工业微生物育种诱变剂课件

1、工业微生物育种诱变剂第五章第五章 工业微生物育种诱变剂工业微生物育种诱变剂本章内容：本章内容：化学诱变剂化学诱变剂物理诱变剂物理诱变剂生物诱变剂生物诱变剂工业微生物育种诱变剂2 诱变诱变：通过人为的方法，利用物理、化学因素处理微：通过人为的方法，利用物理、化学因素处理微生物以引起突变，这一过程称为生物以引起突变，这一过程称为诱发突变诱发突变。工业微生物育种诱变剂工业微生物育种诱变剂4 工业微生物育种诱变剂5 工业微生物育种诱变剂6 在在DNADNA复制过程中取代正常碱基，整合进复制过程中取代正常碱基，整合进DNADNA分子分子 它们产生异构体的频率高，出现碱基错配它们产生异构体的频率高，出现碱

2、基错配的概率也高的概率也高碱基类似物是如何提高突变频率的碱基类似物是如何提高突变频率的? ? 工业微生物育种诱变剂（一）碱基类似物的诱变机制（一）碱基类似物的诱变机制现以现以5-BU为例来分析碱基类似物的诱变机制。当胸为例来分析碱基类似物的诱变机制。当胸腺嘧啶分子结构中腺嘧啶分子结构中5位碳原子上的甲基被溴（位碳原子上的甲基被溴（Br）原子取）原子取代，就构成了代，就构成了5-BU的结构式。的结构式。 5-溴尿嘧啶（溴尿嘧啶（5-BU）的结构）的结构工业微生物育种诱变剂8 5-溴尿嘧啶（溴尿嘧啶（5-BU）的碱基配对）的碱基配对工业微生物育种诱变剂9 A A G G T BUK BUE C 酮

3、式 烯醇式工业微生物育种诱变剂10 G CG BUeG CG BUeG CA=TA=BUk A:TA: BUk A:TG BUeA:TG CG BUe G CA=T5-BU掺入错误掺入错误A: T G C工业微生物育种诱变剂由于由于5-BU5-BU的诱变作用是在的诱变作用是在DNADNA复制过程中实现的，因复制过程中实现的，因此，处在静止或休眠状态的细胞是不适合的。此，处在静止或休眠状态的细胞是不适合的。细菌采用对数期的细菌，霉菌、放线菌采用孢子，但细菌采用对数期的细菌，霉菌、放线菌采用孢子，但要进行前培养，使孢子处于萌动状态，并要加大要进行前培养，使孢子处于萌动状态，并要加大5-BU5-BU

4、的浓度，处理过程要进行振荡培养。的浓度，处理过程要进行振荡培养。工业微生物育种诱变剂12 工业微生物育种诱变剂13 A 2AP 2AP* GT T C C工业微生物育种诱变剂（二）碱基类似物的诱变处理方法（以（二）碱基类似物的诱变处理方法（以5-BU为例）为例）5-BU是白色结晶粉末，能溶于水或乙醇。诱变处理方法如下：是白色结晶粉末，能溶于水或乙醇。诱变处理方法如下：1.单独处理单独处理新鲜斜面的细菌新鲜斜面的细菌转接到前培养的液体培养基中转接到前培养的液体培养基中培养培养到对数期到对数期离心除去培养液离心除去培养液加入生理盐水或缓冲液加入生理盐水或缓冲液饥饿培养饥饿培养810小时小时加入加入

5、5-BU到培养液中，使最后的到培养液中，使最后的处理浓度为处理浓度为2540g/ml,混合均匀混合均匀取取0.10.2ml菌悬液菌悬液加入到琼脂平板上涂布培养加入到琼脂平板上涂布培养在适宜温度下，使之在生长在适宜温度下，使之在生长过程中诱变处理过程中诱变处理培养后挑取单菌落，进行筛选。培养后挑取单菌落，进行筛选。工业微生物育种诱变剂真菌、放线菌孢子，则要提高真菌、放线菌孢子，则要提高5-BU的浓度（的浓度（0.11mg/ml），），加到孢子悬液后，进行振荡培养数小时加到孢子悬液后，进行振荡培养数小时(一般一般612h)分离分离于平皿于平皿适温培养适温培养挑取单菌落，进行筛选。挑取单菌落，进行筛

6、选。2.与辐射线复合处理与辐射线复合处理 据报道，如果菌体先用据报道，如果菌体先用5-BU等碱基类似物进行处理，等碱基类似物进行处理，使它们首先渗入到使它们首先渗入到DNA分子中，然后用辐射线照射，诱变分子中，然后用辐射线照射，诱变效果会比单独使用辐射线更好。因此，碱基类似物也是一效果会比单独使用辐射线更好。因此，碱基类似物也是一种辐射诱变的增敏剂。种辐射诱变的增敏剂。工业微生物育种诱变剂16 （a a）亚硝酸（）亚硝酸（b b）羟胺（）羟胺（c c）甲基磺酸乙酯（）甲基磺酸乙酯（d d）N-N-甲基甲基-N-N-硝基硝基-N-N-亚硝基胍亚硝基胍 工业微生物育种诱变剂17 工业微生物育种诱变

7、剂NoImageNoImage18 亚硝酸的脱氨基作用及其诱发的突变亚硝酸的脱氨基作用及其诱发的突变 工业微生物育种诱变剂19 HNO2 A H G G A A T C C C U T HNO2 A:T GC工业微生物育种诱变剂 亚硝酸的处理方法亚硝酸的处理方法 试剂的配制试剂的配制（1）1mol/LpH4.5醋酸缓冲液醋酸缓冲液（2）0.1mol/L亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液（3）0.07mol/LpH8.6磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液2.处理方法（以处理浓度处理方法（以处理浓度0.025mol/L为例）为例） 取孢子悬液取孢子悬液1ml，pH4.5醋酸缓冲液醋酸缓冲液2ml及及0.1mol/

8、L亚硝酸钠溶亚硝酸钠溶液液1ml，最后处理浓度为，最后处理浓度为0.025mol/L。于。于2526保温保温1020min，加入，加入0.07mol/L、pH8.6的磷酸氢二钠溶液的磷酸氢二钠溶液20ml，使，使pH下降至下降至6.8左右，以终止反应。稀释分离于平板。左右，以终止反应。稀释分离于平板。工业微生物育种诱变剂 如果是处理细菌，亚硝酸最后浓度以如果是处理细菌，亚硝酸最后浓度以0.05mol/L为例：为例：将将斜面新鲜菌体移入肉汤培养基，适温培养到对数期，将培养斜面新鲜菌体移入肉汤培养基，适温培养到对数期，将培养液进行离心，弃去上清液，用生理盐水洗涤。液进行离心，弃去上清液，用生理盐水

9、洗涤。pH4.5醋酸缓醋酸缓冲液和冲液和0.1mol/L硝酸钠溶液硝酸钠溶液1:1浓度加入沉淀的菌体中，使浓度加入沉淀的菌体中，使之悬浮。于之悬浮。于3537处理处理510min、加入、加入5倍的倍的pH8.6的磷的磷酸氢二钠溶液，使酸氢二钠溶液，使pH下降到下降到6.8。取一定量进行后培养。取一定量进行后培养1.52h。然后稀释分离于平板上。然后稀释分离于平板上。注：在亚硝酸处理菌体或孢子时要严格控制好温度，注：在亚硝酸处理菌体或孢子时要严格控制好温度，否则会影响诱变效果。否则会影响诱变效果。工业微生物育种诱变剂NoImageNoImage22 工业微生物育种诱变剂羟胺的诱变机制羟胺的诱变机

10、制改变了结构的改变了结构的胞嘧啶胞嘧啶工业微生物育种诱变剂 根据诱变机制，羟胺不能使突变回复，即不能使根据诱变机制，羟胺不能使突变回复，即不能使A:T G:C转换，进行逆向突变。转换，进行逆向突变。 由于羟胺是诱发由于羟胺是诱发G:C A:T的专一性诱变剂，因的专一性诱变剂，因此，可以用来鉴别突变体是此，可以用来鉴别突变体是A:T G:C还是还是G:C A:T转换。转换。 羟胺的处理方法：羟胺的处理方法：常用浓度为常用浓度为0.15%，可直接，可直接在溶液中处理，时间在溶液中处理，时间12h，然后分离培养。但一般，然后分离培养。但一般都加到琼脂平板或振荡培养基中，然后接入孢子或都加到琼脂平板或

11、振荡培养基中，然后接入孢子或细菌，在适温下培养，生长过程中处理，所用浓度细菌，在适温下培养，生长过程中处理，所用浓度比直接处理时低些。比直接处理时低些。工业微生物育种诱变剂烷化剂是诱发突变中一类相当有效的化学诱变剂，烷化剂是诱发突变中一类相当有效的化学诱变剂，这类诱变剂具有一个或多个活性烷基，它们易取代这类诱变剂具有一个或多个活性烷基，它们易取代DNA分子中活泼的氢原子，直接与一个或多个碱基起烷化反分子中活泼的氢原子，直接与一个或多个碱基起烷化反应，从而改变应，从而改变DNA分子结构，引起突变。分子结构，引起突变。双功能烷化剂双功能烷化剂单功能烷化剂单功能烷化剂多功能烷化剂多功能烷化剂根据烷化

12、剂中活性根据烷化剂中活性烷基的数目烷基的数目亚硝基类、磺酸酯类、硫酸酯类、亚硝基类、磺酸酯类、硫酸酯类、重氮烷类、乙烯亚胺类化合物重氮烷类、乙烯亚胺类化合物硫芥子、氮芥子类等硫芥子、氮芥子类等工业微生物育种诱变剂26 烷化碱基部分烷化剂部分烷化剂部分烷化剂 和和 烷化碱基烷化碱基 甲基磺酸甲酯甲基磺酸甲酯亚硝基乙基脲亚硝基乙基脲7-甲基鸟嘌呤甲基鸟嘌呤3-甲基腺嘌呤甲基腺嘌呤O6-甲基鸟嘌呤甲基鸟嘌呤工业微生物育种诱变剂 烷化剂的诱变机制烷化剂的诱变机制烷化剂主要使通过烷化基团使烷化剂主要使通过烷化基团使DNA分子上的碱基及磷酸分子上的碱基及磷酸部分烷化，部分烷化，DNA复制时导致碱基配对错误

13、而引起突变。复制时导致碱基配对错误而引起突变。 碱基中容易发生烷化作用的是嘌呤类。其中鸟嘌呤碱基中容易发生烷化作用的是嘌呤类。其中鸟嘌呤N N7 7是最易是最易起反应的位点，几乎可以和所有烷化剂起烷化作用；甲基磺酸起反应的位点，几乎可以和所有烷化剂起烷化作用；甲基磺酸乙酯主要使嘌呤乙酯主要使嘌呤N N7 7烷基化。烷基化。 工业微生物育种诱变剂 其次引起烷化的位点是鸟嘌呤其次引起烷化的位点是鸟嘌呤N N3 3、腺嘌呤、腺嘌呤N N2 2、腺嘌、腺嘌呤呤N N7 7和胞嘧啶和胞嘧啶N N3 3。这些位点引起碱基置换的仅占烷化。这些位点引起碱基置换的仅占烷化作用的作用的10%10%左右。因此，由这

14、些位点改变所引起的突变左右。因此，由这些位点改变所引起的突变仅是少数。仅是少数。 此外，此外，DNADNA分子中比较多的烷化位点是鸟嘌呤分子中比较多的烷化位点是鸟嘌呤O O6 6、胸腺嘧啶胸腺嘧啶O O4 4，这些可能都是引起突变的主要位点。，这些可能都是引起突变的主要位点。 工业微生物育种诱变剂 如果鸟嘌呤如果鸟嘌呤N7等位点被烷化后，它和核糖结合键发生水解等位点被烷化后，它和核糖结合键发生水解反应，引起鸟嘌呤从反应，引起鸟嘌呤从DNA分子上脱落下来，使分子上脱落下来，使DNA链上碱基空链上碱基空缺，在以后的复制过程中其它游离碱基有可能错误掺入。缺，在以后的复制过程中其它游离碱基有可能错误掺

15、入。GCGC就可能变为任何碱基对就可能变为任何碱基对 G:CA:T转换及转换及G:CC: G或或G:CT: A 颠换而导致颠换而导致突变。突变。 工业微生物育种诱变剂 由于烷基化后的鸟嘌呤，易离子化，由原来的酮式变为由于烷基化后的鸟嘌呤，易离子化，由原来的酮式变为不稳定的烯醇式，不能和胞嘧啶配对，而是与胸腺嘧啶错误不稳定的烯醇式，不能和胞嘧啶配对，而是与胸腺嘧啶错误配对，结果发生配对，结果发生G:CA:T转换而导致突变。转换而导致突变。 工业微生物育种诱变剂 烷化鸟嘌呤的碱基配对烷化鸟嘌呤的碱基配对 工业微生物育种诱变剂 烷化剂除了以上诱变作用之外，还有可能使两个鸟嘌呤烷化剂除了以上诱变作用之

16、外，还有可能使两个鸟嘌呤N N7 7位点形成共价键，一般双功能烷化剂容易引起位点形成共价键，一般双功能烷化剂容易引起DNADNA双链间的双链间的交联，造成变异或死亡。交联，造成变异或死亡。 工业微生物育种诱变剂33 总结鸟嘌呤总结鸟嘌呤N7位点的位点的烷化作用烷化作用工业微生物育种诱变剂 烷化剂的性质烷化剂的性质 烷化剂的性质比较活泼，不太稳定，在水溶液中容易发烷化剂的性质比较活泼，不太稳定，在水溶液中容易发生水解。生水解。它们大部分半衰期很短，其长度与温度、溶液它们大部分半衰期很短，其长度与温度、溶液pH关系关系很大。因此，化学诱变剂要现用现配。很大。因此，化学诱变剂要现用现配。不少烷化剂见

17、光后，容易发生光化学反应，和水解作用不少烷化剂见光后，容易发生光化学反应，和水解作用一样，有的分解产物会失去诱变作用或具毒性。因此，保藏一样，有的分解产物会失去诱变作用或具毒性。因此，保藏时要注意避光，置棕色瓶中，放在干燥器或冰箱中保存。时要注意避光，置棕色瓶中，放在干燥器或冰箱中保存。另外，配制烷化剂溶液时，要采用合适的另外，配制烷化剂溶液时，要采用合适的pH缓冲液。缓冲液。 工业微生物育种诱变剂烷化剂名称烷化剂名称理化特性理化特性pH7pH7水中半衰期水中半衰期/h/h分子分子量量状态状态水溶性水溶性溶点或沸点溶点或沸点202030303737甲基磺酸乙酯甲基磺酸乙酯(EMS)(EMS)无

18、色液体无色液体约约8%8%沸点沸点8586/10mmH8586/10mmHg g9393262610.410.4124124乙烯亚胺乙烯亚胺(EI)(EI)无色液体无色液体易溶于水易溶于水沸点沸点56/760mmHg56/760mmHg4343亚硝基乙基脲亚硝基乙基脲(NEU)(NEU)粉红色液粉红色液约约5%5%沸点沸点53/5mmHg53/5mmHg8484117117亚硝基甲基脲亚硝基甲基脲(NMU)(NMU)黄色固体黄色固体3535103103硫酸二乙酯硫酸二乙酯(DES)(DES)无色油状无色油状物物不易溶不易溶3.343.341 10.50.5亚硝基胍亚硝基胍(NTG)(NTG)黄

19、色固体黄色固体熔点熔点118118烷化剂的某些性质烷化剂的某些性质工业微生物育种诱变剂 几种常用的烷化剂：几种常用的烷化剂： 1-1-甲基甲基-3-3-硝基硝基-1-1-亚硝基胍（简称亚硝基胍，亚硝基胍（简称亚硝基胍，NTGNTG或或NGNG或或MNNGMNNG） 为黄色结晶状物质，性质不稳定，遇光易分解，放出为黄色结晶状物质，性质不稳定，遇光易分解，放出NO，颜色由黄色变为绿色，诱变效应降低。须保存在棕色瓶中，颜色由黄色变为绿色，诱变效应降低。须保存在棕色瓶中，并在避光、干燥、低温条件下贮存。并在避光、干燥、低温条件下贮存。 NTG不溶于水，须加助溶剂，使用时现配现用。不溶于水，须加助溶剂，

20、使用时现配现用。 NTG NTG有超诱变剂之称，能使细胞发生一次或多次突变，诱变效有超诱变剂之称，能使细胞发生一次或多次突变，诱变效果好，尤其适合于诱发营养缺陷型突变株。其中处理细菌、放线果好，尤其适合于诱发营养缺陷型突变株。其中处理细菌、放线菌等微生物时，不经淘汰，就可以直接得到菌等微生物时，不经淘汰，就可以直接得到10%10%以上的营养缺陷以上的营养缺陷型突变株。而用一般诱变剂处理只能达百分之几至千分之几。型突变株。而用一般诱变剂处理只能达百分之几至千分之几。 工业微生物育种诱变剂 NTG NTG的水溶液中随着不同的的水溶液中随着不同的pHpH将产生不同的分解产物，从将产生不同的分解产物，

21、从而影响诱变效应。而影响诱变效应。当溶液当溶液pHpH低于低于5.55.5时，时，NTGNTG分解成分解成HNO2, HNO2HNO2, HNO2本身就具诱变本身就具诱变作用；作用；当溶液当溶液pHpH在在8.08.0以上时，以上时，NTGNTG会分解产生重氮甲烷会分解产生重氮甲烷（CH2N2CH2N2），对核酸起烷化作用，引起微生物突变；），对核酸起烷化作用，引起微生物突变；当溶液当溶液pHpH为为6.06.0时，时，NTGNTG本身和本身和DNADNA起烷化反应而导致突变。起烷化反应而导致突变。通常在通常在pH6.0pH6.0的条件下进行诱变处理。由于酸碱条件影响的条件下进行诱变处理。由于

22、酸碱条件影响NTGNTG的诱变效果，因此，无论是配制的诱变效果，因此，无论是配制NTGNTG溶液，还是制备均悬液都溶液，还是制备均悬液都要用适宜的缓冲溶液。常用的由磷酸缓冲液和要用适宜的缓冲溶液。常用的由磷酸缓冲液和TrisTris缓冲液缓冲液. . 工业微生物育种诱变剂1.1.取新鲜的斜面，用一定取新鲜的斜面，用一定pHpH值的缓冲液或值的缓冲液或TrisTris缓冲液洗缓冲液洗下细菌制成菌悬液。下细菌制成菌悬液。如果采用细菌细胞或丝状菌孢子如果采用细菌细胞或丝状菌孢子（真菌或放线菌）须进行前培养，可用有关培养基代替（真菌或放线菌）须进行前培养，可用有关培养基代替以上缓冲液，孢子培养时间控制

23、在大部分孢子处在萌动以上缓冲液，孢子培养时间控制在大部分孢子处在萌动阶段，经离心、洗涤，用缓冲液制成悬液，浓度约在阶段，经离心、洗涤，用缓冲液制成悬液，浓度约在10106 6-10-107 7ml-1ml-1；NTGNTG的诱变处理方法：的诱变处理方法：工业微生物育种诱变剂2.2.配制配制NTGNTG母液：母液： 由于由于NTGNTG不溶于水，配制需加助溶剂甲不溶于水，配制需加助溶剂甲酰胺或丙酮少许，然后加缓冲溶液，其比例为酰胺或丙酮少许，然后加缓冲溶液，其比例为9 9：1 1（缓（缓冲溶液冲溶液9ml9ml：NTGNTG丙酮溶液丙酮溶液1ml1ml），一般），一般NTGNTG母液浓度配成母液

24、浓度配成1mg/ml1mg/ml。使用时取母液。使用时取母液0.2ml0.2ml，加菌悬液，加菌悬液1.8ml1.8ml，NTGNTG最后最后处理浓度为处理浓度为100g/ml100g/ml。一般处理浓度随菌种不同而异，一般处理浓度随菌种不同而异，通常细菌为通常细菌为1001000g/ml1001000g/ml，而放线菌、真菌孢子为，而放线菌、真菌孢子为10003000 g/ml 10003000 g/ml 。3.3.将以上菌悬液和将以上菌悬液和NTGNTG溶液混合于一试管内，置该菌生长溶液混合于一试管内，置该菌生长适宜的温度下保温处理若干时间。适宜的温度下保温处理若干时间。工业微生物育种诱变

25、剂4.4.终止反应。终止反应。用冷的生理盐水稀释到用冷的生理盐水稀释到5050倍以上或在低温倍以上或在低温下进行离心洗涤，除去药液，加无菌水使沉淀悬浮并作下进行离心洗涤，除去药液，加无菌水使沉淀悬浮并作成一定稀释度分离于平皿。成一定稀释度分离于平皿。处理完毕后，马上把接触过处理完毕后，马上把接触过NTGNTG的器皿用的器皿用NaOHNaOH或或NaNa2 2S S2 2O O3 3浸浸泡处理。泡处理。除以上直接以溶液处理外，也可以进行如下方法诱变处理：除以上直接以溶液处理外，也可以进行如下方法诱变处理：1.1.摇瓶振荡处理摇瓶振荡处理2.2.在平皿上生长过程处理在平皿上生长过程处理工业微生物育

26、种诱变剂NTGNTG是一种强烈的致癌物质，操作时要带橡皮手是一种强烈的致癌物质，操作时要带橡皮手套，穿工作服，带口罩，用称量瓶称量，最好在套，穿工作服，带口罩，用称量瓶称量，最好在通风橱中进行。凡接触过通风橱中进行。凡接触过NTGNTG的器皿必须及时、的器皿必须及时、单独处理，例如用自来水大量冲洗或用单独处理，例如用自来水大量冲洗或用112mol/L2mol/L的的NaOHNaOH或或2%2%的的Na2S2O3Na2S2O3浸泡过夜，洗净。浸泡过夜，洗净。工业微生物育种诱变剂42 G O-6-E-G A T O-4-E-T C C T T A G G工业微生物育种诱变剂43 溴化乙锭（EtBr

27、）由美国的肿瘤研究所合成，故名。这是一些由由美国的肿瘤研究所合成，故名。这是一些由烷化剂与吖啶类化合物相结合的化合物。烷化剂与吖啶类化合物相结合的化合物。工业微生物育种诱变剂44 B嵌入到旧链上嵌入到旧链上导致插入突变导致插入突变A嵌入到新嵌入到新合成链上导合成链上导致缺失突变致缺失突变工业微生物育种诱变剂 移码诱变剂的嵌入并不导致突变，必须通过移码诱变剂的嵌入并不导致突变，必须通过DNADNA的复制才的复制才形成突变，因此这类诱变剂只能作用于生长态的细胞。形成突变，因此这类诱变剂只能作用于生长态的细胞。 分子生物学实验室中利用溴化乙锭能嵌入到分子生物学实验室中利用溴化乙锭能嵌入到DNADNA

28、分子的特分子的特性，将其作为常用的性，将其作为常用的DNADNA染料；染料； 在微生物遗传育种中溴化乙锭是酵母菌小菌落突变型的有在微生物遗传育种中溴化乙锭是酵母菌小菌落突变型的有效诱变剂。效诱变剂。工业微生物育种诱变剂46 工业微生物育种诱变剂 重视化学诱变剂的操作安全重视化学诱变剂的操作安全 化学诱变剂多数是极毒的致癌药品，在进行诱变操作化学诱变剂多数是极毒的致癌药品，在进行诱变操作后的处置以及诱变剂的保藏等方面的安全防护都是及其重后的处置以及诱变剂的保藏等方面的安全防护都是及其重要的。如有疏忽，就可能对人体健康的环境带来恶果，万要的。如有疏忽，就可能对人体健康的环境带来恶果，万万不可麻痹。

29、万不可麻痹。使用化学诱变剂一般要求避光、密封、低温、干燥等；使用化学诱变剂一般要求避光、密封、低温、干燥等；尽可能不触及人体任何部位；尽可能不触及人体任何部位；对残余物要及时进行消毒、稀释处理。对残余物要及时进行消毒、稀释处理。工业微生物育种诱变剂48 物理诱变剂是指通常使用物理辐射中的各种射物理诱变剂是指通常使用物理辐射中的各种射线，包括紫外线、线，包括紫外线、X X射线、射线、射线、快中子、射线、快中子、射射线、线、射线、微波、超声波、电磁波、激光射线和射线、微波、超声波、电磁波、激光射线和宇宙线等。宇宙线等。工业微生物育种诱变剂工业微生物育种诱变剂50 工业微生物育种诱变剂NoImage

30、NoImage51 O O UV O O H CH3 H CH3 H CH3 CH3 H N N N N O N H O N H O N H H N O Thymine Thymine Thymine dimer O O 4 5 4 5 3 6 6 2 1 Fig. 21- Production of thymine dimer by ultraviolet light irradiation. 工业微生物育种诱变剂52 工业微生物育种诱变剂53 工业微生物育种诱变剂54 工业微生物育种诱变剂55 工业微生物育种诱变剂56 工业微生物育种诱变剂57 工业微生物育种诱变剂58 工业微生物育种诱变剂59 诱变剂诱变剂 在在DNADNA上的初级效应上的初级效应 遗传反应遗传反应 碱基类似物碱基类似物 掺入作用掺入作用 ATATGCGC转换转换 羟胺羟胺 同胞嘧啶起羟化反应同胞嘧啶起羟化反应 GCATGCAT转换转换 亚硝酸亚硝酸 A A、C C的脱氧基作用的脱氧基作用 DNA