红枣多糖提取分离工艺的优化pdf

1、工艺技术食品科学2006, Vol. 27, No. 03149红枣多糖提取分离工艺的优化陈国梁，张金文，陈宗礼，张向前（甘肃农业大学生命科技学院，甘肃兰州；甘肃农业大学农学院，甘肃兰州；延安大学生命科学学院，陕西延安）摘要：采用正交设计法研究了提取温度、料液比、提取时间三因素对红枣提取的影响。初步筛选出优化水平组合为。同时对所得多糖经红外光谱、紫外光谱、纸层析法对其组成进行分析，并从脱色、除蛋白等方面对其纯化作了初步研究，结果表明：所得红枣多糖为单一成分，是由木糖、半乳糖组成；活性炭脱色，法去蛋白效果明显。关键词：红枣；多糖；提取；分离工艺；正交试验，（，；，；，）：，：；中图分类号：文献标

2、识码：文章编号：（）枣（）属鼠李科（）。枣的成熟果实为中医常用的医疗保健药材，具有补中医气，养血安神之功效，主要用于脾虚食少，乏力便溏收稿日期：通讯作者等症。研究表明，红枣中的多糖成分可以提高衰老模型小鼠、活力，降低血浆、肝匀浆中水平，促进正常及免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞作者简介：陈国梁（），男，讲师，在读硕士，研究方向为植物学及生物化学。农业部发展南亚热带作物办公室中国热带南亚热带果树北京：中国农业出版社，王玲，张荣荔枝果露酒调配工艺研究酿酒科技，（）：李枚秋酒精浸提半发酵法酿制荔枝果酒酿酒科技，（）：钟秋平，阳辛风，周文化全低温酿制优质荔枝全汁酒的工业化生产工艺食品与发酵工业，（）：杨幼慧，

3、张莉萍荔枝酒发酵工艺研究酿酒，（）：邵宁华，任永功，牛树伦，等葡萄酒氧化机理与工艺改革研究山东农业大学学报，（）：蔡定域酿酒工业分析手册北京：轻工业出版社，郭其昌，郭松泉，张春娅，等葡萄酒品尝法北京：中国轻工业出版社，李从发，李枚秋，彭黎旭腰果梨酒的果香保持作用研究热带作物学报，（）：吴惠芳，吴英华防止刺梨酒氧化褐变的探讨酿酒科技，（）：李从发，李枚秋多酚在腰果梨酿酒中的作用海南大学学报（自然科学版），（）：150 2006, Vol. 27, No. 03食品科学工艺技术表影响红枣多糖提取因素水平表吞噬功能，促进淋巴细胞转化，对大、小鼠血虚模型、气血双虚模型有较好改善作用。因此，红枣多糖的提

4、取与纯化工艺优劣，直接影响红枣的开发应用显得尤为重要。但有关这方面的研究鲜有报道，本实验通过对红枣多糖的提取、纯化工艺研究并对其组成成分进行初步分析，旨在探索出红枣多糖的最佳提取分离工艺。材料与方法材料与试剂实验号水平温度（）料水比（：）：时间（）表红枣多糖提取正交（有重复）实验结果（）粗多糖量（）优质红枣，年月购于延安集贸市场，实验所用化学药品、试剂均为化学纯。仪器紫外可见光光度计（）日本岛津；红外分光光度仪（，）日本；冷冻干燥机北京博康实验仪器有限公司；低速离心机科大创新股份有限公司中佳分公司；电子天平（）上海精密科学仪器有限公司；高速组织捣碎机（）上海标本模型厂。方法多糖的提取多糖的提取

5、工艺流程：红枣洗净去核、粉碎热水浸提水提液过滤冷冻浓缩乙醇沉淀多糖石油醚脱脂冷冻干燥含量测定。将上述所得的粗多糖用滤纸包好置于索氏提取器，恒温水浴回流，挥干石油醚，得褐色粗多糖。经气相色谱分析，石油醚残留量小于。多糖含量测定多糖含量测定采用蒽酮比色法，其标准曲线制作方注：；（）；（）；。取时间）对多糖得率无明显影响。初步筛选出优化水平组合为。乙醇分级沉淀多糖及光谱分析本实验采用乙醇作为多糖沉淀剂，以：，：，：法参考文献，得线性回归方程为：（：吸光度，：糖含量）。结果与分析确定最佳提取工艺影响红枣多糖提取率的因素很多，如料水比、温（滤液：无水乙醇，）对在最优水平下所得红枣多糖浓缩溶液进行分级沉淀

6、，冷冻干燥，得到、三种粗多糖（见表），并进行紫外可见光谱与红外光谱分析，结果见图、。表不同浓度乙醇沉淀多糖结果比较体积比粗多糖量（）粗多糖得率（）比得率（）（：）（：）（：）度、时间以及提取次数等，为综合分析各因素的影响程度，本实验采用因素水平正交试验（），以确定红枣多糖提取的最佳工艺。将红枣洗净，去核，平均分成份（每份），打浆。根据因素水平表，按正交实验（）浸提。将浸提液过滤、浓缩，浓缩液加无水乙醇沉淀，静置后离心（，），将沉淀物用石油醚脱脂，冷冻干燥，得红枣粗多糖，重复实验次，正交试验设计与实验结果见表。方差分析表明：红枣多糖提取工艺各因素中因素（温度）和（料水比）对多糖得率有明显影响，而

7、因素（提注：比得率以多糖得率最高者为计。从表粗多糖得率可知，滤液与乙醇体积比为：时沉淀多糖效果最好，其次为：，最差的为：。由图、可知，、均在紫外处有一最大吸收峰，此为多糖特征吸收峰；同时，三种样品的紫外可见光图谱、红外光图谱均重叠，表明工艺技术食品科学2006, Vol. 27, No. 03表不同浓度三氯乙酸去蛋白比较（原液）151编号三氯乙酸终浓度（）吸光度（）总糖含量（）损失率（）注：损失率总多糖含量去蛋白后多糖含量。量，结果见表。由表可见，随着三氯乙酸浓度的增大，脱蛋白能力也加强，但效果不是很明显，同时多糖的损失率也在不断升高。法去蛋白取上述溶液，氯仿正丁醇（体积比：），置于具塞试管中

8、，充分震荡后，经离心，然后将水相与氯仿相分开。取水相溶液置于石英比色皿中，测定处吸收值，测毕将溶液倒回试管中。将水相再加入相当于其体积的氯仿正丁醇溶液，重复上述过程，至光吸收值基本不变。将样品溶液与氯仿正丁醇溶液体三者为同一物质，。积比换为：、：、：，重复此操作，结果见表。从表可见，从脱蛋白结果来看，多糖溶液与试剂的体积比：，反复脱次效果最佳，但多糖损失率最高。因此，在实践中应根据需要进行脱蛋白的条件选择。粗多糖脱色由于红枣多糖提取液颜色呈深褐色，故脱色就成为制备纯多糖的首要问题。我们采取了三种方法来比较脱色效果。采取双氧水脱色时，效果不错，但会引起糖分子氧化变质；而采用乙醇和石油醚回流的方法

9、，提取液的颜色呈褐色，说明多糖溶液中的色素主要是水溶性的；而用活性炭脱色时，提取液颜色明显变淡，但会造成多糖损失，故通过实验选取一较佳的活性炭脱色条件很有必要。取粗多糖定溶至，取份（每份），多糖粗品的纯化石油醚脱脂将上述所得的粗多糖用滤纸包好置于索氏提取器，恒温水浴回流，挥干乙醚，得褐色粗多糖。去蛋白去除多糖中蛋白质的方法有法，三氯乙酸、鞣酸法等，我们采用了几种方法来除蛋白质。结果采用鞣酸法，由于鞣酸本身有颜色，且在紫外光下有强烈吸收，效果不好；而用法及三氯乙酸法效果不错，但均会造成多糖损失，故通过实验选取一较好的去蛋白方法。准确称取多糖，定溶至，用于以下实验。三氯乙酸法去蛋白取该溶液加入不同

10、体积的三氯乙酸（），使终浓度如表所示，摇匀静置过夜，离心（，），取上清液测吸光度及糖含表法不同处理方式对脱蛋白效果比较（原液）样品：氯仿正丁醇（）：（）总糖含量（）损失率（）注：损失率总多糖含量去蛋白后多糖含量。152 2006, Vol. 27, No. 03食品科学工艺技术按表加入一定量的活性炭，震荡（）后离心（，），取上清液观察，并采用蒽表不同浓度的活性炭脱色效果比较编号活性炭含量（）颜色变化黄色浅黄淡黄微黄无色无色总糖含量（）损失率（）邻苯二甲酸显色后将样品图谱于标准单糖样品图谱进行比较，参考斑点颜色、相对位置以及值，初步确定样品由木糖、半乳糖组成。结论由正交试验分析得红枣多糖提取工艺

11、各因素中因素（温度）和（料水比：）对多糖得率有明显影响，而因素（提取时间）对多糖得率无明显影响。初步筛选出优化水平组合为、，且温度为、料水比为：时最佳。用乙醇分级沉淀多糖时，采用浓缩液：无水乙醇（）以：效果最好，由比得率可见，二者体积比由注：损失率多糖含量去蛋白后多糖含量。酮比色法测定多糖含量，结果见表。由表可见，当活性炭用量为（）时脱色彻底，但多糖的损失也较大。多糖的鉴别与分析碘碘化钾反应取浓度为的多糖溶：增加到：时。多糖的比得率增加了。在工业生产中，可根据原材料成本和红枣多糖商品价选择合适的工艺。从几种除蛋白的方法可看出，法去蛋白效果最好，但糖损失较大，而三氯乙酸去蛋白效果没有明显，但造成

12、糖损失量小。故在实践中应根据需求进行脱蛋白条件的选择。二种脱色方法中，活性炭脱色效果明显。当活性炭用量为时，脱色最彻底，但多糖损失也较大，在生产中，可选择活性炭用量为或进行脱色。参考文献：刘玉英蒙药广枣中多糖的提取及无机元素的含量测定西北民族学院学报，：杨云，李振国，孟江，等大枣多糖的分离、纯化及分子量的测定中药现代化，（）：严慧如，黄绍华，余迎利菊糖得提取及纯化天然产物研究与开发，（）：贵州农学院生物统计附试验设计北京：农业出版社，何华，焦庆才，等生物药物分析北京：化学工业出版社，徐任生天然产物化学北京：科学出版社，吴东儒糖类的生物化学北京：高等教育出版社，李部昌，吴东儒，陶乐平，等天门冬多

13、糖的分离纯化及其部分理化性质安徽大学学报，（）：中国科学院上海药物研究所中草药有效成分提取与分离（第二版）上海：上海科学技术出版社，液加入碘碘化钾溶液，观察颜色变化。以蒸馏水作阴性对照，淀粉溶液（）作阳性对照。结果表明，多糖溶液碘碘化钾反应呈阴性。茚三酮反应取浓度为的多糖溶液，加入的茚三酮乙醇溶液，摇匀，沸水浴，冷却，观察颜色变化。以蒸馏水作阴性对照，甘氨酸溶液作阳性对照。结果表明，多糖溶液的茚三酮反应呈阴性。反应取浓度为的多糖溶液，加入滴试剂，摇匀，将试管倾斜，沿试管壁慢慢加入浓硫酸，竖直试管，观察浓硫酸和糖溶液交界面颜色变化。以蒸馏水作为阴性对照，淀粉溶液（）作为阳性对照。结果表明，多糖溶液的反应呈阳性。多糖成分分析称取干燥样品，参照文献方法进行样品水解，水解样品用毛细管点于新华一号滤纸，正丁醇：乙酸：乙醇：水（：）。作展层剂进行上