调理脾胃复方对PTZ点燃癫痫模型阿片肽含量的影响

1、    调理脾胃复方对PTZ点燃癫痫模型阿片肽含量的影响        摘要：为了研究调理脾胃复方的抗痫作用，本实验采用放免法观察大鼠PTZ点燃以及服用调理脾胃复方治疗后，脑内阿片肽含量的变化。结果表明，PTZ点燃大鼠海马内亮脑啡肽(L-ENK)、-内啡肽(-EP)明显升高，强啡肽A1-13(DYNA1-13)显著降低；大脑皮层内L-ENK明显升高，DYNA1-13、-EP无明显变化。用调理脾胃复方治疗后，上述脑区L-ENK、-EP显著减少，DYNA1-13明显增加。提示癫痫

2、发作及调理脾胃复方抗痫作用可能与脑内L-ENK、-EP、DYNA1-13的变化有关。关键词：调理脾胃复方；PTZ点燃大鼠；亮脑啡肽；-内啡肽；强啡肽A1-13 The Effects of Spleen and Stomach Regulating Prescriptions on Opioid Peptide Concentration in PTZ Kindled RatsQian Huinan(钱会南),Wang Hongtu(王洪),Qi Zhijia(齐治家),et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Bei

3、jing 100029)ABSTRACT: Radioimmunologic method was used to evaluate the influence of th e complex prescription of regulating the spleen and stomach on the pentylenetetr azole (PTZ) kindled rats and changes of the opioid peptides concentration in th e brain. In the hippocampus of the PTZ kindled rats,

4、 the leu cine-enkephal in (L-ENK) and -endorphin (-EP) were increased and dynorphin A1-13 (DYN A1-13) decreased. After treated with the complex prescription, the L-ENK a nd-EP were markedly decreased, while DYNA1-13 increased. It indic ates that the epileptic attack and the antiepileptic effect of t

5、he complex prescription may relate with the changes of the L-ENK、-Ep and DYNA1-13 in the brain.KEY WORDS: Spleen and Stomach Regulating Presoription; Epil epsy; Leucine-enkephalin; -endorphin; Dynorphin; PTZ Kindled Rat 癫痫是神经系统的常见病、多发病，然而其确切的发病机理至今尚未完全阐明，目前对该病也缺少理想的根治手段。有关研究资料表明，神经肽作为中枢神经系统中的重要递质或调质

6、，在癫痫发病中起着重要作用，其中的阿片肽等肽类物质扮演着十分重要的角色，但尚未见到PTZ点燃大鼠模型脑内亮脑啡肽(L-ENK)、-内啡肽(-EP)、强啡肽A1-13(DYNA1-13)含量变化的有关报道。为探讨癫痫发病机制和中药调理脾胃复方的治疗作用，我们观察了PTZ点燃大鼠癫痫模型部分脑区L-ENK、-EP、DYNA1-13含量的变化。1材料与方法1.1材料戊四唑(PTZ)Sigma公司产品，用前以生理盐水新鲜配制成溶液。调理脾胃复方(草果、知母、厚朴、半夏、茯苓、黄芩、甘草等)，购于北京中医药大学门诊部，按乙醇提取法提取浓缩，生药含量为2g/mL，置冰箱待用。抗痫灵(Antipilepsi

7、rine,AES)，购于北京医科大学药厂，用0.5%羟丙甲基纤维素，0.1%吐温80和双蒸水配制成混悬口服液。L-ENK、-EP、DYNA1-13药盒均由上海第二军医大学提供。1.2方法SD雄性大鼠，实验开始时体重(150±10)g，购自首都医科大学实验动物中心。造模组用PTZ亚惊厥剂量，32mg/kg，每日1次，腹腔注射，持续28d，停药1周，再用相同剂量的PTZ测试，凡显示连续5次2级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准。大鼠惊厥发作评分标准：0级，没有行为上的发作；级，节律性点头或头部颤搐；级，阵挛性咀嚼；级，头部颤搐加前肢阵挛性抽搐；级，袋鼠姿势(上身直立)；级，跌倒；级，强直性惊厥

8、。正常对照组给予相同剂量的生理盐水。正常对照组大鼠10只，胃饲双蒸水2mL/(kgd)；PTZ点燃大鼠分为3组，其中模型对照组10只，胃饲双蒸水2mL/(kgd)；调理脾胃治疗组(中药组)，胃饲调理脾胃复方5g/(kgd)；AES治疗组(西药组)，胃饲抗痫灵0.5g/(kgd)；共维持28d。实验第63天，模型组PTZ点燃测试1h后，全部动物断头活杀，迅速取出全脑，沸生理盐水煮10min，将脑正中矢状切开，分离出海马、皮层，称重后加1mL1mol/LHCl制成匀浆，室温放置100min。取上清，置-70冰箱保存。测定采用放免法。严格按照说明书进行操作。2结果2.1大鼠海马内L-ENK、-EP、

9、DYNA1-13测定结果见表1。表1大鼠海马L-ENK、-EP、DYNA1-13含量变化(ng/g；±s；n=10)组别L-ENK-EPDYNA1-13模型组18.53±4.8723.47±5.032.68±0.68正常组9.45±2.19*10.82±2.57*6.10±0.95*西药组9.38±2.08*14.05±2.18*5.02±1.29*中药组10.20±2.12*12.37±1.80*4.89±1.32*注：与模型组比较，*0.05*P0.01；与正常

10、组比较P0.05 2.2大鼠大脑皮层内L-ENK、-EP、DYNA1-13测定结果见表2。表2大鼠大脑皮层L-ENK、-EP、DYNA1-13含量变化(ng/g;±s；n=10)组别L-ENK-EPDYNA1-13模型组19.11±2.843.13±0.353.44±0.66正常组8.46±1.90*2.75±0.343.50±0.68西药组9.40±1.72*2.94±0.293.59±0.74中药组10.09±1.94*3.09±0.263.65±0.57注：与

11、模型组比较*P0.01 3讨论给予动物脑内注射L-ENK、-EP可引起动物癫痫样活动，并产生持续的癫痫样放电，还可导致动物点燃发作效应1，2。脑室内注射小剂量-EP能产生“边缘性癫痫发作”，-EP还能降低PTZ诱导惊厥发作阈值，增强PTZ导致癫痫发作的敏感性3。因而有人提出ENK、-EP与癫痫发作有密切关系，属内源性致痫物质。而DYN则与上述二者的作用不同。DYN注入动物脑内可提高PTZ及六氟双乙基乙醚等致惊剂的惊厥阈值，对癫痫点燃性发作产生强烈的抑制作用，并升高海马的后放电阈值，认为DYN可能调节点燃发作的敏感性，为内源性抗痫物质4，5。王氏等报道杏仁核点燃、青霉素致痫等癫痫模型海马内ENK

12、含量显著升高，而DYN则明显下降6，7。沈氏等亦观察到，声源性惊厥易感大鼠海马、大脑皮层内ENK、-EP含量明显增加8。本实验结果与上述报道基本相符。目前中医对癫痫的治疗多侧重于熄风定痫、豁痰开窃、镇惊安神、育阴潜阳、活血化瘀等方面9，较少重视脾胃的作用。王洪教授根据内经强调脾胃为五脏枢轴的理论，结合多年临床经验，从调理脾胃入手，以草果知母汤为基础方化裁组成调理脾胃方，治疗癫痫等神志异常疾患，取得了较好疗效。通过调理脾胃，使气机调畅，不仅有利于化除痰浊，使之不再扰乱神志，又可使精微物质化生正常，营血充足，而保持神志活动正常；更为重要的是，由于脾胃气机调畅，通过其“转枢”作用，使其他脏腑气机都能

13、得到调整，从而达到治疗癫痫等多种神志异常疾患的目的。本室以往的研究表明10，11，该复方能有效对抗听源性癫痫发作，PTZ阈值大发作及点燃和极量电休克惊厥发作，未见明显毒副反应。并对生长抑素mRNA的表达有影响。本实验观察到PTZ点燃大鼠海马内L-ENK、-EP含量明显增加，DYNA1-13含量显著减少；大脑皮层内L-ENK含量亦明显升高，调理脾胃复方治疗后，上述变化被拮抗或翻转。我们认为，癫痫发作及调理脾胃复方抗痫机制可能与脑内L-ENK、-EP、DYNA1-13的变化有关。作者简介：钱会南，女，42岁，医学博士作者单位：北京中医药大学北京100029参考文献1Cain DP and Corc

14、oran ME.Epleptiform effects of met-enkephalin, -endorphin and morphine:kindling of generalized seizures and potentiation of epileptiform effe cts by handling. Brain Res，1985，338：3273362Cain DP.Intracerebral beta-endorphin,met-enkpt and morphin:kindling of seizur es and handling inuced potentiation o

15、f epileptiform effects.Life Sci,1984,34：25 32603Shlomo Yehuda.Gircadiam effects of -endorphin moletanin,DSIP,and amphala mine on pentylenetetrazol induced seizures.Peptides,1993,14：2032054Przewlok R.Shearman GT and Herz A. Mixed opioid/nor-opiod effects of dynorph in and dynorphin related peptides a

16、ffer their intrathecal injection in rats.Neur opeptides,1983,3：2332395Doules W.Bornhaus DG.Lews C,et al. Intranigral dynorphin(1-13)suppresses kind led seizures by a naloxone-insensitive maechanism.Brain Res,1987,405：3583616Mcginty JE,Kanamastu T,Obie T,et al.Amygdaloid Kindling increases enkephalin -like immunoreactivity in rat hippocampus.Neurosci Leff，1981，71：31367王布尔，程介士.大鼠海马内强啡肽1-8和亮啡肽在癫痫发作及电针的变化.中