LASIK术后组织病理实验研究

1、    LASIK术后组织病理实验研究王宏彬胡泳霞张薇向里南洪明理李明铭 摘要目的研究LASIK治疗10.00D兔眼的组织病理学损害。方法对10只新西兰大白兔右眼行PRK，左眼行LASIK手术范围10.0D，分别于术后10d、1、3、6mo随机选取动物摘除双眼，行光镜及电镜检查。结果LASIK术后，屈光切削区的边缘可见一圈混浊并有上皮折叠植入生长的现象，基质层胶原纤维排列规则。结论LASIK矫正高度近视虽然潜在的并发症较多，但基质层愈合反应较轻，不会造成长期的组织病理学损害。 关键词准分子激光；角膜磨镶术 Histopathological study

2、of laser in situ keratomileusis in rabbits WANG Hong BinHU Yong XiaZHANG WeiXIANG Li NanHONG Ming LiLI Ming Ming From the Department of Ophthalmology, Beijing Friendship Hospital,Beijing 10050,China Abstract Objective To investigate the histopathological change of laser in situ keratomileusis in rab

3、bits. Method We treated 10 New Zealand white rabbits with PRK(right eye),and LASIK(left eye),both treated with 10.0D. After surgery 10 days,one month,three months,half year,all eyes removed and prepared for light and electron microscopy. Results All histological investigations after LASIK showed a r

4、egular epithelial and stromal architecture. Conclusion Though LASIK have more complications than PRK, the histopathological study shows it appears especially suitable for correcting higher myopic. Key words excimer laser;keratomileusis 90年代以来，准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)已逐渐成为治疗屈光不正的一个重要手段，其对于治疗高度近视的临床研究有部分报导

5、14，动物实验研究尚报导不多。我们对兔眼进行了LASIK治疗高度近视的手术治疗，并对其结果进行了组织病理学分析。 1材料和方法 1.1实验动物新西兰大白兔10只(友谊医院动物室提供)，雌雄不限，平均体重2.5kg。术前行裂隙灯检查均无明显眼前节病变，并用超声角膜测厚仪测量角膜中央厚度(平均为398.3m)。 1.2手术方法20g . L1戊巴比妥钠(2mL . kg1)耳缘静脉麻醉后，行手术治疗。采用Kerracor116型准分子激光仪，能量密度120mJ . cm2，脉冲频率10Hz，最大切削直径7mm，先剪除第三眼睑，参照Buratto手工瓣法57，用8mm环钻打印并钻一定深度达基质浅层，

6、用手术刀及微型虹膜恢复器片一个一端蒂相连的同层间的板层角膜瓣，对于角膜瓣层间不规则者弃去不用，掀开后使用准分子激光仪于基质床上行10.00D的原位切削，复位角膜瓣，用平衡液冲洗瓣下基质床，擦干后暴露1min，活动兔眼睑，以角膜瓣无移动为准，术毕点3g . L1氟嗪酸及艾氟龙(FML)眼液。术后每日换药，观察上皮及创面愈合情况，点FML和氟嗪酸每日3次，10d后仅点氟嗪酸。于术后10d、1、3、6mo分别随机选1只动物，摘除双眼，取其角膜，分别固定于戊二醛及福尔马林中，送友谊医院电镜室和病理科检查。 2结果 (1)裂隙灯观察:术后1d全部再上皮化，刺激症状较PRK组轻，大多数兔眼混浊度为零，仅切

7、削区边缘一圈混浊;(2)光镜：所有眼中央角膜上皮细胞排列良好，在屈光切削区的边缘可见上皮细胞层的明显增厚，并有上皮折叠植入生长的现象(图1)，在切削区边缘基质不规则，可见各种形态的角膜细胞，中央角膜细胞基本正常，基质排列规则;(3)电镜：术后10d，在切削区边缘可见水肿液，上皮与下方分离(图2)。在切开区的起始处可见角膜细胞形态学的改变，细胞核固缩，核间隙增宽。在其它各个时期沿着切开区无细胞活跃的表现，角膜细胞正常，胶原纤维呈规则排列(图3)，在边缘局部观察到少许排列紊乱。 图1中央角膜上皮细胞排列良好，在屈光切削区的边缘可见上皮细胞层明显增厚，并有上皮折叠植入生长现象。 图2术后10d，在切

8、削区边缘可见水肿液、上皮与下方分离。 图3角膜细胞正常，胶元纤维全部呈持续规则排列。 3讨论 LASIK手术是近年来利用准分子激光切削组织精确性较高的优势和角膜磨镶术可切削较高度数的特点，将两者结合起来，获得的一种精确性、预测性好的屈光手术方法，其掀开角膜瓣后，在基质层中间进行切削，从而达到矫正近视的需要，故保留了前弹力层，该手术的问世，使角膜屈光手术产生了一次质的飞跃。但角膜屈光手术均会启动角膜的修复机制，威胁到角膜的透明，部分表现为角膜的混浊及屈光的回退，故有必要对其创面愈合过程进行组织病理学研究。 在准分子激光研究的初始阶段，多数人认为角膜的混浊是与基质的重塑有关8，但是，做为混浊产生的

9、原因，上皮的重要性已逐渐被人们重视。Gauthier和其同事9进行了PRK后上皮厚度的临床研究发现，在32mo内，上皮显著持续增厚，Lohman等10同样认为上皮的增生是关系到角膜透明度的一个直接的因素，另外切削的部位、深度和切削区的直径也与之有关，近视度数越高，角膜混浊及修复机制的启动就越高。前弹力层的损伤导致上皮与基质层的直接相互作用，被认为是增殖性愈合和瘢痕形成的原因。我们的试验均控制在6mo内，许多临床资料表明6mo后，屈光结果已趋于稳定。LASIK组的所有眼由于保留了前弹力层在视中央均表现为透明，在切开处边缘可见一圈轻度混浊。与人不同的是，兔子无前弹力层，我们发现兔角膜整体愈合反应均

10、较人眼略重，可能与兔角膜对外伤的敏感度与人不同有关。 我们认为，混浊产生的原因与上皮的过度增生、上皮基底膜各种组织学改变、基质的异常组成及排列有关。LASIK术后由于中央角膜上皮及前弹力层、浅层基质未受损伤，故角膜愈合反应较轻，未见明显增生异常改变，故未见角膜混浊。由于掀开了角膜瓣，在边缘处可见上皮增生折叠植入生长的现象，角膜表现为一圈混浊，可能与手工片瓣边缘较粗糙有关。随着仪器设备的不断改进，相信会获得更好的手术效果。 总之，对于治疗高度近视，从组织学上可以看出，LASIK组早期即获得了稳定，由于角膜浅层未受损伤，其仅产生很小的愈合反应，回退较少且角膜透明，故稳定性较好。但是由于手术需要掀开

11、角膜瓣，故潜在的并发症较高，如上皮植入，感染，瓣层间异物等，但是对于矫正高度近视，该手术不会造成长期的组织学损害，其角膜上皮，上皮基底膜，前弹力层和浅层基质未受损伤，故从组织学比较而言，LASIK是一种更好的选择。 作者单位：10005北京友谊医院眼科 参考文献： 1Sher NA, Hardten DR,Fundmgsland B,et al.193 nm excimer laser photorefractive keratectomy in high myopia. Ophthalmology 1994;101(9):1575 1582. 2Krueger RR, Talamo JH,

12、Mcdonald MB. Clinical analysis of excimer laser photorefractive keratectomy using a multiple zone technique for severe myopia. AM J Ophthalmol 1995;119:263 274. 3Pallikaris LG, Siganos DS. Excimer laser in situ keratomileusis and photorefractive keratectomy for correction of high myopia. J Refract C

13、oneal Surg 1994;10:498 509. 4Bas AM, Onnis R.Excimer laser in situ keratomileusis for myopia. J Refract surgery 1995;11:229 233. 5Buratto L,Ferrari M, Rama P.Excimer laser intrastromal katomileusis. Am J Ophthalmol 1992;113:291 295. 6Buratto L,Ferrari M, Genisi C. Keratomileusis for myopia with the

14、excimer laser(buratto technique):short term results. Refractive and Coneal Surgery 1993;9:130 133. 7Buratto L, Ferrari M, Genisi C. Myopic Keratomileusis with the excimer laser:one year follow up. Refractive and Coneal Surgery 1993;9:12 19. 8Fantes FE, Hanna KD, Waring GO ,et al. Wound healing after excimer laser keratomileusis (photorefractive keratectomy)in monkeys. Arch Ophthalmol 1990;108:665 675. 9Gauthier CA, Epstein D, Holden BA, et al. Epithelial alterations following photorefractive keratectomy for