致倦库蚊酯酶活性与敌百虫敏感度对比实验

1、    致倦库蚊酯酶活性与敌百虫敏感度对比实验        摘要目的：快速敏感检测致倦库蚊对敌百虫的抗性。方法：采用酯酶活性测定技术及生物测定法。结果：实验室驯化的致倦库蚊对敌百虫抗性明显低于野外采集的，对比实验结果一致。结论：在进行大规模现场调查敌百虫抗性时，酯酶活性测定技术优于生物测定法。关键词抗性致倦库蚊敌百虫The Control Test of Esterase of C.fatigans and the Susceptibility of DipterexZou

2、 Ya-ding(Guizhou Provincial Institute of Parasitic Diseases,Guiyang 550004)AbstractSolve the resitance of the high-speed and sensitive Dipterex in scene.The esterase activity determination technology and the method of bioassay of activation.The result showed that the anti-Dipterex of C.fatigans in l

3、aboratoy was obviously lower than that of the field ones;The control result of test was the same.The esterase activity determination technology was better than the bioassay for living investigation of anti-dipterex in the large scale.Key wordsResistanceC.fatigansDipterex利用致倦库蚊体内羧酸酯酶活力的高低，来判断其对杀虫剂敌百虫

4、的抗性程度，是一种快速准确的方法。在有机磷杀虫剂广泛用于害虫防制并产生抗药性的情况下，为寻找可行的现场快速实用方法，我们对致倦库蚊进行酯酶活性及敌百虫敏感度的对比实验，以便建立快速敏感的现场监测方法。1材料与方法1.1蚊虫来源蚊虫为蚊房内驯化饲养的及在玉屏、独山两县野外采集的致倦库蚊，在蚊房内产卵并饲养繁殖的后代供试。1.2实验试剂磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、-乙酸萘酯、固兰盐B、冰醋酸、丙酮、敌百虫等。1.3方法1.3.1滤纸法500ml搪瓷盆3个，A盆加pH6.5的磷酸盐缓冲液100ml，底物10ml；B盆加蒸馏水100ml，固兰盐B300mg；C盆加配好的固定液200ml。用吸管捕捉未吸血雌

5、蚊，每次处理810只，用乙醚麻醉，逐个排列于平板玻璃上，用微量注射器在蚊体侧滴注蒸馏水15l，用圆头玻棒将蚊虫磨碎均匀后，立即将玻棒同吸附水分轻压在滤纸上。将做好的滤纸放入A盆中90秒取出，用洁净滤纸吸去多余水份，然后放入B盆中1分钟取出，再放入C盆中数分钟，取出待水分蒸发，根据颜色深浅判断酯酶活力高低。我们将蚊虫体液显示无色和淡色者定为低酯酶活力组，紫色和深紫色者定为高酯酶活力组(表1)。1.3.2光电比色法用单个未吸血成蚊，加3ml 0.04M pH7.0磷酸盐缓冲液，在匀浆器中充分研磨。上述酶原中加1ml 3x10-4M -乙酸荼酯，2225保温5分钟，加入0.5ml显色剂，待显色稳定后

6、，以每分钟3 500转离心1分钟，取出上清液用721型分光光度计，在波长600um范围内测出每只雌蚊的光密度(0.D/雌蚊)，结果见表2。1.3.3生物测定法选择发育良好、体态整齐、大小均匀的龄幼虫作测试材料，以丙酮作溶剂配成所需系列浓度药液，加入200ml脱氯清水中，每一浓度中吸入蚊幼虫50100条，24小时后检查死亡数，计算死亡率，并用Abbott公式校正，再以机率分析法求出半数致死浓度(LC50)，结果见表3。2结果根据酯酶活性的大小在蚊虫总数中的百分率与抗性的规律性关系(表1)，以高酯酶活力组(独山县)致倦库蚊所占百分率最高，为79.0%，玉屏县为61.7%(两县均超过50%)，实验室

7、为45.2%(均按紫色、深紫色百分率合计)，说明独山、玉屏两县致倦库蚊对敌百虫的抗性高于实验室饲养。2说明，独山县每只雌蚊光密度百分率>0.7的所占比例最高，为64.2%；玉屏县为51.0%(两县均超50%)；实验室所占比例最低，仅为13.5%。两种方法对敌百虫抗性的结果一致。表3结果显示，独山县致倦库蚊LC50为2.09ppm，玉屏县为1.38ppm，实验室为0.21ppm，分别是上海昆虫研究所SEN(敏感)品系(0.097ppm)的21.5倍、14.2倍和2.2倍。表1滤纸法酯酶活性测定结果地点低酯酶活力组高酯酶活力组实验蚊数无色百分率(%)淡紫色百分率(%)合计(%)紫色百分率(%

8、)深紫色百分率(%)合计(%)实验室 12 8.3 6746.554.8 6343.8 2 1.445.2144玉屏县004638.371.0359.22.52.561.7120独山县41.84319.221.014564.73214.379.0224 表2光电比色法光密度百分率地点每只雌蚊光密度百分率(%)0.30.310.70.7实验室086.513.5玉屏县5.044.051.0独山县0.635.264.2表3不同地区致倦库蚊幼虫对敌百虫的敏感度地点LC50(ppm)Y=a+bx95%可信限2实验室0.21-0.17+2.23x0.170.251.04玉屏县1.38-0.11+1.68x0.871.380.33独山县2.09-1.84+2.06x1.712.561.293讨论三种方法测定结果一致，均说明独山县致倦库蚊对敌百虫的抗性高，玉屏县次之，实验室的最低。比较3种方法，滤纸法较光电比色法和生物测定法简单、快速，每人每天可以完成200个以上的蚊媒测定，是一种用于现场蚊媒抗性初筛较为实用的方法。光电比色法所需仪器较复杂、精密，实验温度要严格掌握，但结