临床微生物室常用培养基的制备标准操作程序文件

1、临床微生物室常用培养基的制备标准操作程序文件1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7.6,过滤分装121C,高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7.6）,加热使其溶解待冷至45-50C,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升，轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。用途：1.一般棉拭子均接种此培养基。2.尿液，脓液3.分离细菌标本用。3、基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白月东10克牛肉膏5克氯化钠5克水1

2、000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH$正PH至7.6,过滤分瓶，121c高压灭菌，20分钟备用。用途：1作耐药试验，增菌用分装小管。4作普通琼脂斜面。4、血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸相当于10mg/毫升）1g%1毫升3 MgSO4相当于0.493/100毫升49.3%1毫升4枸椽酸钠3g制法：1将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。2取灭菌1,4号混合液用无菌法加入PABAMgSO4再分管，行无菌试验三天方可使用。用途：作血，骨髓培养用。5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白月东10克乳糖10克0.5

3、%美兰溶液20毫升1000毫升使溶解，校正PH7.4过滤，补足失水,加入2%尹红溶液20毫升，0.5峨兰溶液20毫升,右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属,6、罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2.4克枸椽酸钠0.6克纯甘油（丙三醇）12毫升马铃薯粉30克2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。2鸡蛋用75%酉精泡30分钟， 灭菌法打蛋， 倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。3将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。4间歇灭菌第一次90C1小时，第二次80c半小时，第三次80c

4、半小时（或放85C烤箱内连续二次）。质控标准：1灭菌试验合格。氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升制法：将蛋白月东，氯化钠琼脂称好，加水（115C高压20分钟），冷却至50c左也作菌群调查。硫酸镁0.24克天门冬素3.6克水600毫升鸡蛋1000毫升（约3公斤）2接种结核杆菌要求两星期生长良好。用途：作结核分枝杆菌培养用。7、结核半固体培养基成份：磷酸氢二钠19克动物血清100毫升琼脂1.5克（80小时用甲醇去脂）加动物血清100毫升制法：1除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。22分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121c半小时灭菌。3待冷后无菌法加无

5、菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。4去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37C温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。质控标准：1无菌实验合格。2琼脂硬度合适而清亮。3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。用途：培养结核杆菌用。8、亚硫酸钾血琼脂平板成份：琼脂基础100毫升10%葡萄糖2毫升1%亚硫酸钾4.5毫升绵羊血10毫升制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%t萄糖2毫升与1%亚硫酸4.5毫升混合后倒入无菌平板，凝固后存冰箱备用。质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑

6、制生长。用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。9、米培养基磷酸二氢钾2.5克天门冬素5克1%孔雀绿1.5克甘油20毫升吐温80（10%5毫升水1000毫升1%孔雀绿0.78毫升吐温80（10%5毫升成份：白米20克水1000毫升琼脂20克吐温8010毫升制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。3加琼脂20克，吐温-8010毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升）121c半小时，消毒备用。质控标准：1灭菌。2要求清亮。3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜抱子。用途：培养白色念珠菌用。10、蛋白月东水培养基成份：蛋白月东1

7、克氯化钠0.5克水加至100毫升PH调至7.8制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7.6分装消毒备用。质控标准：1放置37c无菌生长。2接种大肠杆菌24小时生长良好。3可作中国兰平板基础液。可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白月东）。0.5%PABA104升酵母浸液10毫升0.2克（2%滤）*酚红0.4%6毫升水1000毫升*:作大BB,小BB时，不要加酚红和琼脂。制法：1、除PABA硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7.4,包扎好，高压,11、血培养基成份：蛋白月东10克氯化钠5克枸椽酸钠3克牛肉膏5克葡萄糖3克MgSO4。7H2O20毫升2、调好PH后再加酚红。3、硫酸镁、PABM外无菌再

8、加入（亚细，小BB）12、沙氏培养基成份：蛋白月东1克水100毫升琼脂1.5克（琼脂粉1克为葡萄糖或麦芽糖4克制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115c20分钟。2趁热斜好，凝固备用。质控标准：1无菌试验合格。2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。用途：作分离培养霉菌用。注意：1接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酉精让干后再接种于含12.5嗑（霉素沙氏斜面关H二I.o2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。13、肉渣培养基成份：牛肉渣牛肉浸液（牛肉膏）制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏

9、汤（PH7.6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0.5厘米（不加也可），121C高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。用途：用于厌氧菌培养。注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。14、单糖发酵管培养基（半固体）成份：PH7.6-7.8蛋白月东水1000毫升（0.3克/100毫升）1.2%酚红液0.4毫升琼月旨0.4-0.5克10%糖或醇10毫升制备：把蛋白月东水，琼脂加热溶解，然后加1.2嫩红液0.4毫升，10%t10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115c高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各

10、类糖或醇类标签备用。质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。15、明胶培养基成份：肉浸液1000毫升（牛肉浸膏5克）明胶12克制法：100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7.2,分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80c30分钟，连续3日，或者108c高压20分钟，冷却，贮存备用。15-1、碱性蛋白月东水成份：蛋白月东20克氯化钠5克硝酸钾0.1克结晶碳酸钠（NaclCO3.12H2Q0.2克水1000毫升制法：将蛋白月东，Nacl,硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DWK校正P

11、H8.4分装试管,121C高压灭菌15分钟后备用。用途：用于霍乱弧菌培养。16、葡萄糖蛋白月东水（MV用）成份：蛋白月东5克葡萄糖5克K2HPO45克水1000毫升制法：将上述称好溶解分装试管，调PH7.4高压灭菌115c灭菌20分钟，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管标准：灭菌试验合格。接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。用途：作鉴别肠道杆菌用。17、枸椽酸盐培养基成份：磷酸二氢镂0.1克硫酸镁0.02克磷酸氢二钾0.1克枸椽酸钠0.23-0.5克（0.36）氯化钠0.5克琼脂1.5克0.5峨麝香草酚兰2毫升（调PH6.8再加）制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6.

12、8,然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固后备用。标准：1、灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。2、接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。3、接种产气杆菌，培31?呈深兰色。用途：作鉴别大肠杆菌用。18、双糖铁培养基成份：下层：蛋白月东1克氯化钠0.5克葡萄糖0.2克琼脂0.3-0.5克水100毫升将上述物质混匀调PH7.6后加1.2%B红0.4毫升上层：蛋白月东1克氯化钠0.5克乳糖1克硫代硫酸钠0.03克硫酸亚铁0.02克琼脂1克水100毫升制法：1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。2制上层时，先将蛋白月东水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫

13、酸钠，加热溶解PH8.1,再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112c消毒15分钟）。3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。19、尿素培养基成份：蛋白月东0.1克氯化钠0.5克磷酸二氢钾0.2克尿素0.2克（或10%2毫升）葡萄糖0.01克（或10%t萄糖0.1毫升）H2O100毫升酚红（0.2%）0.4毫升制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7.2过滤,15磅高压灭菌15分钟.2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升.3配制10%W萄糖（灭菌）每100毫升加0.1毫升.4分装小试管待用.标准：1灭菌试验合格.2接种变形杆菌24小时呈红色.用途：鉴定变形杆菌用.20、胆盐中性红琼脂制法:将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白月东琼脂中，待冷至50-60C时，加入1对性红液2.5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用.*:1%冲性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升21、丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）成份：丙二酸钠0.3克酵母浸膏0.1克