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文档简介
1、实验二实验二 蛋白质的比色定量分析蛋白质的比色定量分析 考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法实验目的实验目的熟悉分光光度计的基本原理和使用方法熟悉分光光度计的基本原理和使用方法掌握利用考马斯亮蓝定量分析蛋白质的方法掌握利用考马斯亮蓝定量分析蛋白质的方法思考题思考题1.考马斯亮蓝考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋自质含量的原理是什么?法测定蛋自质含量的原理是什么? 还有哪些蛋自质定量法?还有哪些蛋自质定量法? 2.考马斯亮蓝法测定蛋自质含量时,应该注意些什么?考马斯亮蓝法测定蛋自质含量时,应该注意些什么?实验器材实验器材 762分光光度计 主要试剂主要试剂 一、制定标准曲线一、制定标准曲线常量法标准曲线常量法
2、标准曲线实验操作实验操作试管编号试管编号0123451mg/ml标准蛋白溶液标准蛋白溶液(ml)0.00.010.020.030.040.05生理盐水生理盐水(ml)0.10.090.080.070.060.05考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝试剂(ml)各各5ml摇匀,摇匀,1h内以内以0号管为空白对照,在号管为空白对照,在595nm处比色处比色OD595nm取取6支支10ml干净试管干净试管 按下表取样,混匀,放置按下表取样,混匀,放置2min。在。在595nm 下比色,纪录数据。以下比色,纪录数据。以OD值为纵坐标、标准蛋白含量值为纵坐标、标准蛋白含量mg/ml为横坐标作图,得到标准曲线。由此标
3、准曲线,根为横坐标作图,得到标准曲线。由此标准曲线,根据测出的未知样品的据测出的未知样品的OD值,即可查出未知样品的蛋白含量。值,即可查出未知样品的蛋白含量。制备待测样品:已准备好。制备待测样品:已准备好。二、未知样品蛋白质浓度测定二、未知样品蛋白质浓度测定测定:取测定:取1 支支10mL 试管,按下表取样。试管,按下表取样。管管 号号1待测样品提取液(待测样品提取液(ml)0.1考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250试剂(试剂(ml)5OD595nm蛋白质浓度(蛋白质浓度(mg/ml ) 测定中,蛋白测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,实验证明此复合物的吸附量可以忽略。测定结束后,上,实验证明此复合物的吸附量可以忽略。测定结束后,可用乙醇将比色杯壁上的蓝色洗干净。可用乙醇将比色杯壁上的蓝色洗干净。本卷须知本卷须知计算结果计算结果 OD595nm值对应
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