Waters高效液相色谱仪

1、海 德 氨 基 酸 工 业 有 限 公 司标 准 操 作 规 程题 目Waters高效液相色谱仪操作规程编 号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 1 页制订人审核人批准人生效日期制订日期审核日期批准日期颁发部门质管部分发部门质管部1 目 的 规范Waters高效液相色谱仪使用操作。2 适用范围 Waters高效液相色谱仪的使用操作。3 责 任 者 质管部QC检验人员。4 内 容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“Program Manager”窗口。4.1.3 在“Program Manager”窗口

2、，双击“Millennium”图标，进入相应窗口。4.1.4 在“Millennium”窗口，双击“Session Manager”图标，进入“Millennium V2.10”窗口，进行内存自检。4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium LoginVersion2.10”窗口，在“User Name”输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“Login”进入“Millinniam Version2.10Session ManagerUser System”窗口，双击所选“Project”图标，即进入“Project”窗口。4.2 进样4.2.1 在

3、“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“PCM410”。4.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检。4.2.3 自检完毕，进入“Quick Set”窗口，按“Mode”选择“Quick Start”进入“Method Set”窗口，选择“Using Exiting Method”自动进入“Quick Set Acquisition”窗口，按“Set Up Instrument”，进入仪器安装状态。4.2.4 安装完毕，按“Cancel”，退出“Quick Set Acquisition”窗口，在样品登药业

4、有限公司标 准 操 作 规 程题 目Waters高效液相色谱仪操作规程编 号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 2 页记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。4.2.5 双击“PCM”图标，进入“PCM”窗口，按“EVENT”下部为“ON”（绿色），定压力上限和压力下限，选择“Mode”（单独或混合）调节流速。参数调节完毕，按“OK”该窗口自动退出。4.2.6 双击“410”图标，进入“410”窗口，设定各种参数。现设“Samping Rate”为1，“Filter Time”为1，“Sensitivity”为4，“Polarity”为“”，自动回零。4.2.7 按“Set Up I

5、nstrument”图标，出现询问窗口，按“OK”加以确认。按“Baseline Monitor”图标，监控基线。基线平稳后进样。4.2.8 将进样阀扳至“Load”位置，用进样针筒往进样阀中注入样品。按“Aborting”图标，停止基线监控。4.2.9 按“Ready Injection”图标（黄灯），进入准备状态。4.2.10 按“Inject”图标（绿灯），同时将进样阀扳至“Inject”位置，注入样品。运行时“Aborting”图标（红灯）亮，其余图标变暗。4.2.11 运行结束时，所有图标变亮。在“Project”窗口按“Update”图标，所进样品列入文件表中，可以进行运算。4.3

6、 K、a值和分子量的输入4.3.1 在“Project”窗口样品表中，用光标点黑选择样品图谱文件。4.3.2 按“Tools”图标群中“Start Review”图标，进入“Alter Sample”窗口。4.3.3 按“Amounts”图标，进入“Edit Components”窗口，在K、a登记表中输入K、a值。在分子量登记表中输入分子量。按“File”选择“Exit”退出该窗口。4.3.4 在“Alter Sample”窗口，按“File”选择“Save”；再按“File”选择“Exit”退出该窗口，所输入K、a值和分子量即存入相应的图谱文件。4.4 普适校正曲线的绘制4.4.1 在“P

7、roject”窗口的样品表中选择所进各分子量的标样图谱，用光标点黑药业有限公司标 准 操 作 规 程题 目Waters高效液相色谱仪操作规程编 号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 3 页加以选择。4.4.2 在“Tools”图标群中按“Review”图标，进入“Review Data”窗口。4.4.3 在“Review Data”窗口按“File”选择“New Method”,显示“New Method”窗口。4.4.4 在“New Method”窗口按“Type”,选择“GPC”按“OK”加以确认。4.4.5 在“Review Data”窗口按“View”选择“GPC Paramet

8、res”，窗口下出现参数表。4.4.6 在参数表中“GPC Technique”中选择“Universal Calibration”、“Fit Type”选择“1st Order”；“X exis”选择“Volume(ml)”；“Flow Rate”选择流量(ml/min)；V0、Vt填写体积（ml）。4.4.7 用光标划定积分区间，按“Calibrate”，积分完毕峰变绿，上部显示分子量。按“NEXT”图谱转为下一个标样，同上法积分。待全部标样积分完毕后，“NEXT”变暗。4.4.8 在“Review Data”窗口按“Windows”，选择“Clibration Curve”，显示“GPC

9、 Clibration Curves”窗口。4.4.9 在“GPC Clibration Curves”窗口，显示方法名（Untiled），K、a值，普适校正曲线方程，相关系数，标样表和校正曲线图。按“File”选择“Save Calibration”，显示“Processing Method Save As”窗口。4.4.10 在“Processing Method Save As”窗口，取方法名，按“OK”加以确认。该窗口自动退出。4.4.11 在“GPC Clibration Curves”窗口，显示刚起的方法名。按“File”选择“Exit”退出该窗口。4.4.12 在“Review

10、Data”窗口，按“File”选择“Exit”退出该窗口。此时校正曲线已经保存，可以用于计算。4.5 分子量和分子量分布范围的计算药业有限公司标 准 操 作 规 程题 目Waters高效液相色谱仪操作规程编 号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 4 页4.5.1 在“Project”窗口的样品表中选择样品图谱文件，用光标点黑加以选择。4.5.2 在“Tools”图标群中按“Review”图标，进入“Review Data”窗口。4.5.3 在“Review Data”窗口中按“File”选择“Open Method”，显示“Processing Method Open”窗口。4.5.4

11、在“Processing Method Open”窗口，选择方法（即校正曲线），按“OK”加以确认，该窗口自动退出。4.5.5 用光标划定积分区间，峰变绿，按“Quantitate”，积分完毕，峰上部显示Mp值，按“View”选择“Result Table”，下部显示结果表。4.5.6 按“File”选择“Save Result”，以保存计算结果。4.5.7 按“Windows”选择“Molecular Weight Distribution”,显示分子量分片表和分布图，按“File”选择“Exit”退出该窗口。4.5.8 在“Review Data”窗口中，按“File”选择“Exit”退出

12、该窗口。4.5.9 在“Project”窗口“View”图标群中，按“Result”图标，显示结果表，在“Tools”图标群中，按“Print”图标，显示“Bacckground Report Genertor”窗口，选择报告打印方式，按“OK”加以确认，该窗口自动退出，打印机开始打印报告。5 W486紫外-可见检测器操作程序5.1 系统进入5.1.1 依次打开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。5.1.2 同4.1.2至4.1.5进入“Project”窗口。5.1.3 检测器电源接通后，自动校正，显示屏出现“CAL”，自检过程约需3min。如自检通过，则显示吸光度值和上次关机前最后

13、输入的波长；如自检失败，则显示错误代码。5.1.4 检测器自检通过后，预热30min再进行检测。5.2 进样药业有限公司标 准 操 作 规 程题 目Waters高效液相色谱仪操作规程编 号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 5 页5.2.1 在“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“486b”。5.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检，(检测器自检必须已经通过)。5.2.3 操作同4.2.3至4.2.4，选择“486b”。5.2.4 操作同4.2.5，调节泵的流量。5.2.5 双击“486”图标，

14、进入“486”窗口，设定各种参数。如波长(190600nm)、AUFS、Filter Time、自动回零等。在更换泵和色谱柱中的流动相时，将灯设置为“Lamp Off”以节约灯的寿命；按“OK”退出。5.2.6 按“Set Up Instument”图标，出现询问窗口，按“OK”加以确认，灯自动关闭。在更换流动相约50ml后，再次进入“486”窗口，将灯设置为“Lamp On”,确认后，按“Baseline Monitor”图标，监控基线。基线平稳后进样。5.2.7 进样并记录图谱，操作同4.2.9至4.2.11。5.3 图谱的处理和计算5.3.1 同4.5.1在Project”窗口的样品表中选择图谱文件。5.3.2 同4.5.2至4.5.6进行计算。6 注意事相6.1 流动相、供试品必须用0.45m滤膜过滤以除去不溶性微粒；流动相用真空法或超声波法脱气。流动相必须符合色谱纯要求。6.2 改变流速时，不宜过快，以免柱压剧烈波动，使柱床受损，降低柱效。6.3 运行中，经常用纯水冲洗Waters510泵的冲洗孔，以减少盐结晶对密封圈的腐蚀。6.4 柱压发生剧烈波动时，应中止实验，关闭仪器，查出原因后再开始实验。6.5 Watet486检测器灯的寿命较短，不检测样品时可以按“LAMP”键关闭灯，在进样前30mi