W3502标准曲线的绘制及定量-4-微教材

1、仪器分析技术课程-微教材微课编号W3502微课名称标准曲线的绘制及定量所属模块可见分光光度分析技术子模块实训3.3：邻二氮菲法测定铁离子标准曲线的制作及定量关键词标准曲线；分光光度法定量； 是否通用通用 农产品 食品是否重点建设是 否微课类型讲授型；实验实训型微课形式PPT录屏+实地拍摄式教学设计模式任务驱动法教学目标1. 掌握分光光度法绘制标准溶液标准曲线的步骤及方法2. 熟悉标准曲线法定量步骤及方法教学内容知识点技能点无1.铁标准溶液测定2.excel标准曲线的绘制3.邻二氮菲法测铁的标准曲线使用及定量知识讲解1. 以邻二氮菲法测定铁离子的实验来学习标准曲线绘制及定量根据朗伯-比耳定律：A

2、=bc，当入射光波长及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。邻二氮菲法测定铁离子（标准曲线法定量）测定原理：在pH=5的条件下，Fe2+与邻二氮菲（o-ph）生成极稳定的橘红色配合物，此配合物在510nm波长处有最大的吸收值，通过朗伯比尔定律，利用铁标准溶液绘制出标准曲线后可以对未知样品中的铁离子进行定量。边学边练任务：邻二氮菲法测定微量铁，测定不同标准溶液吸光度，绘

3、制标准曲线并定量。1. 邻二氮菲法测定铁含量从铁标准溶液吸收曲线可以看出，以邻二氮菲测定铁离子，测定的适宜波长是510nm。（1）标准曲线的绘制 取50mL容量瓶6只，编号。分别吸取20 g·mL-1铁标准溶液2.0mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL于5只容量瓶中，另一只容量瓶中不加标准溶液（配制空白溶液，作参比）。然后各加5%盐酸羟胺溶液，摇匀，经2 min后，再各加5 mL1 mol·L-1NaAc溶液及3 mL1 g·L-1邻二氮杂菲溶液，以水稀释至刻度线，摇匀。放置10 min，在分光光度计上，用1 cm比色皿，在510 nm处

4、，测定各溶液的吸光度。以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（2） 未知液中铁含量的测定 吸取5ml未知液代替标准溶液，其他步骤均同上测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出5ml未知液中的铁含量，然后以每毫升未知液中含铁多少微克表示结果。2. 记录与计算试液编号标准溶液的量（mL）总含铁量（ug/ml）吸光度A12345602.04.06.08.010.0040801201802000.000 0.1950.357 0.4790.6780.831 未知液5.0122.30.4983. 标准曲线法定量由测定的未知液吸光度为0.498通过函数关系可得铁的含量为122.3g/ml。4. 实验注意事项（1）不能颠倒各种试剂的加入顺序。（2）读数据时要注意A和T所对应的数据。透射比与吸光度的关系为:A=log(I0/I)= log(1/T)；测定条件指：测定波长和参比溶液的选择。（3）最佳波长选择好后不要