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文档简介
原理外周血 PBMC 的分离外周血各种血细胞的密度不尽相同,利用淋巴细胞分层液( Ficoll )作密度梯度离 心,使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。外周血红细胞粒细胞单个核细胞(PBMC)血小板淋巴细胞单核细胞1.0931.0921.0751.0901.0301.035Ficoll :1.077± 0.001稀 释 外 周1500rpm,20 , 30min稀释的血 浆、血小板 PBMCFicollFicoll红细胞粒细胞实验步骤1.采血,稀释(外周血:稀释液 =1: 2)2.在离心管中加入 Ficoll ,沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外 周血( Ficoll :稀释血 =1: 2)3.18, 1500r/min ,离心 30min4. 轻轻吸取 PBMC 层移入另一试管中5.加足量稀释液充分洗涤, 1800 r/min 离心 5min ,弃上清。 注意事项每毫升外周血液大约可获 1×10 6单个核细胞Ficoll 应适量,外周血应充分稀释 温度直接影响到 Ficoll 的比重和分离效果 在 Ficoll 上加入稀释外周血时,应缓慢加,以免冲散界面 吸取单个核细胞层
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