药厂环境监测及培养基质控体系

1、生物梅里埃的生物梅里埃的药药厂培养基解决方案厂培养基解决方案及其及其质质控体系控体系2生物梅里埃生物梅里埃为为医医药药工工业业提供的解决方案提供的解决方案生物梅里埃工生物梅里埃工业业部部为为医医药药工工业业提供的解决方案提供的解决方案-无菌测试培养基无菌测试培养基, -BacT/ALERT 3D 符合 EP，USP 和JP无无 菌菌测测 试试- 辐射消毒培养基辐射消毒培养基 Count-tact空气采样器环环 境境监监 测测- 完全范围的培养基完全范围的培养基非非 无无 菌菌 产产 品品检检 测测培培 养养 基基API 试剂条试剂条手手 工工- VITEK和和ATB- 验证过程VITEK 验证

2、软件包符合21 CFR Part 11自自 动动 化化鉴鉴 定定 产产 品品 符合 EP，USP 和JP3Industrial ApplicationsThe Pharma Industry Control Process制制药药工工业过业过程控制程控制Mission /EnvironmentMarketbioMrieux and Industrial ApplicationsThe Food Market: bioMrieux SolutionsConclusionDetection检测检测Identification鉴定鉴定DiversiLabVITEK2 CompactTyping分型分

3、型Detection检测检测Preparationof Sample样品准备样品准备Product control 产品控制产品控制Air sample空气采样Surface sample表面采样Raw materials 原料Water 水Additives 添加剂Finished products 最终产品Environmental control 环境控制环境控制Tubes and BottlesBioBall BacT/ALERTCount-Tact AirIDEALAPI The Pharma Market: bioMrieux Solutions4工业生产过程中的微生物监控工业生产

4、过程中的微生物监控 在日常生产的不同阶段，根据不同的监控标准都要用到培养基在日常生产的不同阶段，根据不同的监控标准都要用到培养基原料原料 1半成品半成品 2半成品半成品 3净化净化灌装灌装 & 完成完成添加剂添加剂 1添加剂添加剂 2无菌生产无菌生产无菌生产过程无菌生产过程生产流程生产流程 / 灌装培养灌装培养环境监控环境监控最终无菌最终无菌分装分装这些步骤都被监控以保证这些步骤都被监控以保证产品安全产品安全这样，根据不同的标准每这样，根据不同的标准每一步骤都是成功的一步骤都是成功的5表面表面Count Tact 平板平板规则表面规则表面Quantiswab不规则表面不规则表面无生物危害的表面

5、无生物危害的表面Air IDEAL 3P主动采样主动采样沉降法沉降法被动采样被动采样空气空气Plates手手 / 胸口胸口/ 胳膊胳膊人员人员 环境监测的范围环境监测的范围 6接受的标准接受的标准 European GMP GMP(根据根据EC), 修订本附录 1, 无菌药品的生产等级等级空气空气 CFU/m3沉降法平板沉降法平板 (CFU/4hrs)表面采样表面采样 (CFU/55mm)CFU/ 手手A1111B10555C1005025D200100507“在无菌生产过程中最终要的实验室控制之一是在无菌生产过程中最终要的实验室控制之一是环境监控环境监控程序程序” (通过无菌生产过程生产无菌

6、药品通过无菌生产过程生产无菌药品 Current Good Manufacturing Practice(cGMP) - FDA 2004)Build the Quality IN the Product环境监控是无菌生产过程的关键环境监控是无菌生产过程的关键8不同等级的环境要求不同等级的环境要求ISOLATOR隔离间隔离间辐射消毒辐射消毒 + 不能渗漏不能渗漏三重包装的培养基三重包装的培养基实验室实验室标准化的培养基标准化的培养基无菌间无菌间三重包装的三重包装的辐射消毒培养基辐射消毒培养基 区域入口的安全区域入口的安全区域入口的安全区域入口的安全 + 空气影响安全空气影响安全(单层包装、非辐

7、射培养基单层包装、非辐射培养基)9环境监测培养基环境监测培养基接触平板：接触平板：Count-Tact TM系列，应用于规则平面的检测系列，应用于规则平面的检测细菌总数细菌总数Count-TactTM平板，含4种中和剂(卵磷脂、吐温80、L-组胺酸、硫代硫酸盐)霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌含氯霉素的沙保弱葡萄糖Count-TactTM平板通用的培养基通用的培养基: 应用于棉签采样，空气采样的检测应用于棉签采样，空气采样的检测细菌总数细菌总数TSA胰酶大豆平板含中和剂的胰酶大豆平板霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌沙保弱葡萄糖平板含氯霉素沙保弱葡萄糖平板103P 系列系列 3P 系列 Pharmaceutic

8、al Proven Performances 制药的制药的 被认证的被认证的 性能性能制药业质控的标准制药业质控的标准 PHARMACEUTICALPHARMACEUTICAL专业的解决方案专业的解决方案PROVENPROVEN第三方专家发表的第三方专家发表的通告和文章通告和文章PERFORMANCESPERFORMANCES优于目前所用的优于目前所用的解决方案解决方案11来自于来自于3P系列的革新系列的革新 3P 系列 Pharmaceutical Proven Performances 高性能的培养基:卓越的生长能力中和能力 快速和广泛的检测 药典菌株 + 工业环境分离的菌株 制药业生产环

9、境检测条件123P 系列系列 符合符合3P要求，要求，可室温储存可室温储存 2-25C13QC 原料选择原料选择 试用批次试用批次 脱水产品脱水产品 成品培养基成品培养基QCQCQCIPC监控监控 最终放行产品最终放行产品整体质控方案整体质控方案IPC=In Process Control14生物梅里埃的革新产品确保了结果的有效和可靠生物梅里埃的革新产品确保了结果的有效和可靠 而且, 对于每一个生产批次对于每一个生产批次, 生物梅里埃确保了从生产原料到最终产品的全部控制: 原料分析和性能检查 用我们的TSA标准来评估最终产品的性能LOT 1LOT 2LOT 370%70%49 %OKOK拒绝拒

10、绝不同批次的培养基不同批次的培养基竞争对手生物梅里埃15热冲击实验热冲击实验时间时间温度温度 相同的储藏温度相同的储藏温度根据相关标准的性能质控根据相关标准的性能质控 热冲击热冲击 没有进行热冲击的参考批次没有进行热冲击的参考批次162 - 8C10 15C35 - 39COut of range2 - 8CThermal Shock ValidationSUMMER热冲击实验热冲击实验17生物梅里埃的革新产品确保了结果的有效和可靠生物梅里埃的革新产品确保了结果的有效和可靠 USP 1117: 在持续性生产中，天然原料的差异不可避免，因此，不同批次间培养基的差异是可接受的。 每一生产批次和产品

11、生产过程中都应该对不同批次进行批次差异分析:所有菌株的平均恢复率 %开始批次 1中间批次 1结束批次 1中间批次 295%100%97%103%产品生产过程产品生产过程18目标目标= 所有微生物都能快速生长所有微生物都能快速生长尽管尽管 SOP 要求要求 3-5 天的孵育天的孵育Growth TimeStrain AStrain BStrain DStrain C营养贫乏的培养基营养贫乏的培养基来自于来自于3P系列的革新系列的革新 我们的目标: 满足微生物最快速、最广泛的生长要求，可室温存储生长 TimeStrain AStrain BStrain DStrain C营养丰富的培养基营养丰富的

12、培养基19独特的产品质量标准独特的产品质量标准 生物梅里埃对培养基营养能力的定义: 菌落数量 / 菌落大小 (QC) 生长动力学 最大的恢复率 生物梅里埃对培养基营养能力的认证: 原料 (蛋白胨, 预混合物, 脱水培养基) 产品生产阶段 每批培养基产品20完全符合完全符合药药典的典的质质控体系控体系21表面控制表面控制: 设备设备运送平板 : 55mm / 90mmBI-BOX采样的标准化: 500g; 10sAPPLICATOR接种器接种器22QUANTISWAB 新的尼龙植绒拭子技术带来了: 微生物的高恢复率 高的释放能力 增加了安全性: 减少了操作步骤 降低了假阳性风险 (操作人员的污染

13、) 易于使用: 更少的操作步骤 3层包装, 可用于Isolator生物梅里埃革新的生物梅里埃革新的Swab技术技术23传统拭子法应用中的局限性传统拭子法应用中的局限性传统拭子法应用时需许多步骤传统拭子法应用时需许多步骤1234567接种接种湿润拭子湿润拭子表面采样表面采样转移至肉汤转移至肉汤震荡震荡膜过滤膜过滤将膜放于平将膜放于平板上板上接种接种QUANTISWAB 只需只需3步步24QUANTISWAB 尼龙植绒技术尼龙植绒技术 完全革新完全革新 惰性材料惰性材料 不会干扰微生物不会干扰微生物 高恢复力高恢复力 高释放力高释放力 三层包装三层包装 辐射灭菌辐射灭菌 可用于可用于isolato

14、r 定性和定量定性和定量 可靠的结果可靠的结果 第一次可依靠拭子采样的结果直接计数第一次可依靠拭子采样的结果直接计数 相对于目前有局限性的传统技术，表现出了卓越的性能相对于目前有局限性的传统技术，表现出了卓越的性能253 种可能的操作种可能的操作11223344IncubationSwab the surfaceSwab the surfaceMembrane on plateMembrane on plateIncubationIncubationWet the swabWet the swab11223344556677IncubationSwab the surfaceSwab the

15、surfaceTransport tubeTransport tubeVortexVortexMembrane filtrationMembrane filtrationMembrane on plateMembrane on plateIncubationIncubationWet the swabWet the swab5566IncubationAliquote on plateAliquote on plateIncubationIncubation当前的QUANTISWAB新QUANTISWAB(2 种选择)QUANTISWAB 4 步步QUANTISWAB 6 步步QUANTISW

16、AB 7 步步26PDA:与传统人造纤维拭子比较技术与传统人造纤维拭子比较技术 从表面采集细菌从表面采集细菌 直接接种到平板的恢复率直接接种到平板的恢复率QUANTISWAB: 60% 人造纤维拭子: 20% 涡旋震荡以后再接种到平板，得到的最大恢复涡旋震荡以后再接种到平板，得到的最大恢复率率(与直接接种相比额外增加的恢复率与直接接种相比额外增加的恢复率QUANTISWAB : 大约增加了4% 人造纤维拭子: 增加仅仅0,3%QUANTISWAB : 表明在震荡前就已经几乎释放了所有采集到的微生物人造纤维拭子: 细菌仍然被人造纤维的陷阱困住，即使震荡也很难使其释放 细菌直接加到拭子上，然后直接

17、接种到平板细菌直接加到拭子上，然后直接接种到平板 释放能力释放能力QUANTISWAB : 90% 人造纤维拭子: 20% 结论结论: 安全且易于使用 与人造纤维拭子相比QUANTISWAB具有更高的恢复率和释放率 27空气监测的解决方案空气监测的解决方案Air Ideal 3P空气采样器空气采样器28air IDEAL 3P的性能的性能 对单向流动的空气干扰程度很小对单向流动的空气干扰程度很小 重量轻重量轻: 1.2公斤，便携，操作简单，符合人体工程学设计的手柄公斤，便携，操作简单，符合人体工程学设计的手柄 保护盖去除报警功能保护盖去除报警功能 电池报警功能电池报警功能 三角架三角架 容易清

18、洁容易清洁: 表面光滑，无死角，可抵受不同消毒剂表面光滑，无死角，可抵受不同消毒剂 无需特制的无需特制的90mm琼脂平板琼脂平板 标配标配5 个采样隔网个采样隔网: 可互相交换使用，可於可互相交换使用，可於 134oC高温高压消毒高温高压消毒29-空气撞击培养基的速度必需空气撞击培养基的速度必需 100% 金标准金标准31生物效率生物效率 和金标准相比在生物效率方面没有太大区别和金标准相比在生物效率方面没有太大区别 和市场上同类产品相比，在生物效率方面有明显优势和市场上同类产品相比，在生物效率方面有明显优势Air IDEAL 3P 的性能的性能Fig. 1 Collection efficie

19、ncy of air IDEAL 3P vs main commercialy available air-samplersair IDEAL 3PAir-sampler B: MAS 100Air-sampler C: RCS PlusAir-sampler D: SAS super 100效率效率 竞争对手竞争对手32相关验证及文件相关验证及文件相关文件Qualification Guideline (new version) 3Q认证文件User Manual 使用手册及及Quality Control Certificate 质量控制证书Calibration Certificate

20、校验证书相关验证Physical Validation following ISO 14698 (物理效率验证)Biological Validation following ISO 14698 (生物效率验证)Air Circuit Decontamination Validation (空气环路除菌验证)Use in Isolators Validation (Isolators验证)33无菌产品解决方案无菌产品解决方案 清洗液：清洗液：Rinsing solutions (Fluid A、Fluid D)专利的专利的瓶盖设计瓶盖设计符合符合药典药典有效期长有效期长单一批号单一批号醋酯纤维

21、醋酯纤维标签标签不同颜色不同颜色编码编码热冲击考验热冲击考验质控证书质控证书 需养菌：需养菌：Trypcase-soy broth (TSB：胰酶大豆肉汤胰酶大豆肉汤) 厌厌氧菌：氧菌：Thioglycollate broth (FTM：液体硫乙醇酸盐肉汤液体硫乙醇酸盐肉汤)34无菌测试用培养基的质量控制无菌测试用培养基的质量控制胰酶大豆肉汤USP 29 / EP 5 / JP XV生物梅里埃 2007 100 个活的微生物 100 CFU生长能力测试生长能力测试 传代菌株传代菌株Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌ATCC 663322.5 +/- 2.5C培养不超过

22、培养不超过3天天Candida albicans 白色念珠菌白色念珠菌 ATCC 10231Aspergillus niger 黑曲霉黑曲霉 ATCC 1640422.5 +/- 2.5C培养不超过培养不超过5天天 不超过5代Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 ATCC 663320C-25C培养培养3天天Candida albicans 白色念珠菌白色念珠菌 ATCC 10231Aspergillus niger 黑色曲霉黑色曲霉 ATCC 1640420C-25C培养培养5天天 不超过5代无菌测试无菌测试14 天20C - 25C14 天20C 25C35无菌测试

23、用培养基的质量控制无菌测试用培养基的质量控制液体硫乙醇酸盐肉汤肉汤USP 29 / EP 5 / JP XV生物梅里埃 2007 100 个活的微生物 100 CFU生长能力测试生长能力测试 传代菌株传代菌株Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌 ATCC 6538 or Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 ATCC 6633Pseudomonas aeruginosa 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 ATCC 9027or Micrococcus luteus 滕黄微球菌滕黄微球菌 ATCC 9341Clostridium sporoge

24、nes 生孢梭菌生孢梭菌 ATCC 11437 或或 ATCC 19404or Bacterodes vulgatus 普通拟杆菌普通拟杆菌 ATCC 848232.5 +/- 2.5C培养不超过培养不超过3天天不超过5代Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌 ATCC 6538 Pseudomonas aeruginosa 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 ATCC 9027Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 ATCC 6633Clostridium sporogenes 生孢梭菌生孢梭菌 ATCC 11437-30C-35C培养培养3天天

25、 不超过5代无菌测试无菌测试14 天30C - 35C14 天20C 25C and 30C-35C无菌检测的自动方法无菌检测的自动方法37非无菌产品的检测非无菌产品的检测完全符合药典的培养基非无菌产品的解决方案非无菌产品的解决方案无菌过程控制无菌过程控制无菌灌装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案FDA法规法规“通过无菌过程生产无菌类药品 cGMP” 2004年9月EU 的的GMP法规，附录法规，附录 1“无菌药品的生产”PDA 技术报告技术报告 22 (TR22)“无菌灌装产品的过程模拟测试”PDA 制药科技杂志制药科技杂志“无菌生产过程的思考”, 增刊 57卷, 第二期, 2003PIC

26、/S PI 007-3“推荐一种无菌生产过程验证方法” (2007-9-25)39无菌灌装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案 灌装培养测试灌装培养测试净化步骤净化步骤 (过滤过滤)无菌灌装无菌灌装 & 完成步完成步骤骤与水混合不同阶段的中间产品过滤 / 净化添加剂去除病毒无菌灌装预过滤最终分装单独的大包装原料混合原料混合 / 预培养的细胞预培养的细胞 / 尽可能模拟日常无菌生产过程的灌装测试尽可能模拟日常无菌生产过程的灌装测试40无菌灌装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案 培养基培养基: 通常使用通常使用: 胰酶大豆肉汤胰酶大豆肉汤: TSB TSB 说明说明: 脱水干粉脱水干粉 辐射灭菌

27、辐射灭菌 25 kGy 无支原体污染无支原体污染 可冷滤可冷滤 无疯牛病风险无疯牛病风险 (原料选择原料选择)41无菌灌装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案 两种规格两种规格: 动物蛋白胨动物蛋白胨: 符合USP / EP / JP的要求，能够满足非苛氧微生物的生长 (细菌, 酵母菌, 真菌和一定的厌氧细菌) 货号 51101: 5kg 货号 51102: 500g 植物蛋白胨植物蛋白胨: 针对潜在污染的专利的颜色指示剂 符合USP / EP / JP的要求，能够满足非苛氧微生物的生长 (细菌, 酵母菌, 真菌和一定的厌氧细菌) 货号51103: 5kg 货号51104: 500g42无菌灌

28、装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案 植物蛋白胨植物蛋白胨TSB: 颜色指示剂 更易发现污染 不再有样品阅读的瓶颈 无动物源性 对于做细胞培养的客户来说非常重要 他们需要无动物源性的产品 无疯牛病的风险43植物蛋白胨植物蛋白胨 为客户提供安全和简便为客户提供安全和简便 污染发生时红色消失 与通过浑浊度观察相比，更加容易判断是否然 污染(不透明的小瓶)部分变色部分变色全部变色全部变色新鲜配制的植物新鲜配制的植物蛋白胨蛋白胨TSB44无菌灌装实验的解决方案无菌灌装实验的解决方案 两种包装两种包装: 500g包装包装(通常的脱水干粉的包装通常的脱水干粉的包装) 无双层包装 5kg包装包装 (带手柄

29、的桶带手柄的桶) 桶内的干粉另有双层包装45灌装实验灌装实验: 代给客户的好处代给客户的好处特性特性代给客户的好处代给客户的好处厌氧菌需求厌氧菌需求独特的无竞争对手如此宣称辐照辐照进一步减少了过程模拟中的污染风险冷滤冷滤进一步完善了过程模拟成本效率 节省时间无支原体无支原体无来自培养基的支原体污染风险无疯牛病无疯牛病药典要求避免了朊病毒污染的风险颜色指示颜色指示孵育后十分容易观察独特的、专利的植物源蛋白胨植物源蛋白胨无动物源性46BioBall: 菌株定量质控的创新产品菌株定量质控的创新产品 BioBall 是一个很小的水溶性球状物，包是一个很小的水溶性球状物，包含了数量精确的微生物个体，它使

30、微生物含了数量精确的微生物个体，它使微生物质控中的定量控制达到了空前的精确。质控中的定量控制达到了空前的精确。 2-3 mm 水溶性水溶性 冻干冻干 生产厂商生产厂商47BioBall 的生产技术的生产技术设备通过区分不同群体微生物颗粒的物理和生理状态，来选择细胞：仅仅状态好的微生物被选择制作仅仅状态好的微生物被选择制作成成BioBallBioBall 按照最高的质量标准进行生产，完全符合ISO Guide 34 的要求. ISO Guide 34 是一个对于标准物质生产商的标准要求。ISO Guide 34认证，意味着BioBall 的用户，完全可以信赖BioBall所使用的菌株的可追溯性和

31、分析证书。48BioBall 在制药工业的应用在制药工业的应用 培养基的生长能力验证实验培养基的生长能力验证实验: 微生物计数检测微生物计数检测 (TAMC, TYMC): USP 61 total aerobic microbial count (TAMC); total combined yeast and mould count (TYMC) 特定微生物的检测特定微生物的检测: USP 62 无菌检测无菌检测 : USP 71 灌装培养检测灌装培养检测 : FDA cGMP 每批都要求每批都要求: 接入培养基作为质控的标准菌株接入培养基作为质控的标准菌株“不超过不超过100CFU”49B

32、ioBall有哪些类型？有哪些类型？ 不同的类型不同的类型: BioBall SingleShot : 30 CFU / BioBall BioBall MultiShot 550 : 550 CFU / BioBall BioBall HighDose - 10K : 10 000 CFU / BioBall BioBall MultiShot 10E8 : 108 CFU50制药业质控菌株制药业质控菌株微生物种类BioBall菌株对应的ATCC菌株最大保存期/年细胞或孢子SingleShot货号MultiShot 550货号Aspergillus niger黑曲霉黑曲霉NCPF 22751

33、64041孢子孢子5602256011Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌NCTC 1040066332孢子孢子5602456012Candida albicans白色假丝酵母白色假丝酵母NCPF 3179102312细胞细胞5602656013Clostridium sporogenes 生孢梭菌生孢梭菌NCTC 12935114372孢子孢子5602956014Enterococcus faecalis 粪肠球菌粪肠球菌NCTC 12697292122细胞细胞5603156015Escherichia coli大肠埃希菌大肠埃希菌NCTC 1292387391细胞细

34、胞5603456016Pseudomonas aeruginosa 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌NCTC 1292490272细胞细胞5604056017Salmonella abony 阿邦尼沙门氏菌阿邦尼沙门氏菌ACM 5080NCTC 60172细胞细胞5604256018Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌NCTC 1078865382细胞细胞5604556019Streptococcus pyogenes 化脓链球菌化脓链球菌NCTC 12696196152细胞细胞5604656020复溶液复溶液NANA5NANA56021用于制药工业质量控制的Bio

35、Ball菌株 菌株来自菌株来自NCTCNCTC、NCPFNCPF、IMVSIMVS、NCIMBNCIMB和和ACMACM；ATCCATCC是一个商业的美国是一个商业的美国标准菌库；售出的标准菌库；售出的BioBallBioBall 将至少有将至少有6 6个月效期。个月效期。51 用于用于 一次性接种一次性接种,达到了空前的精确达到了空前的精确 30 CFU / BioBall 每个产品的含菌量都在 28 至33 CFU之间 标准偏差 3 CFU 是当一天中仅仅进行一次或少量几次高精确度接种量要求的接种是当一天中仅仅进行一次或少量几次高精确度接种量要求的接种时的理性产品时的理性产品 每个包装含每个包装含20瓶，每瓶含瓶，每瓶含 1 BioBall 20 测试 / 盒 52 提供提供10次精确接种量次精确接种量- 低的变