古钩藤醇提液镇痛抗炎药理作用的实验研究-

1、 2.4正交实验选取微波功率(A 、料液比(B 、萃取时间(C 为考察因素,每个因素分别取3个水平值,见表1。正交实验采用L 9(34正交表,见表2,重复3次。表1单因素水平表水平A微波功率P /WB料液比/g:m lC萃取时间t /m in11191:40522311:501033851:6015表2正交实验结果试验号A B C 吸光度11110.51621220.52831330.47342120.57452230.54362310.51973130.47783210.47593320.493K 1 1.517 1.567 1.51K 2 1.636 1.546 1.595K 3 1.44

2、5 1.485 1.522k 10.5060.5220.500k 20.5450.5150.532k 30.4820.4950.507R0.0630.0270.032由表2可知,在微波萃取川芎多糖过程中,影响因素由大到小依次是A >C >B ,即微波功率对提取影响最大,其次是萃取时间和料液比。根据表2所得最佳工艺条件为A 2B 1C 2,即微波功率为231W ,料液比为140,萃取时间为10m in 。将在最佳提取条件下所得溶液浓缩,脱脂,除蛋白,脱色,80%乙醇沉淀多糖,离心并干燥至衡重,即为川芎粗多糖,用蒽酮-硫酸法测定多糖含量,计算得提取率为3.06%。3讨论采用单因素与正交

3、实验相结合的方法对微波辅助提取川芎多糖的影响因素进行了研究,确定最佳工艺条件为微波功率为231W ,料液比为140,萃取时间为10m in 。多糖具有调节免疫、抗心肌缺血、降血脂、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老等重要的药理作用,且无毒副作用,现在被作为临床用药或疫苗,是广泛研究的焦点3。提取多糖的方法有多种,除了微波法外,还包括超声波法、酶法、超临界萃取法、双水相萃取法和大孔吸附树脂法等,因此研究选用合适的方法提取川芎多糖非常有必要。我们首次采用微波技术从川芎中提取多糖,与其他方法相比,具有时间短、提取率较高的特点46。参考文献:1范智超,张志琪.川芎多糖的提取、纯化及抗氧化活性的研究J .天然

4、产物研究与开发,2005,11:561.2易剑平,毕雅静,宋秀荣,等.蒽酮-硫酸法测定枸杞多糖质量分数的研究J .北京工业大学学报,2005,31(6:643.3初敏,齐锡祥,朱飞,等.多糖研究概述J .中药研究与信息,2003,5(4:18.4向鸣,王维香.超声波提取川芎多糖的工艺优选J .中成药,2008,30(11:61.5李玲,王维香,王晓君.果胶酶法提取川芎多糖工艺的研究J .中药材,2008,31(4:600.6唐崎,王维香,王晓君.碱法提取川芎多糖的研究J .时珍国医国药,2008,19(9:81.收稿日期:2008212212;修订日期:2008206203基金项目:广西中医学

5、院课题(No .BY L07006作者简介:张兴燊(19632,男(汉族,广西南宁人,现任广西中医学院副教授,学士学位,主要从事中药药效学研究工作.古钩藤醇提液镇痛抗炎药理作用的实验研究张兴燊,文丽艳,秦红玲,陈红岚,雷宗焕,李丽,周芳(广西中医学院,广西南宁530001摘要:目的研究古钩藤醇提液的镇痛抗炎药理作用。方法采用小鼠热板法和扭体法镇痛实验,观察古钩藤醇提液的镇痛作用,观察小鼠腹腔毛细血管通透性和二甲苯至小鼠耳廓肿胀的影响,观察其抗炎作用。结果古钩藤醇提液具明显的镇痛作用,大剂量能降低毛细血管通透性,抑制由二甲苯所致的炎症反应,可减轻小鼠耳廓肿胀的作用。结论古钩藤醇提液有明显的镇痛和

6、一定的抗炎作用。关键词:古钩藤;镇痛抗炎;药理作用中图分类号:R285.5文献标识码:B 文章编号:100820805(20091122735202古钩藤又名海上霸王、白叶藤、牛角藤、大暗消等等,为萝藦科植物古钩藤C ryptolepis buchananii Roe m.et Schult 的地上部分。多生于阳坡,攀援于其他树上,分布于广东、广西、云南、贵州等地,具有舒筋活络、消肿止痛、解毒等功效,用于治疗腰痛、腹痛、跌打损伤、骨折、痈疮、癣等疾病1。目前,镇痛抗炎作用的药物多为西药,且副作用多,而中草药古钩藤民间使用也有这方面的作用,是值得研究、开发的镇痛抗炎药。前期我们已经做过古钩藤根、

7、茎水煎液大、小剂量组镇痛抗炎药理作用的研究,证明水煎液具备一定的镇痛抗炎作用,或有这种作用的趋势,其镇痛抗炎作用不稳定2。本科研小组现在对古钩藤醇提液镇痛抗炎作用进行实验研究,旨在对其进一步开发和临床应用提供一定的理论依据。1材料1.1动物小鼠,雌雄兼用,体质量(20±2g,均由广西中医学院实验动物中心提供,动物证号1104,根据实验性质和性别分笼喂养,自由采食饮水。1.2仪器台式离心机;XZ B -2B 型自控温度热板仪,山东省医学科学院设备供应维修站制造,设备号为:3-109-1-7-6;722型光栅分光光度计,上海第三分析仪器厂,设备号为:3-109-4-4-93。1.3药品与

8、试剂干燥古钩藤全草,采自广西中医学院药用植物园;硫酸罗通定注射液,广东省博罗先锋药业集团有限公司生产,批号020902;醋酸地塞米松,天津药业集团新郑股份有限公5372L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESE ARCH 2009VOL .20NO.11时珍国医国药2009年第20卷第11期 司生产,批号070823;醋酸,上海试一化学试剂有限公司。伊文思蓝,上海化学试剂公司进口分装,批号F -9800。二甲苯,齐鲁石化公司研究院试剂公司;生理盐水,济南永宁制药厂。1.4制备古钩藤水煎剂古钩藤全草300g,加8倍水浸泡1h,煎

9、煮40m in,煎煮2次,合并药液过滤浓缩至200m l (1.00g/m l ,后再加同等剂量的浓度为95%的酒精放置24h 后醇提,按所需要的剂量配成溶液大剂量为30g/kg,小剂量为15g/kg,以备用。2方法和结果2.1小鼠热板法镇痛实验3取雌性小鼠,放入(55±0.5热板测痛仪中,以舔后足作为疼痛反应指标,预测小鼠药前痛阈值。以痛阈值小于30s 视为合格小鼠,将痛阈值合格的40只小鼠随机分为4组,每组10只。分别是古钩藤大剂量组,剂量为30g/kg;古钩藤小剂量组,剂量为15g/kg;阳性对照药罗通定组,剂量30mg/kg;生理盐水对照组,剂量为20m l/kg 。灌胃给药

10、两次,时间间隔为4h 。末次给药后30,60,90,120m in 分别测定痛阈值。在测定中,如60s 内无痛反应,应立即取出,并以60s 计算。各给药组与对照组比较,统计数据以 x ±s 表示,统计方法用t 检验法。结果见表1。表1古钩藤醇提液对热板法致痛小鼠的镇痛作用( x ±s 组别剂量C /g kg -1给药前痛阈t /s给药后痛阈值t /s30m in 60m in 90m in 120m in 生理盐水-21.08±6.1016.396±7.8819.779±14.15913.344±9.03717.707±11

11、.125罗通定0.0319.51±28.0055.678±9.15455.227±15.09050.640±16.13141.830±16.828古钩藤(大3020.67±7.7621.604±4.96732.098±6.242329.568±8.72831.527±6.573古钩藤(小1523.56±8.3828.570±10.939333.074±7.783327.555±9.36029.417±6.064与生理盐水组比较,3P <0.

12、05,P <0.01;n =10痛阈值提高百分率(%=(药后痛阈值-药前痛阈值/药前痛阈值×100%。表1结果表明,古钩藤醇提液大剂量组在药后60,90,120m in 能明显提高小鼠痛阈值,而古钩藤醇提液小剂量组在药后30,60,90,120m in 也能明显提高小鼠痛阈值,从本实验结果中可以看出古钩藤醇提液有镇痛作用。2.2小鼠扭体法镇痛实验3取体质量1822g 健康小鼠40只,雌雄各半,随机分为4组,分组及给药方法同“2.1”项。末次给药后30m in 腹腔注射0.6%冰醋酸0.2m l /只,同时用秒表计时,记录小鼠15m in 内出现的扭体次数。各给药组与对照组比较,

13、统计数据以 x ±s 表示,统计方法用t 检验法。结果见表2。药物镇痛百分率(%=(对照组扭体次数-给药组扭体次数/对照组扭体次数×100%。表2古钩藤醇提液对冰醋酸致痛小鼠的镇痛作用( x ±s 组别剂量C /g kg -115m in 内扭体次数镇痛率(%生理盐水-33.80±14.574-罗通定0.039.40±8.59272.19古钩藤(大3019.00±5.24943.79古钩藤(小1520.30±10.771339.95与生理盐水组比较,3P <0.05,P <0.01;n =10表2结果表明,古钩藤

14、醇提液大、小剂量组对冰醋酸致痛小鼠能显著减少小鼠的扭体次数,具有明显的镇痛作用。但从各剂量组的镇痛百分率来看,镇痛百分率提高不明显。2.3小鼠二甲苯耳肿胀实验3取体质量1822g 健康雄性小鼠48只,阳性对照组药物改地塞米松,剂量为4.5mg/kg,其他分组与给药均同“2.1”项。第8天每只小鼠右耳廓前后均匀涂擦当日配制的二甲苯0.1m l/只,致炎15m in 后将小鼠脱颈椎处死,剪下小鼠左右耳,用打孔器(直径6mm 分别在左、右耳同一部位打下等大的圆形耳片,分别在电子天平上称重后,计算耳肿胀度。各给药组与对照组比较,统计数据以 x ±s 表示,统计方法用t 检验法。耳肿胀度=右耳

15、重量-左耳重量;肿胀抑制率(%=(对照组肿胀度-给药组肿胀度/对照组肿胀度×100%。结果见表3。表3古钩藤醇提液对小鼠耳廓肿胀的影响( x ±s 组别剂量C /g kg -1耳廓肿胀度m /mg 抑制率(%生理盐水- 5.72±1.97-地塞米松0.0045 2.89±1.35349.47古钩藤(大30 3.29±2.27342.66古钩藤(小15 5.33±2.5833 6.82与生理盐水组比较,3P <0.05,33P 0.05;n =12表3结果表明,古钩藤醇提液大剂量组能明显抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,而小剂量组对

16、此作用则无明显抑制作用。从抑制率看,大剂量组具有一定抑制耳廓肿胀的趋势,而古钩藤根小剂量组的抑制率为最差。2.4对小鼠毛细血管通透性影响的实验3取体质量1822g 健康小鼠48只,雌雄各半,分组及给药方法同“2.3”项。第8天,每只小鼠尾静脉注射2.5%伊文思蓝0.1m l /10g (体重,并同时腹腔注射0.6%冰醋酸0.2m l /只,15m in 后用6m l 生理盐水腹腔注射,轻柔小鼠腹部,然后断头处死小鼠,剪开腹腔,用吸管吸取腹腔洗出液约56m l,3000r /m in 离心5m in,取上清液3m l 在722分光光度计590n m 处测定吸收度(OD 值。各给药组与对照组比较,

17、统计数据以 x ±s 表示,统计方法用t 检验法。结果见表4。表4古钩藤醇提液对小鼠毛细血管通透性的影响( x ±s 组别剂量C /g kg -1吸收度(OD 值生理盐水-0.27±0.15地塞米松0.00450.50±0.253古钩藤(大300.51±0.223古钩藤(小150.44±0.2833与生理盐水组比较,3P <0.05,33P 0.05;n =12表4结果表明,古钩藤醇提液大剂量组能降低小鼠毛细血管通透性,减少腹腔液体的渗出,具有明显的抗炎作用。而古钩藤小剂量组效果不明显。3讨论上述实验结果显示,古钩藤醇提液大、小剂量组都具有一定的镇痛作用,并从中也看到其镇痛作用较好;而抗炎作用只在大剂量组存在,小剂量组抗炎作用不明显,但至少可以看出古钩藤醇提液或有这种作用的趋势,这点以后再做进一步的深入研究,其镇痛和抗炎作用机制有待进一步研究,以后在研究中应该对其进行药物提纯再做研究。古钩藤是瑶族人民民间长期使用的药材,有舒筋活络、消肿止痛等功效,主要用于治疗腰腿痛、风湿痛、痛经、软组织扭伤等,疗效显著,本实验结果与民间临床使用基本一致。本实