，37培养48 h，计数每皿回变菌落数。2.2.2  小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验  健康昆明种小鼠，体重25-30 g，雌雄各半，共60只。随机分为6组、每组10只，雌雄各半。4个试验组受试物剂量分别为625、1250、2500、5000 mg·kg-1·bw，另设阴性对照(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺40 mg·kg-1

5、83;bw)。采用间隔24 h 2次ig法进行试验，末次ig后6 h处死小鼠，取胸骨骨髓常规制片镜检，每鼠计数1000个嗜多染红细胞、记录微核细胞数，计算微核细胞发生率(千分率)。2.2.3  小鼠精子畸形试验  健康昆明种，雄小鼠25只，体重26-30 g，随机分为5组，每组5只。3个试验组受试物剂量分别为2.50、5.00、10.00 g·kg-1·bw，另设阴性对照(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺40 mg·kg-1·bw)。连续5 d ig给予受试物，首次ig后第35 d处死动物，常规制片，每只动物记数1000个结构完整的精子

6、，记录畸变类型和数量，计算各组精子畸形率(百分率)。2.3  30 d喂养试验  选择SD健康离乳大鼠80只，平均体重雌(76.3±8.0) g，雄(81.0±8.0) g，按体重随机分组法分为4组，每组20只，雌雄各半。以推荐人日常服用夜宁胶囊每天剂量4.5 g·60 kg·bw设计3个受试物组，夜宁胶囊剂量每天分别为2.0、4.0、8.0 g·kg·bw(相当于推荐人日常服用剂量的25、50、100倍)。将受试物按大鼠体重的10计算食物摄入量分别掺入大鼠基础饲料中喂养试验大鼠，对照组喂饲基础饲料。各组动物单笼喂

7、养、自由摄食及饮水、每周称体重1次并结算每鼠饲料摄入量，连续喂养30 d。试验结束后股动脉取血进行血液生化检验，处死大鼠进行各项病理指标检验。2.4  观察指标  大鼠一般表现、体重、增重、进食量及食物利用率。血液学指标：血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)及分类、血小板计数(PLT)。血液生化指标：血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BU)、肌酐(CRE)。脏器系数：对肝、肾、脾进行脏器/体重比值测定，计算脏器系统(脏器/体重×100)。病

8、理学检查：肉眼观察试验动物主要脏器病理改变，并对肝、肾、脾、胃、十二指肠、结肠进行病理组织学切片检查。3  实验结果3.1  急性毒性试验  灌胃给予受试物后，两种性别小鼠和大鼠均未见明显中毒症状，14 d内动物无死亡。因此认为该受试物对两种性别小鼠最大给药量均大于60 g·kg-1·bw和大鼠的最大给药量均大于120 g·kg-1·bw。3.2  遗传毒性试验3.2.1  Ames试验  见表1。表1  夜宁胶囊Ames试验渗入法结果 注：以上结果为3个平皿的均值±标准差，

9、2AF:10 g/皿  1，8二羧葸醌：50 g/皿  敌克松：50 g/皿  NaN3：1.5 g/皿  甲基环酸乙酯：1.0 l/皿。由表1可见，2次试验中受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量2反应关系，说明在加与不加S9时该样品对鼠伤寒沙氏菌TA97、TA98、TA100、TA1024株试验菌株均未呈现致突变作用；但在-S9时，样品在2500-5000g/皿剂量范围内对测试菌株TA97、TA98、TA100、TA102具有明显的抑制作用；在+S9时，样品在2500-5000 g/皿剂量范围内对测试菌株TA100也有明显的抑

10、菌作用。夜宁胶囊经2次Ames渗入法试验，结果相近。3.2.2  小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验  受试物各剂量组微核率与阴性对照组之间无显著性差异(P0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间有高度显著性差异(P0.01)，说明该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核增生作用。小鼠精子畸形试验：受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组之间无显著性(P0.05)，而环磷酰胺阳性对照组之间有非常显著性差异(P0.01)，说明该样品无致小鼠精子畸形作用。3.3  30 d喂养试验  经试验各组大鼠体重、增重、进食量及食物利用率和对照组比较未见明显差异(P0.0

11、5)，结果为各组大鼠进食、活动及生长发育都正常。对大白鼠血常规及血生化指标影响，经试验可见各受试物剂量组主要生化指标(GIU、CHO、TG、ALT、AST、TP、ALB、BUN、CRE)、全血常规指标(Ub、RBC、PLT、WBC及分类)均在正常范围人，和阴性对照组比较无明显差异(P0.05)。主要脏器系数及病理组织学检查，对全部实验动物进行大体肉眼解剖检查，未发现异常，对高剂量组及对照组大鼠主要脏器肝、肾、脾、胃、十二指肠、结肠、进行病理组织学切片检查，未发现病变，对肝、肾、脾进行脏器系数测定，各剂量组与对照组间无异常(P0.05)。4  讨论夜宁胶囊内容物为合欢皮、灵芝等提取的混合物。研究表明，具有改善睡眠、镇静安神的功效，对失眠、睡眠不稳、多梦、头晕头昏的人群有很好的作用。本试验证明夜宁胶囊属无毒药物，符合非处方药物的使